正常对照组、吗啡组(2,5,10,20μM); 2正常对照组、吗啡组(6h,12h,24h);3 正常对照组、吗啡组(10μM)、

正常对照组、吗啡组(2,5,10,20μM); 2正常对照组、吗啡组(6h,12h,24h);3.正常对照组、吗啡组(10μM)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)。置细胞培养箱孵育。

2.细胞存活率的检测 使用MTT法检测细胞存活率。将细胞以1×104/孔的密度铺在96孔培养板内,使用不同浓度吗啡处理,然后将20μ1 MTT加入每个孔中,将培养板置于37℃孵育4小时。然后用ELISA读数仪在570nm波长下检测比色度。3.细胞凋亡的检测 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系以1×105/孔种植于铺有载玻片的12孔板中,置于细胞培养箱孵育,用吗啡及纳洛酮处理后,取出载玻片,将其用丙酮/甲醇(1:1)室温固定5分钟,然后按照TUNEL试剂盒指示进行操作检测细胞凋亡。 4. Western Blotting 使用Western Blot方法检测BV-2小胶质细胞经吗啡处理后cleaved caspase-3,caspase-3等蛋白水平的变化,用GAPDH作为实验内参。收集各组实验细胞后,使用RIPA Lysis Buffer裂解离心后用12%SDS-PAGE将样品蛋白电泳分离,然后转膜至硝酸纤维膜。将膜用5%脱脂奶粉室温封闭2小时,然后用一抗4℃孵育过夜后,再用二抗室温孵育1小时。最后暗室曝光并扫描记录结果。 5.细胞免疫荧光染色 使用细胞免疫荧光检测体外培养原代小胶质细胞经吗啡处理后cleaved caspase-3蛋白水平变化,用RCA-1作为小胶质细胞标志物。以1×105/孔种植于铺有载玻片的12孔板中,用吗啡及纳洛酮处理后,取出载玻片,将其用丙酮/甲醇(1:1)室温固定5分钟,将固定后的小胶质细胞用一抗室温孵育过夜,然后用二抗避光室温孵育2小时。最后用荧光倒置显微镜和Leica TCS SP2 Laser Scanning共聚焦显微镜观察实验结果。 6. RT-PCR 使用RT-PCR检测小胶质细胞经吗啡处理后CD11b、TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA水平变化,用beta-Actin作为实验内参。收集各组实验细胞后,抽提RNA。以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下逆转录合成cDNA。以cDNA为模板,用小鼠CD11b、TNFα、IL-1β和IL-6相应引物特异性扩增相应的基因。用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行半定量检测。 结果 1.吗啡通过阿片受体途径激活小胶质细胞

吗啡(2,5,10,20μM)处理后小胶质细胞激活标志物CD11b mRNA水平呈剂量和时间依赖性升高,较未处理组有显著差异。阿片类受体阻断剂纳洛酮可以阻断吗啡的作用。 2.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞凋亡MTT结果显示吗啡(2,5,10,20μM)处理后小胶质细胞存活率呈剂量依赖性明显下降。TUNEL染色显示吗啡处理(10μM)使小胶质细胞凋亡明显增加,较未处理组有显著差异。Western Blot结果显示吗啡(10μM)处理使BV-2小胶质细胞中caspase-3活化明显升高,而体外培养原代小胶质细胞cleaved caspase-3和小胶质细胞标志物RCA-1双抗体免疫荧光染色也得到一致的结果。并且纳洛酮可阻断吗啡引起的小胶质细胞凋亡及caspase-3激活。 3.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞细胞因子表达RT-PCR的方法检测了小胶质细胞经吗啡(10μM)处理后TNFαIL-1β和IL-6 mRNA的表达,发现小胶质细胞中上述三种细胞因子表达明显增加,较未处理组有显著差异。纳洛酮可阻断吗啡的作用。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径激活并诱导小胶质细胞细胞因子的表达。 2.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞凋亡,caspase-3途径介导了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。 并且 第二部分GSK3β信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用研究 目的 使用体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系探讨GSK3β信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用及其具体机制。 方法 1.体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系并进行吗啡处理 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞分别分组如下:1.正常对照组、吗啡组(2,5,10,20 u M);2.正常对照组、吗啡组(6h,12h,24h) 3.正常对照组、吗啡组(10μM)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合);4.正常对照组、吗啡组、SB216763组(10μM)、吗啡+SB216763组(SB216763提前1h加入)。置细胞培养箱孵育。 还有 2. Western Blotting 使用Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-Akt、phosphor-GSK3β、cleaved

caspase-3、cleaved caspase-8、phosphor-p38、Bax、Bcl-2等蛋白水平变化。 3.细胞凋亡的检测 使用TUNEL染色法检测小胶质细胞凋亡。 4. RT-PCR 使用RT-PCR检测小胶质细胞Bax和Bcl-2 mRNA水平变化。 结果 1.吗啡通过阿片受体途径使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3β蛋白水平降低 Western Blot结果显示,吗啡使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3p蛋白水平明显降低,且表现为时间和剂量依赖性,纳洛酮可阻断吗啡的作用。 2.抑制GSK3β增加吗啡诱导的小胶质细胞凋亡 TUNEL方法检测细胞凋亡,发现特异性GSK3β抑制剂SB216763预处理显著增加了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。Western Blot方法检测小胶质细胞cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平,发现SB216763预处理可以明显增加吗啡引起的caspase-3和caspase-8活化。 3.抑制GSK3β使吗啡处理引起的Bax/Bcl-2和phosphor-p38变化增加 Western Blot方法检测小胶质细胞Bax和Bcl-2蛋白水平变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax水平升高,Bcl-2水平降低。而SB216763预处理增加了吗啡引起的Bax/Bcl-2变化。RT-PCR方法检测小胶质细胞中Bax和Bcl-2 mRNA表达变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,而SB216763预处理增加了吗啡引起的Bax/Bcl-2 mRNA变化,与蛋白变化一致。Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-p38水平,发现吗啡处理使小胶质细胞phosphor-p38水平升高,纳洛酮可阻断吗啡的作用。而SB216763预处理可显著增加吗啡引起的phosphor-p38升高。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3β蛋白水平降低。 2.抑制GSK3β增加吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。 3.抑制GSK3β增加吗啡引起的Bax/Bcl-2水平变化。 4.

mda-7。并用其感染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、Hep3B以及正常的肝细胞L02,RT-PCR方法验证MDA-7/I

mda-7。并用其感染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、Hep3B以及正常的肝细胞L02,RT-PCR方法验证MDA-7/IL-24的表达,ELISA方法检测细胞培养上清中MDA-/IL-24蛋白的表达。 结果:通过DNA测序和PT-PCR提示携带MDA-7/IL-24的复制缺陷型腺病毒构建成功,PT-PCR和ELISA方法提示该载体能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞和正常肝细胞中高效表达。 结论:成功构建了复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7,该载体能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞和正常肝细胞中高效表达。 第二部分Ad.mda-7选择性杀伤肝癌的体外研究 目的利用构建的携带人MDA-7/IL-24基因的复制缺陷型腺病毒Ad.mda-7作为载体,感染肝癌细胞HepG2、SMMC7721、Hep3B、MHCC97L和M6和正常的肝细胞L02,观察该基因对肝癌的选择性杀伤作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础。

