消斑通脉合剂中药血清抑制VSMC增殖的作用与其具有诱导VSMC凋亡作用直接相关。通过降低Akt蛋白磷酸化的表达水平,影响其下游底物的抗凋亡作用,VSMC凋亡增加,进而起到抑制VSMC增殖。 4.消斑通脉合剂中药血清可通过多角度、多靶点抑制VSMC增殖,其作用机理符合现代分子生物学关于再狭窄机理的研究结果,可以作为临床再狭窄的防治药物。 5.再狭窄应用益气助阳、活血化瘀并用的治疗方法是切实可行的,符合中医辨证论治的理论思想。
第一部分ERK1/2 MAPK和p38 MAPK通路在iC3b结合的单核细胞向树突状细胞分化过程中的作用 目的：研究补体iC3b对人血前体单核细胞(Mo)分化的影响,进一步验证UVB诱导的补体iC3b沉积和CDla+树突状细胞(DC)消失之间的关系；探讨ERK1/2

(ERK44/42) MAPK和p38 MAPK信号传导途径是否参与此影响,相应的MAPK抑制剂是否能逆转这种影响；经iC3b及ERK1/2特异性抑制剂或p38特异性抑制剂预处理后的Mo对CD4+T细胞的作用是否与正常情况下分化的Mo不同。 方法：1)从健康人外周血通过免疫磁珠法分离前体Mo。EAiC3b (IgM-plus iC3b-coated sheep erythrocyte, IgM以及iC3b包被的羊红细胞)与人血前体Mo以及IL-4、GM-CSF共同培养2天,并与EA(IgM coated sheep erythrocyte, IgM包被的羊红细胞)作对照,用流式细胞仪检测EAiC3b对前体Mo分化的影响(CD14+,CDla+); Dabrafenib细胞系 Western blot检测磷酸化ERK1/2、p38 MAPK的蛋白水平,ELISA法检测IL-10、IL-12p70水平。2)上述培养过程中加入ERK1/2 MAPK抑制剂(PD98059)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)预处理后,磷酸化ERK1/2、p38 MAPK和IL-10、IL-12p70水平的水平,以及DC数量的变化。3)CD4+T细胞增殖实验：Mo经PD98059(或SB203580)和EAiC3b预处理后,与IL-4、GM-CSF共培养6天经60Co照射后作为刺激细胞,同时分离同种异体人外周血CD4+T作为反应细胞,共培养5天后,经3H—掺入法检测CD4+T细胞增殖反应。

selleck化学 结果：1)相比EA组结果,EAiC3b的加入使Mo向CDla+DC方向的分化受到抑制,表现为CDla+的表达明显降低,磷酸化—ERK1／2 MAPK的表达增加,磷酸化—p38 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平降低,IL-10的水平增加,CD4+T细胞增殖减弱。2)前过程中加入PD98059预处理后,相比EAiC3b结果,则促进了Mo向CDla+DC方向的分化成熟,表现为CDla+的表达明显增加,磷酸化—ERK1／2 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平增高,IL-10的水平降低,CD4+T细胞增殖明显提高。3)细胞经SB203580预处理后,相比EAiC3b结果,Mo向CDla+DC方向的分化成熟被进一步抑制,表现为CDla+的表达降低,磷酸化—p38 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平稍有降低,IL-10的水平略有增高,CD4+T细胞增殖有所下调。 结论：1)紫外线引起的补体iC3b的沉积是引起CDla+DC消失的重要原因；2) ERK1／2 MAPK抑制剂PD98059可显著逆转这种现象,促进前体Mo向CDla+DC的分化,而p38 MAPK抑制剂SB203580则进一步抑制CDla+DC的分化成熟；3)经iC3b作用的Mo对CD4+T细胞的增殖能力明显减弱,PD预处理后可显著恢复,SB预处理后加强这种抑制。

第二部分：ERK1/2 MAPK抑制剂PD98059可明显逆转UVB诱导的小鼠皮肤局部免疫抑制,未观察到SB203580对迟发性高敏反应的抗炎作用 目的：在UVB诱导局部免疫抑制动物模型的基础上,观察外涂PD9059能否逆转该现象,以证实ERK1/2 MAPK在免疫抑制中的关键作用,为开发防光剂提供新的思路；在接触性高敏反应动物模型的基础上,观察外涂SB203580观察能否抑制炎症反应,为抗炎剂作基础。 无 方法：建立UVB诱导局部免疫抑制的小鼠模型,即UVB 8 kJ/m2昭射Balb/c小鼠腹部去毛皮肤后3天,在相同区域外涂25μ10.5%DNFB致敏,5天后测量基础右耳廓厚度并在相同耳背处外涂10μ10.2%DNFB激发,24小时后测量耳廓厚度并取右耳组织做HE病理。PD研究：UVB曝光前1小时(A组),曝光同时(A组),曝光后6小时(C组)外涂PD98059,余步骤同前,检测耳肿反应及HE染色。SB研究：小鼠腹部去毛皮肤外涂不同浓度的SB203580,6小时后相同皮肤处外涂25μ10.5%DNFB致敏,5天后测量基础右耳廓厚度并在耳背皮肤外涂10μ10.2%DNFB激发,24小时后再次测量耳廓厚度并取耳组织做HE病理染色。各组均设对照。 结果：PD研究：UVB 8 kJ/m2及其以上剂量可引起局部免疫抑制,在此基础上,光照后6小时外涂PD98059组(C组)可部分逆转UVB诱导的局部免疫抑制,表现为和对照组相比,耳肿反应有显著性差异(P0.

01,P<0.01);PTEN、TP53阳性表达率在远端无癌组织中高于癌组织(P<0.01,P<0.05));3MYC表达与分化程度(P<0.05)、TNM分期(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)和侵犯深度(P<0.05)有关;PTEN表达与分化程度有关(P
目的:探讨PTEN、Survivin和Caspase-3的表达与食管鳞癌临床病理学特征之间的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测PTEN、Survivin和Caspase-3在65例食管鳞癌组织中的表达,分析三者的表达与食管鳞癌组织学分化程度、浸润深度及淋巴结转移的关系。结果:随着食管鳞癌细胞分化程度的减低和浸润深度的增加,PTEN和Caspase-3的阳性表达率均显著降低(P0.