方法将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2、SMMC7721、Hep3B、MHCC97L和M6。通过RT-PCR方法观察MDA-7/IL-24基因的表达,ELISA方法检测细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的浓度,四甲基偶氮哩蓝染色法(MTT)及Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用,Annexin-Ⅴ和PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡,利用流式细胞仪检测细胞周期。 结果RT-PCR提示复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、Hep3B、MHCC97L、M6和正常细胞L02中高效表达。ELISA方法检测提示细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的表达。MTT实验结果表明,MDA-7/IL-24能明显抑制各种肝癌细胞的生长,Hoechst染色提示MDA-7/IL-24促进肝癌细胞的凋亡,流式细胞仪提示MDA-7能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞没有影响,细胞周期分析提示MDA-7/IL-24阻滞肝癌细胞在G2/M期,同时对正常的肝细胞没有促凋亡作用和增殖阻滞作用。 那个 结论:复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,选择性的杀伤肝癌细胞HepG2、SMMC7721、Hep3B、MHCC97L和M6,促进细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡而与肿瘤细胞的P53基因的状态无关,同时对正常的肝细胞L02没有任何毒性作用。 第三部分Ad.mda-7选择性杀伤肝癌细胞的机理探讨

目的探索携带MDA-7/IL-24基因的复制缺陷型腺病毒Ad.mda-7选择性杀伤肝癌细胞的机理,为肝癌的基因治疗提供理论基础。 方法将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2。通过RT-PCR方法观察MDA-7/IL-24基因的表达,ELISA方法检测细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的浓度,Western 此网站 blot检测细胞内MDA-7/IL-24的表达,Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用,Annexin-Ⅴ和PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡,利用线粒体分离试剂分离感染后0h、6h、12h和24h时段正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2的线粒体和胞浆蛋白,通过western selleck Bcl2 inhibitor blot方法检查胞浆和线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2家族和caspase9,线粒体释放的促凋亡蛋白CytochromeC和Smac/Diablo的变化。 结果RT-PCR提示复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株HepG2和正常细胞L02中高效表达。ELISA方法检测提示细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的表达,蛋白电泳提示MDA-7蛋白在细胞内表达,而且随着时间的延长表达增强;Hoechst染色提示MDA-7/IL-24促进肝癌细胞的凋亡,流式细胞仪提示MDA-7能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞没有影响,通过RT-PCR和亚细胞蛋白的分析发现胞浆内抑制凋亡的物质Bcl-2和Bcl-xL表达在HepG2细胞中明显下降,而在L02中没有表达的下降,同时促凋亡蛋白Bax和在肝癌细胞中明显增强,Bak的表达没有明显的变化。同时促进细胞线粒体释放细胞色素C和Smac/Diablo,促进Caspase9的表达增强,从而导致肝癌细胞的凋亡。

结论:复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,选择性的杀伤肝癌细胞HepG2,诱导肿瘤细胞凋亡的机制与线粒体促凋亡物质的释放有关,同时对正常的肝细胞L02没有任何毒性作用。 第四部分:重组腺病毒介导的MDA-7/IL-24和阿霉素联合治疗肝癌的动物实验研究 目的:将重组腺病毒介导的mda-7/IL-24(melanoma differentiation-associated gene-7)和/或阿霉素(adriamycin,ADM)联合治疗裸鼠肝癌,探索基因治疗和化疗相结合治疗肿瘤的新方法。 方法:构建携带人mda-7/IL-24的重组腺病毒载体(Ad.mda-7),单独用其或ADM以及两者联用对实验性肝癌裸鼠进行治疗,用RT-PCR和western blot检测肿瘤组织中mda-7的表达,用ELISA方法检测裸鼠血清内MDA-7/IL-24蛋白的浓度变化;并观察抗肿瘤效果。 结果:(1)RT-PCR、western blot和ELISA方法可检测到Ad.mda-7+ADM组和Ad.mda-7组中mda-7表达明显增加。(2)Ad.mda-7+ADM组裸鼠肝癌生长抑制率最大值为70.4%,明显高于ADM组和Ad.mda-7组的35.9%和46.3%(P<0.01);(3)Ad.mda-7+ADM组裸鼠早期死亡率为0,明显低于ADM组的40%(P<0.01);Ad.mda-7+ADM组裸鼠长期生存率为80%,明显高于ADM组和Ad.

0%,GC型10 0%;哈族GG型91 7%,GC型8 3%,二者无显著性差异(χ~2=1 076P=0 30);等位基因频率:维

0%,GC型10.0%;哈族GG型91.7%,GC型8.3%,二者无显著性差异(χ~2=1.076P=0.30);等位基因频率:维族G等位基因95.0%,C等位基因5.0%;哈族G等位基因95.9%,C等位基因4.1%。二者差异无显著性(χ~2=1.193P=0.28)。(3)并发现AIX值哈族显著高于维族(t=3.65P=0.01),并且AIX随年龄增长而递增,同时哈族显著高于维族同年龄段并高于维族老年组。各民族以年龄段及性别分组未发现基因型及构成比有显著差异(P>0.05)。不同基因型间维族组基线资料差异无统计学意义,但在哈族人群中收缩压、舒张压及AIX值差异有统计学意义。结论TGF1β+869T/C多态性分布存在民族差异,其可能影响AIX,并与哈萨克族血管硬化及衰老有关联。且哈族血管衰老相关改变早于维族。TGFβ1+915G/C多态性分布在两民族之间差异无显著性。
目的:观察抑瘤素M在哮喘大鼠气道壁中的表达,探讨抑瘤素M的表达与哮喘气道重塑的关系,为哮喘的防治寻找可能的靶点。

Apoptosis抑制剂 方法:选用30只Wistar雄性健康大鼠,鼠龄8W,体重200-220g。将30只Wistar大鼠随机分为二组:对照组和哮喘组。第一天哮喘组用用抗原混悬液2m1(含卵白蛋白100mg,氢氧化铝200mg、灭活百日咳杆菌菌苗6×109个)腹腔注射致敏。第15天开始1%卵白蛋白溶液雾化激发,每天一次,每次20—30分钟,共8W,建立哮喘模型。对照组第一天用第1天用生理盐水2m1腹腔注射,第15天开始用生理盐水雾化吸入,余同哮喘组。末次激发结24小时后,取各只大鼠的支气管肺泡灌洗液行嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、中性粒细胞,淋巴细胞的分类计数。采取肺组织标本,采用HE染色观察气道形态学改变;采用免疫组化染色并经计算机图像分析测定气道壁中Oncostatin

M蛋白表达水平;同时采用RT-PCR法测定肺组织中Oncostatin M mRNA的表达。 结果:(1)哮喘组大鼠支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞浸润数为(9.21±1.24)与正常对照组比较(0.71±O..01),明显增加,差异具有显著统计学意义(P0.05)。病理证实哮喘模型基本成功。(2)哮喘组大鼠总管壁厚度(WAt/Pbm),气管内壁厚度(WAi/Pbm)及平滑肌层厚度(WAm/Pbm)分别为[(132.06±6.13)(81.52±1.55)(43.71±5.67)],与正常对照组[(79.84±2.40)(61.12±3.81)(16.78±2.13)]比较,显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05。(3)哮喘组肺组织中抑瘤素mRNA表达为(0.95±0.04),高于正常对照组的(0.45±0.16),差异具有统计学意义(P<0.01)。(4)抑瘤素M免疫组化染色阳性细胞表达强度,哮喘组(0.34±0.13)明显强于对正常对照组大鼠(0.15±0.05),差异具有统计学意义(P<0.01)。(5)气管壁抑瘤素M水平与哮喘组大鼠总管壁厚度,气管内壁厚度,平滑肌层厚度呈正相关(R值分别为0.768、0.532、0.745,P均0.05)。(6)哮喘组嗜酸性粒细胞数与抑瘤素M水平正相关,(R=0.970,P=0.000),而中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数与抑瘤素M水平无相关(R值分别为0.020、0.180、-0.256,P均>0.05) Selleck MAPK Inhibitor Library 结论:在哮喘模型组大鼠OSM表达增高,与支气管肺泡灌洗液的嗜酸性粒细胞正相关和大鼠总管壁厚度,气管内壁厚度,平滑肌层厚度呈正相,提示OSM可能参与哮喘气道炎症反应和气道重塑发生。
目的 急性胰腺炎(AP)是一个具有潜在生命危险的急性炎症反应,由于其发病机制及病因尚未完全阐明,因此在治疗方面存在许多不足之处。白细胞过度激活及其产生的炎性因子的级联“瀑布式”反应被认为是重要的发病机制之一[1-1]。本实验拟通过移植体外培养的骨髓间充质干细胞(MSCs)到急性胰腺炎模型体内,观察体内免疫细胞的增殖分化、血清炎性因子水平及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路表达的改变,比较移植及其他不同处理后动物的死亡率及病理改变等,为下一步基础研究和临床治疗急性胰腺炎提供相应的依据。

Selleck Kinase 抑制剂 Library 方法 从3-4周龄的同种异体SD大鼠股骨和胫骨骨髓中分离MSCs。采用2次腹腔注射20%L-精氨酸(2.5g/kg体重量)诱导AP大鼠模型,间隔1h。动物随机分成4组:AP未治疗组、MSCs移植组、p38MAPK抑制组和正常对照组。移植组在模型诱导前1h从尾静脉移植体外培养的MSCs3.0×106/只;抑制组在模型诱导前腹腔注射p38MAPK特异性抑制剂SB2035800.5mg/kg。模型诱导成功后1、3、6、12h各组处死相同数目大鼠,获取血清和胰腺组织。ELISA检测血清中白介素(IL)-1、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;组织切片进行中性粒细胞趋化因子(CINC)和单核粒细胞趋化因子-1(MCP-1)免疫组化染色;RT-PCR检测胰腺组织p38MAPKmRNA表达,同时观察大鼠的存活率。 结果 1. MSCs移植组在6、12h血清淀粉酶水平分别为732.23±265.3U/L、930.55±307.2U/L,而未治疗组同时间点血清淀粉酶水平为2450.22±466.3U/L、3248.97±365.7U/L,移植组血清淀粉酶水平显著低于对照组,对比有统计学差异(p0.05)。 3.移植MSCs后,AP模型中血清炎性因子水平升高不明显,趋化因子在腺泡细胞表达较少;胰腺腺泡细胞破坏少见,炎细胞浸润数量比未治疗组明显减少,急性胰腺炎病情得到改善。 结论 体外培养的MSCs移植入L-精氨酸诱导的急性胰腺炎大鼠模型体内,能够改善急性胰腺炎病情。其机制可能与MSCs移植入动物模型后,抑制了早期p38MAPK信号通路的表达,从而减少了炎细胞浸润和趋化因子在组织的表达有关,为临床应用MSCs移植治疗急性胰腺炎提供了理论依据。
目的: 探讨2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)患者血清瘦素(Leptin)水平与心血管疾病危险因素的关系及其在CHD发生发展过程中的可能作用。 方法: T2DM组40例(男31例,女9例),年龄55.3±7.56岁,T2DM合并CHD组40例(男23例,女17例),年龄68.9±9.86岁,对照组38例(男19例,女19例),年龄53.6±10.26岁。所有患者入院时收集其个人资料(包括年龄、性别、病程、家族史等);测定:①人体基本参数包括身高、体重、血压[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)]等;②生化指标:于入院次日空腹8小时取肘正中静脉血,测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbAlc)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、瘦素(Leptin)、超敏C反应蛋白(Hs-CRP);③进行心电图、心脏彩色多普勒及颈动脉彩超。⑤计算体质指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、腰臀比(WHR)、平均动脉压(MAP)。采用SPSS17.

3和2 1。3μM和10μM分别处理的SGC-7901/CisR细胞以及SGC-7901/TaxR细胞在6h、12h、24h、48

3和2.1。3μM和10μM分别处理的SGC-7901/CisR细胞以及SGC-7901/TaxR细胞在6h、12h、24h、48h的细胞存活率均高于SGC-7901细胞,该结果提示筛选的耐药亚株具有一定的耐药性。形态学检查也可见SGC-7901/CisR细胞以及SGC-7901/TaxR细胞对药物的敏感性较低。 与SGC-7901细胞相比,SGC-7901/CisR细胞以及SGC-7901/TaxR细胞均存在IGFBP-2的过表达以及IGFBP-3的表达不足,而各细胞间的IGFBP-5不存在表达差异。

利用siRNA抑制SGC-7901/CisR细胞以及SGC-7901/TaxR细胞的IGFBP-2后,再使用顺铂和紫杉醇处理细胞,两种耐药细胞的细胞存活率显著降低,G2/M期阻滞增多,药物诱导的凋亡率增多,提示siRNA抑制IGFBP-2后,耐药细胞对顺铂和紫衫醇的敏感性有所改善。相反,siRNA抑制SGC-7901细胞的IGFBP-3表达后,再使用顺铂和紫杉醇处理细胞,细胞存活率显著增加,G2/M期阻滞比例减少,药物诱导的凋亡率减少,提示IGFBP-3抑制可以降低SGC-7910细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性。同时本文发现,SGC-7901/CisR细胞以及SGC-7901/TaxR细胞的Bcl-2和NF-κB的表达较高,而IGFBP-2抑制和IGFBP-3表达载体的转入可以降低SGC-7901/CisR细胞以及SGC-7901/TaxR细胞的Bcl-2和NF-κB表达。 结论SGC-7901细胞对顺铂和紫杉醇的耐药可能由IGFBP-2与IGFBP-3介导,其机制涉及Bcl-2和NF-κB的高表达导致肿瘤细胞抗凋亡的增强。
我国是胃癌的高发国家,每年新增胃癌患者超过30万,约占全球新发病例的1/3,胃癌是我国肿瘤患者的第二大死亡原因。我们研究发现超过60%的胃癌患者初诊时已存在淋巴结转移,5%的患者存在脏器如肝脏等转移,而最终超过90%的胃癌患者死于转移及其并发症。因此,研究我国独特的胃癌发病和转移机制,探寻影响胃癌发生和发展密切相关的关键分子和通路,对于了解我国胃癌的生物学特性、丰富胃癌治疗手段并提高胃癌患者生存期具有极其重要的理论意义和应用价值。 PR 957 目的:1)探讨ADAMs在胃癌中的表达谱系;探讨FoxM1调控ADAM17的作用机制及其生物学功能;分析FoxM1和ADAM17在胃癌中表达及预后价值;为胃癌的诊断、治疗及预后判断提供可能的新的靶点。2)初步探讨二甲双胍对FoxM1-ADAM17轴表达的影响,为二甲双胍的临床运用提供新的理论和实验依据。 方法:1)RT-PCR、Western blot检测胃癌细胞株和组织中具有蛋白水解酶活性的跨膜型ADAMs的表达,筛选出高表达的ADAMs家族成员,采用siRNA选择性下调其表达,观察胃癌细胞生物学行为的改变。2)RT-PCR、Western

Temsirolimus分子重量 blot检测胃癌细胞和组织中FoxM1和ADAM17表达的相关性。过表达或下调表达FoxM1,观察胃癌细胞中ADAM17mRNA和蛋白表达水平的改变,并研究其对胃癌细胞增殖、侵袭及成瘤性的影响。3)Luciferase检测转染不同浓度FoxM1后,胃癌细胞ADAM17启动子区的活性改变,并通过CHIP(染色质免疫共沉淀)实验验证二者是否存在直接物理结合。4)免疫组化检测胃癌组织芯片中FoxM1和ADAM17的表达,分析二者在胃癌中的共表达率,及其与临床病理参数和预后之间的关系。5)Western blot检测不同浓度二甲双胍处理后胃癌细胞中pAMPK及其下游mTOR通路相关的信号蛋白以及FoxM1和ADAM17的蛋白表达改变;MTT法检测胃癌细胞增殖能力的改变;荷瘤鼠成瘤实验研究二甲双胍对胃癌细胞成瘤性的影响。

结果: 1)胃癌组织中具有蛋白水解酶活性的跨膜型ADAMs家族成员ADAM9、ADAM10、ADAM15、ADAM17、ADAM28和ADAM33在胃癌组织中的mRNA表达水平升高,ADAM12表达水平下调。ADAM10、ADAM17和ADAM28在肿瘤组织中的蛋白表达明显高于癌旁正常组织,采用sh-RNA选择性下调ADAM10、ADAM17、ADAM28的表达,可抑制胃癌细胞的增殖。 2)FoxM1和ADAM17在胃癌细胞和胃癌组织中的表达具有相关性。采用3*flag-FoxM1上调MKN45细胞中FoxM1表达,ADAM17的mRNA和蛋白表达水平也随之上调,MKN45的增殖能力提高;采用sh-RNA下调SGC7901细胞中FoxM1表达,可抑制细胞中ADAM17的mRNA和蛋白表达水平,并抑制SGC7901细胞的增殖能力。荷瘤鼠成瘤实验表明,采用FoxM1-shRNA干扰SGC7901细胞后,SGC7901的体内成瘤能力下降,瘤体中FoxM1和ADAM17的蛋白表达水平下调;采用3*flag-FoxM1上调MKN45细胞中FoxM1表达水平,MKN45细胞的成瘤性增强;共转染3*flag-FoxM1和ADAM17shRNA后,MKN45细胞的成瘤性较单纯转染组下降,但仍高于空白对照组。 3)在MKN45和293T细胞株中转染不同浓度的FoxM1质粒,随着转染质粒浓度的增加,ADAM17启动子活性逐渐升高。转染5ng FoxM1质粒组,ADAM17启动子活性明显高于转染2.5ng组和未转染组,组间比较具有统计学差异(P<0.05)。在SGC7901和293T细胞株中采用不同浓度的shRNA抑制FoxM1的表达,随着FoxM1表达水平的下调,ADAM17启动子活性逐渐下降。采用5ng shRNA抑制FoxM1表达组,ADAM17启动子活性明显下调,与0ng组相比具有显著统计学差异(P<0.

1%、21 6%,两组相比差异有显著性(χ2=15 931,P<0 05);ABCG2蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤数目

1%、21.6%,两组相比差异有显著性(χ2=15.931,P<0.05);ABCG2蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤数目等均无关(P均﹥0.05);与血清AFP水平、组织分化及淋巴转移有关(P均
小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)约占肺癌患者总数的15%-20%,与吸烟关系密切,约60%-70%的患者就诊时已处于广泛期,预后很差。内科药物治疗仍然为SCLC的主要的治疗手段。由于其细胞生物学行为复杂,恶性程度高,治疗后容易出现复发及耐药。通过多药联合、优化给药顺序、改变用药方法及调整药物剂量强度等手段并没有获得预期的疗效,且药物治疗的毒副反应较多,SCLC的死亡率依然高居各种肿瘤之首,故寻求安全、有效的治疗方案变得迫切而棘手。近年来,随着SCLC内科治疗药物研究的不断深入,一些研究热点药物如替莫唑胺、Hedgehog信号通路抑制剂、bcl-2抑制剂、ipilimumab、贝伐单抗等已在Ⅱ期或Ⅲ期试验中显示出良好的抗肿瘤活性,为SCLC的药物治疗提供了新的方向。本文就目前针对SCLC的药物治疗进展情况做一综述。
目的:探讨阻断Hedgehog信号通路对转化生长因子-β1(Transforming

HCS assay growth factor-β1,TGF-β1)诱导非小细胞肺癌(Non-smallcell lung cancer, NSCLC)上皮间质转化(Epithelial-MesenchymalTransition, EMT)的影响。 方法: 1采用TGF-β1(1、5和10ng/ml)诱导肺腺癌A549细胞48h,倒置显微镜观察A549细胞株形态学变化,荧光定量PCR检测Gli1mRNA的表达水平,Western blotting检测Gli1、Vimentin和E-cadherin的表达水平,细胞免疫荧光方法检测Gli1蛋白表达量的变化。划痕实验检测A549细胞株迁徙能力的变化。 2采用5ng/ml TGF-β1诱导非小细胞肺癌H460和SK-MES-1细胞48h,荧光定量PCR检测两种细胞中Gli1mRNA的表达水平,Westernblotting检测Gli1、E-cadherin和Vimentin的表达水平,Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。 3分别采用Cyclopamine和GANT61特异性阻断A549细胞Hedgehog信号通路中的信号转导因子Smoothened(Smo)及Humanglioma-associated

oncogene homolog1(Gli1),24h后,加入终浓度为5ng/ml的TGF-β1诱导48h,荧光定量PCR检测Gli1mRNA的表达水平,Western blotting检测Gli1、Vimentin和E-cadherin的表达水平,细胞免疫荧光方法检测Vimentin和E-cadherin蛋白表达量的变化。Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。 4以Gli1siRNA转染A549细胞,8h后,加入5ng/ml的TGF-β1诱导48h,荧光定量PCR检测Gli1mRNA的表达水平,Western blotting及细胞免疫荧光方法检测Gli1、Vimentin和E-cadherin的表达水平,Transwell小室侵袭和迁移实验检测侵袭及迁移能力的变化。 5采用GANT61特异性阻断H460和SK-MES-1细胞Gli1,24h后,加入5ng/ml的TGF-β1诱导48h,荧光定量PCR检测Gli1mRNA的表达水平,Western 很少 blotting检测Gli1、E-cadherin和Vimentin的表达水平,Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。

结果: 1倒置显微镜下观察经TGF-β1诱导48h后的A549细胞形态发生了明显的改变,Western blotting检测显示随着TGF-β1药物浓度的升高,各组NSCLC细胞中上皮细胞标志物E-cadherin表达明显减弱,而间质细胞标志物Vimentin表达明显上升。细胞划痕实验检测结果显示TGF-β1诱导后A549细胞迁移能力增强,Transwell小室侵袭实验检测结果显示TGF-β1诱导后H460和SK-MES-1细胞株侵袭能力增加。 PF299 2荧光定量PCR和Western blotting检测结果均表明在TGF-β1诱导NSCLC发生EMT的过程中皆伴随着Hedgehog信号通路下游效应因子Gli1mRNA及蛋白的高表达,细胞免疫荧光检测也证实了相同的结果。 3通过siRNA和药物Cyclopamine及GANT61特异性阻断NSCLC细胞Smo及Gli124h后,各组分别加入终质量浓度为5ng/mL的TGF-β1进行诱导。荧光定量PCR、Western blotting或细胞免疫荧光检测结果显示siRNA和药物均显著抑制Gli1mRNA及蛋白的表达。Western blotting检测结果显示,siRNA和药物干预后的NSCLC细胞中Vimentin蛋白表达明显减弱,而上皮细胞标记蛋白E-cadherin表达明显增多,细胞免疫荧光检测显示了相同的结果。Transwell小室侵袭和迁移实验结果显示,siRNA和药物干预后的NSCLC细胞株侵袭和迁移的能力明显下降。 结论:特异性阻断Hedgehog信号通路可以抑制TGF-β1诱导NSCLC细胞EMT的产生,提示Hedgehog信号通路在NSCLC细胞EMT的产生中起重要作用。
目的:通过检测Shh、Ptchl、Smo、Glil在胰腺癌组织和癌旁组织中表达的差异,初步探讨Shh、Ptchl、Smo、Glil在胰腺癌中异常表达与肿瘤发生的关系,以期为临床提供实验依据。方法:我们选取50例手术切除的新鲜胰腺癌组织和癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western blot检测胰腺癌组织和癌旁组织中Shh、Ptchl、Smo、Glil mRNA和蛋白的表达情况,并分析其与胰腺癌临床病理参数之间的关系。结果:RT-PCR检测结果显示:Shh、Ptchl、Smo、GlilmRNA在胰腺癌组织中的相对表达量分别是0.309±0.162、0.413±0.115、0.327±0.264、0.341±0.132,在胰腺癌旁组织中为0.184±0.227、0.203±0.143、0.148±0.276、0.105±0.351(P0.

Regardless of the extent of surgery,multimodal therapy may offer

Regardless of the extent of surgery,multimodal therapy may offer modest survival advantage at least for diseases with lymph node involvement.Moreover,in the era

of individualized treatment for most of the other cancer types,identification of special subgroups comprising those who will derive more or no benefit from adjuvant therapy merits further investigation.The aim of this review is to reveal the historical evolution and future reflections of adjuvant treatment modalities for resected gastric cancer patients.
肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,随着我国工业化速度的加快和吸烟率的增加,肺癌的发病率迅猛增长,已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占75%~80%,大多数患者就诊时已为进展期[1],确诊时分期为Ⅳ期者约为30%~40%,且非Ⅳ期患者在治疗过程中也有相当一部分会出现远处转移演变成Ⅳ期,自然生存期仅3个月左右[2]。
Precision {TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂| buy TNF-alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂半抑制浓度|TNF-alpha 抑制剂价格|TNF-alpha 抑制剂花费|TNF-alpha 抑制剂溶解度|TNF-alpha 抑制剂购买|TNF-alpha 抑制剂制造商|TNF-alpha 抑制剂查找购买|TNF-alpha 抑制剂订单|TNF-alpha 抑制剂 mouse|TNF-alpha 抑制剂 chemical structure|TNF-alpha 抑制剂分子量|TNF-alpha 抑制剂 molecular weight|TNF-alpha 抑制剂数据表|TNF-alpha 抑制剂 supplier|TNF-alpha 抑制剂体外|TNF-alpha 抑制剂细胞系|TNF-alpha 抑制剂 concentration|TNF-alpha 抑制剂 nmr|TNF-alpha 抑制剂体内|TNF-alpha 抑制剂 clinical trial|TNF-alpha 抑制剂s|TNF-alpha signaling 抑制剂|TNF-alpha pathway 抑制剂|TNF-alpha 信号通路 抑制剂|TNF-alpha signaling 抑制剂s|TNF alpha pathway 抑制剂s|TNF-alpha 信号通路 抑制剂s|TNF-alpha 抑制剂 library|TNF-alpha activity inhibition|TNF-alpha activity|TNF-alpha inhibition|TNF-alpha 抑制剂s library|TNF alpha 抑制剂 libraries|TNF-alpha 抑制剂 screening library|TNF-alpha high throughput screening|TNF-alpha 抑制剂s high throughput screening|TNF-alpha phosphorylation|TNF-alpha screening|TNF-alpha assay|TNF-alpha animal study| medicine aims to identify the right drug, for the right patient, at the right dose, at the right time, which is particularly important in cancer

therapy. Problems such as the variability Ixazomib订单 of treatment response and resistance to medication have been longstanding challenges in oncology, especially for development of new medications. Solid tumors, unlike hematologic malignancies or brain tumors, are remarkably diverse in their cellular origins and developmental timing. The ability of next-generation sequencing(NGS) to analyze the comprehensive landscape of genetic alterations brings promises to diseases that have a highly complex and heterogeneous genetic composition such as cancer. Here we provide an overview of how NGS is able to facilitate precision medicine and change the paradigm of cancer therapy, especially for solid tumors, through technical advancements, molecular diagnosis, response monitoring and clinical trials.
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中棘皮动物微管蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因突变情况与临床特征、生存时间的关系。方法回顾性分析82例NSCLC患者的临床资料,包括患者的年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤转移、临床分期或术后分期及表皮生长因子受体(EGFR)突变情况等,并通过阅览病例、电话随访等方式随访其生存情况。结果 或者 82例中,检测出EML4-ALK融合基因突变9例为突变阳性组,总突变率为10.98%,余为突变阴性组。2组在性别、肿瘤病理类型、肿瘤转移、病理分期等方面比较,差别无统计学意义(P>0.05);2组在吸烟史、EGFR基因突变情况的比较,差别有统计学意义(P<0.05)。突变阳性组与突变阴性组的中位生存期分别为21月(95%CI,18~24月)和23月(95%CI,22~24月),差别无统计学意义(P
大数据时代,超级计算机促进了合理药物设计研发,这种药物研究模式的转变推动了创新新药发现又一个春天的到来。科研信息化基础设施的升级,包括高性能计算机处理器技术的不断更新,新的资源模式的出现,使得超算技术与计算生物学、计算化学密切结合,进一步为传统的药物发现和计算机辅助药物设计增添了新功能,加速了分子动力学模拟和虚拟筛选等的研究进程。文章从药物设计学方法研究、药代动力学模型设计和药物设计方法的具体应用三个方面对当今合理药物设计领域的新发展进行了评述,详尽阐释了科研信息化在提高效率、降低成本、加快进程、管控风险及提升研发价值和创新能力方面的优势。
味觉改变又称味觉障碍,是指味觉反常或味觉受损,或是一种不愉快的味觉变化~([1]),是肿瘤化疗常见不良反应之一。因肿瘤类型和所在部位的不同,使用的化疗药物种类及方案不同,肿瘤患者化疗相关性味觉改变的发生率为38%~84%~([2])。由于味觉改变并不严重威胁患者生命,往往不被医护人员重视,但
目的:检测ALK基因在HBs

Ag阳性肝细胞癌患者中的表达,并分析其与临床特征及预后的相关性。方法:收集我院2005~2010年261例术后经病理确诊的HBs Ag阳性肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学法和FISH法对标本石蜡切片进行分析,检测ALK表达情况,并探讨其对HBs Ag阳性肝癌患者临床病理因素和预后的影响。结果:在肿瘤组织中,免疫组织化学法和FISH法分别检测到ALK阳性表达率为44.8%和32.6%。免疫组化结果进一步显示ALK蛋白表达与患者性别、肿瘤数目和微转移密切相关(P<0.

The literature provides compelling evidence for the role of MET s

The literature provides compelling evidence for the role of MET signaling in cancer development

and progression. The finding that cancer cells 那个 often use MET activation to escape therapies targeting other pathways strengthens the argument for MET-targeted therapeutics. Diverse strategies have been explored to deactivate MET signaling, and compounds and biologics targeting the MET pathway are in clinical development. Despite promising results from various clinical trials, we are still waiting for true MET-targeted therapeutics in the clinic. This review will explore recent progress and hurdles in the pursuit of METtargeted cancer drugs and discuss the challenges in such development.
肺腺癌是最常见的非小细胞肺癌组织学类型。目前,针对肺腺癌的分子靶向治疗是研究热点。继EGFR、KRAS、ALK等熟知驱动基因之后,不断有新的靶点基因被发现。本文重点就ROS1融合基因型肺癌的分子病理学、临床特点、检测手段及其治疗和预后的意义进行综述。
Objective This study investigated the role of the STAT3/survivin signaling pathway in the EML4-ALK–positive lung adenocarcinoma cell line H2228 before and after crizotinib-induced resistance. The mechanism of resistance was studied. Methods Cell viability

was determined using the MTT assay. Dactolisib Crizotinib-induced apoptosis in H2228 and H2228 crizotinib-resistant cells treated with the indicated doses of crizotinib was measured at different times(24 h, 48 h, 72 h) using flow cytometry. The levels of p-ALK, ALK, p-STAT3, STAT3, and survivin after treatment of cells

with 0, 0.3, and 1 μM crizotinib for 72 h were determined using Western blot analysis. DNA sequencing was used to identify mutations in H2228 crizotinib-resistant cells. Results The crizotinib IC50 values in H2228 and H2228 crizotinib-resistant cells at 72 h were 334.5 n M and 3418 n M, respectively. The resistance index of H2228 crizotinib-resistant cells was 10.20. Crizotinib induced apoptosis in H2228 cells and reduced the levels of p-ALK, p-STAT3, and survivin. In contrast, no changes in the levels of p-ALK, p-STAT3, and survivin were observed in H2228 crizotinib-resistant cells. The mutations 2067G→A 点击此处 and 2182G→C in EML4-ALK were present in the H2228 crizotinib-resistant cells. Conclusion Crizotinib decreased the viability of H2228 cells in a dose- and time-dependent manner. In the STAT3/survivin pathway, downregulation of p-ALK, p-STAT3, and survivin might contribute to crizotinib-induced apoptosis in H2228 cells. However, the STAT3/survivin pathway in H2228 crizotinib-resistant cells was unaffected by crizotinib treatment. Acquired resistance in H2228 cells might be related to ALK mutations.

05),表明c-Met受体、p-Akt蛋白与肿瘤VM显著相关。 6胃癌患者c-Met受体、p-Akt蛋白表达之间表达的相关性 c-

05),表明c-Met受体、p-Akt蛋白与肿瘤VM显著相关。 6胃癌患者c-Met受体、p-Akt蛋白表达之间表达的相关性 c-Met受体和p-Akt蛋白的表达显著正相关(r=0.501,P<0.05),表明c-Met受体和p-Akt蛋白间的表达存在一定的关系。 7胃癌患者c-Met受体、p-Akt蛋白与VM表达的相关性 c-Met受体和VM的表达显著正相关(r=0.277,P<0.05),p-Akt蛋白和VM的表达显著正相关(r=0.409,P<0.05),表明c-Met受体、p-Akt蛋白与胃癌VM的生成存在显著相关性。 没有 结论: 1c-Met受体、p-Akt蛋白在胃癌组织中表达较正常胃粘膜组织明显升高,c-Met受体、p-Akt蛋白的阳性表达参与胃癌发生,并与胃癌的进展相关,可作为判断胃癌恶性程度、预测转移的指标。 2胃癌组织中存在血管生成拟态,VM是肿瘤细胞为适应环境而产生的一种独特的血液供应模式,与内皮依赖性血管并存于胃癌组织内。 3胃癌患者存在VM组与无VM组c-Met受体、p-Akt蛋白的表达存在显著差异,表明c-Met受体、p-Akt蛋白在胃癌VM发生中可能起重要作用。
目的:非小细胞肺癌(NSCLC)是当代世界常见恶性肿瘤之一,已居多数国家癌症死亡原因的首位。近些年来新的分子靶向药物表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的出现为NSCLC的治疗带来了曙光。吉非替尼是一种口服的有活性、选择性的EGFR-TKIs,目前已成为肺癌分子靶向治疗中较为成熟的药物。临床研究已表明,吉非替尼单药治疗各种类型NSCLC的总有效率仅为10%~20%,因此人们希望与其他药物联合应用以进一步提高抗肿瘤效应。康莱特注射液是一种中药制剂,由中药薏苡仁中提取出的薏苡仁油制成,研究表明其对多种肿瘤细胞均能有较强的杀伤及抑制作用。一些小样本临床研究发现,康莱特联合化疗能显著提高晚期NSCLC的治疗效果。目前已有许多研究证明PI3K/Akt信号通路在NSCLC的发生、发展中起重要作用。约有50%-70%的NSCLC中存在Akt的磷酸化即p-Akt,这表明PI3K/Akt信号通路的激活在NSCLC中很常见。c-Met蛋白是一种由原癌基因c-Met编码、具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体,可与肝细胞生长因子(Hepatocyte

Growth Factor,HGF)特异性结合,激活下游一系列信号转导通路,调控细胞的增殖、活力、迁移、血管形成、侵袭以及形态发生等。c-Met信号的改变能促进肿瘤的发生和发展。有研究结果显示在NSCLC中非靶受体c-Met继发性过表达与吉非替尼的继发性耐药有关。本实验应用一系列实验方法,通过检测药物处理后的人肺腺癌A549细胞株中细胞凋亡率、p-Akt及c-Met的mRNA及蛋白等的表达来探索吉非替尼联合康莱特对A549细胞株的作用及其机制。 方法: 1体外培养肺腺癌A549细胞,选取对数生长期细胞进行实验。实验分为空白对照组,吉非替尼组,康莱特组,吉非替尼联合康莱特组;吉非替尼组设置浓度梯度为:0.1、0.5、1、5、10、20、40μmol

L,作用时间:24h、48h、72h;康莱特设置浓度梯度为:5、10、20、40、80、100、160μl ml,作用时间:24h、48h、72h;联合用药组:根据康莱特抑制率求IC50,吉非替尼选择本实验中最高作用浓度;应用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based CDK抑制剂 colorimetric assay,MTT)法分别测定各药物不同浓度、不同作用时间的抑制率。 2根据MTT结果,康莱特IC50=80μl ml,故联合用药组康莱特取80μl ml,吉非替尼选择本实验中最高作用浓度40μmol L,共同处理48h后,应用流式细胞学检测各处理组中对细胞生长的抑制情况。 3选取对数生长期细胞置入六孔板培养,组别设置同上。倒置显微镜下观察细胞形态学变化。采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-perosidase,SP)染色法检测各组药物处理后细胞内p-Akt、c-Met蛋白含量的变化。 4取对数生长期细胞,组别设置同上。药物作用48h后提取RNA,检测总RNA的量、纯度及完整性,通过逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription

PCR,RT-PCR)半定量检测药物处理后细胞内c-Met mRNA的表达水平。 5实验数据经SPSS18.0统计处理,采用正态性检验,以P0.05;联合用药组较吉非替尼组显著下调p-Akt、c-Met蛋白表达,P
背景与目的:以铂类为主联合第三代化疗药物方案是国际公认的晚期NSCLC的标准治疗方案,多西他赛是FDA批准的NSCLC一线和二线标准治疗药物。多年来作为仅有的一个二线药物,临床医师常将多西他赛用在晚期复治患者身上但是由于复治患者往往PS评分差,不能耐受化疗而丧失机会。随着分子靶向药物的出现,越来越多的患者在二线治疗时使用了分子靶向药物。进一步了解多西他赛联合顺铂一线治疗晚期NSCLC的疗效及与其相关的各种因素,有确切的临床意义。本文探讨多西他赛联合顺铂一线治疗晚期NSCLC的疗效、无进展生存期、生存率及与其相关因素和毒副反应情况。 此网站 方法:33例患者均给予多西他赛注射液75mg/m2加入生理盐水250ml,静脉滴注,第1天;顺铂75mg/m2加入生理盐水500ml,静脉滴注,分3天;每3周为1个周期,每完成2个周期后评价疗效,随访至疾病进展和患者死亡。应用SPSS16.0软件,用Kaplan-Meire评价中位生存期和总生存期,进行Log-rank非参数检验,分析33例晚期NSCLC患者的疗效和毒副反应及生存情况。 结果:33例患者有完整的随访资料。33例患者有效率为24.2%,疾病控制率为60.6%,中位无进展生存期5.7个月,中位生存期14.3个月,1年生存率为63.6%。单因素分析显示男性和女性的中位PFS分别为5.3个月、6.2个月(P=0.537);中位OS分别为13.8个月、15.9个月(P=0.390)。PS评分为0分、1分和2分的患者中位PFS分别为6.2个月、6.3个月、3.9个月(P=0.037);截至随访日期PS评分为0分的患者未出现中位OS,PS评分为1分和2分的患者中位OS分别为17.1个月、8.6个月(P=0.

47±0 06倍(P<0 05),SB216763处理组Tuj+细胞总数提高约2 25±0 07倍(P<0 05);3mM锂剂处理

47±0.06倍(P<0.05),SB216763处理组Tuj+细胞总数提高约2.25±0.07倍(P<0.05);3mM锂剂处理组中GFAP+细胞总数为对照组的0.55±0.02倍(P0.05)。结论:锂剂可明显促进NSCs向神经元方向分化并AST的分化,其最佳作用浓度分别为1mM及3mM,前者可能是通过锂剂下游经典作用通路GSK3β实现,而后者可能通过GSK3β旁路途径实现。
抑郁症是一种常见的精神疾病,严重影响人们的生活质量。临床常用药物、睡眠剥夺法及电抽搐疗法来治疗抑郁症。但鉴于目前的治疗方法的起效慢,低治愈率及难以持续应用,从而增加致残率、自杀率等缺点,急需寻求新的治疗方法。有大量实验表明,氯胺酮作为临床麻醉药,具有快速抗抑郁作用,但其具体机制还不明确,本文就近年来对氯胺酮抗抑郁机制的研究加以综述。1氯胺酮的化学性质
目的:探讨丹参酮ⅡA通过环氧化酶-2(COX-2)-Wnt/β-catenin信号通路调控人肠癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用机制。方法:分别采用PGE2和COX-2选择性抑制剂NS-398上调及抑制LoVo细胞COX-2表达,Western

Blot检测COX-2对β-catenin蛋白表达的影响;分别采用丹参酮ⅡA、PGE2和/或GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞24h,Western Blot法检测丹参酮ⅡA对COX-2和β-catenin蛋白表达的影响;ELISA法检测丹参酮ⅡA对VEGF表达的影响。结果:与对照组比较,PGE2能够显著上调LoVo细胞中COX-2蛋白表达,同时显著上调β-catenin在细胞总蛋白、浆蛋白和核蛋白中的表达水平;反之,COX-2抑制剂NS-398能够显著下调COX-2和β-catenin蛋白表达水平。丹参酮ⅡA能够显著下调COX-2和β-catenin蛋白在人肠癌LoVo细胞中表达水平,并且能够显著下调PGE2诱导的COX-2和β-catenin蛋白的高表达;同时,丹参酮ⅡA能够显著下调人肠癌LoVo细胞VEGF表达水平,并且能够下调PGE2和GSK-3β抑制剂SB-216763诱导的VEGF高表达。结论:丹参酮ⅡA通过抑制人肠癌细胞中COX-2的表达,阻止细胞中β-catenin的累积,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路,下调VEGF表达,这可能是丹参酮ⅡA抗大肠癌血管新生的作用机制之一。
目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、姜黄素组(再灌注同时加入7.5μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western 2-MeOE2体外 blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006;t=5.854,P=0.004)。与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001;t=-3.607,P=0.023),存活率及pSer-GSK-3表达水平显著升高(t=9.165,P=0.001;t=3.747,P=0.02)。结论

GSK-3的酪氨酸和丝氨酸磷酸化可能参与心肌细胞I/R损伤,姜黄素减少I/R心肌细胞凋亡可能与其通过减少酪氨酸磷酸化、增加丝氨酸磷酸化抑制GSK-3活性有关。
锂剂是Mg2+的竞争性抑制剂,具有抗躁狂、抗抑郁、抗自杀的临床效果。锂剂有众多的直接目标分子,其中,锂剂通过抑制糖原合成酶激酶-3(GSK-3)发挥稳定情绪、改善行为、促进神经生长等作用。已有多项研究报道GSK-3参与神经变性性疾病、脑血管性疾病、神经系统肿瘤等疾病的发生,本文就GSK-3、锂剂和神经精神性疾病作一综述。
LPS刺激巨噬细胞产生IFN-β在抵御外来病原微生物的免疫反应中发挥重要作用。本研究探讨新抗生素S632A3促进LPS诱导巨噬细胞产生IFN-β及其分子机制。采用实时定量PCR检测mRNA含量,ELISA检测细胞因子含量,激酶分析检测GSK-3β活性,Western ubiquitin-Proteasome system SSR128129E细胞系 blotting检测蛋白磷酸化水平。结果表明:S632A3可显著促进LPS诱导的巨噬细胞产生IFN-β,其分子机制是抑制细胞内GSK-3β活性,降低转录因子c-Jun苏氨酸239位点的磷酸化并增加c-Jun稳定性。结果提示,S632A3是一个新的抗炎先导化合物,通过抑制GSK-3β活性促进LPS诱导巨噬细胞产生IFN-β。
Irradiation

from diverse sources is ubiquitous and closely associated with human activities. Radiation therapy (RT), an important component of multiple radiation origins, is a common therapeutic modality for cancer. More importantly, RT provides significant contribution to oncotherapy by killing tumor cells. However, during the course of therapy, irradiation of normal tissues can result in a wide range of side effects, including self-limited acute toxicities, mild chronic symptoms, or severe organ dysfunction. Although numerous promising radioprotective agents have emerged, only a few have successfully entered the market because of various limitations. At present, the widely accepted hypothesis for protection against radiation-caused injury involves the Wnt canonical pathway.

05)。结论克唑替尼对肺腺癌细胞株H2228的增殖抑制和诱导凋亡作用呈剂量依赖性,HIF-1αmRNA的上调在克唑替尼诱导肺癌细胞

05)。结论克唑替尼对肺腺癌细胞株H2228的增殖抑制和诱导凋亡作用呈剂量依赖性,HIF-1αmRNA的上调在克唑替尼诱导肺癌细胞凋亡过程中发挥重要作用。
c-MET是原癌基因c-MET编码的蛋白产物,是肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)受体,具有络氨酸激酶活性。c-Met的异常表达与肺癌的发生发展有着密切的关系。HGF与其c-Met受体结合后,活化c-Met酪氨酸激酶活性,能促进多种肿瘤细胞包括肺癌细胞的增殖、新生血管生成及肿瘤侵袭和迁移。针对HGF/c-Met信号转导通路的靶向治疗是目前肺癌治疗的新热点。本文将就HGF/c-Met信号转导通路在肺癌中异常调控及其靶向药物在肺癌中的研究进展进行综述。
2014年上半年美国FDA批准46种新药(包括修改说明书,新剂型,新组方和其他),其中首次批准上市10个新分子实体和生物制品许可申请10个,共计20个。本文根据FDA批准的处方资料的要点,简要介绍新药概况、作用机制、适应证、剂量和用法、黑框警告、禁忌证、不良反应、药物相互作用及特殊人群中使用要点。并讨论了2014上半年批准新药在药物开发、研究和审评使中的首次事件。
表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal

growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)靶向治疗相对于传统化疗具有很大的优势,已成为晚期EGFR基因突变型非小细胞肺癌的有效治疗手段。然而,耐药现象不可避免地发生已成为靶向治疗的瓶颈,增加了临床上治疗肺癌的难度。EGFR-TKIs获得性耐药机制包括有外显子20点突变T790M,c-MET旁路激活、上皮细胞-间质转化和小细胞肺癌转化等。针对T790M耐药突变研发的不可逆EGFR-TKIs、”第3代EGFR-TKIs”,针对MET激活机制的MET-TKI以及针对MET的单克隆抗体等靶向药物正逐步进入临床试验阶段,并显示出初步效果。本文对2014年ASCO年会上非小细胞肺癌EGFR-TKIs靶向治疗耐药的临床研究进展进行梳理并讨论。
药物基因组学是一门从基因角度研究药物作用个体间差异的学科,对于患者个体化治疗具有重要意义。近年来,在抗肿瘤药物研究方面,药物基因组学研究阐明了多种药物个体间药效和毒性差异的基因基础,为肿瘤的个体化治疗做出了重要贡献。本文以几种常见的抗肿瘤药物为代表,探讨药物基因组学在抗肿瘤药物疗效和毒性方面的研究进展。
目的探讨Bim在克唑替尼诱导EML4-ALK融合基因阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡过程中的作用机制。方法在不同时间点(24、48、72h)用不同浓度克唑替尼分别处理EML4-ALK阳性肺腺癌H2228细胞株和EML4-ALK阴性肺癌A549细胞株,采用MTT法检测克唑替尼作用72h的细胞增殖抑制情况;PI单染流式细胞仪检测经300nmol/L克唑替尼作用24、48和72h的细胞凋亡率;采用Western

LY2157299 价格 一般 blotting法检测克唑替尼诱导前后Bim蛋白(Bim-EL、Bim-L和Bim-S)的表达水平,同时对促凋亡分子Bid和抗凋亡分子Bcl-2、Bcl-xL的蛋白水平进行联合检测;采用siRNA技术”沉默”Bim基因的表达,用流式细胞仪检测siRNA”沉默”Bim基因后克唑替尼诱导H2228细胞株的凋亡率。结果克唑替尼作用72h后,肺腺癌H2228细胞株和A549细胞株的细胞增殖抑制率均随着克唑替尼药物浓度的增加而逐渐升高,呈剂量依赖性。克唑替尼作用于H2228细胞72h的IC50值为335nmol/L。300nmol/L克唑替尼作用H2228细胞株24、48、72h后的凋亡率分别为(19.19±0.61)%、(35.47±1.17)%、(43.58±4.84)%,作用A549细胞株的凋亡率分别为(12.71±0.1)%、(18.22±0.13)%、(19.36±0.45)%。随着克唑替尼(300nmol/L)作用时间的延长,细胞凋亡率亦随之增加,并呈时间依赖性(P
肺癌是目前发病率和死亡率居首列的恶性肿瘤,是癌症死亡的主要原因,其中非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)约占85%,多数患者在确诊时已属晚期[1]。尽管含铂联合化疗可以改善患者的生存期,但是晚期NSCLC患者的预后仍然极差,5年生存率
针对驱动基因的靶向药物吉非替尼、厄洛替尼及克唑替尼等在晚期非小细胞肺癌治疗中有着不可替代的地位,然而此类药物给患者带来益处的同时也出现较高的肝脏毒性,现就其肝脏毒性及机制作一综述。
肺癌是癌症死亡的重要原因。驱动基因的发现使肿瘤治疗不再”一刀切”。靶向治疗改变了癌症药物治疗的现状成为”带眼睛的子弹”,其疗效可见并为肺癌治疗带来一场革命。驱动基因及靶向治疗已经成为非小细胞肺癌(non-small

哪里 cell lung cancer,NSCLC)新的代名词。2013年中国美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)年会发布了关于NSCLC的11种驱动基因突变频率,本文将就此11种NSCLC驱动基因突变的结构、功能及靶向药物治疗进行阐述。
Gastric cancer is the fourth most common malignant neoplasm and the second leading cause of death for cancer in Western countries with more than 20000 new cases yearly diagnosed in the United States.Surgery represents the main approach for this disease but,notwithstanding the advances in surgical techniques,we observed a minimal improvement in terms of overall survival with a significant increasing of relapsing disease rates.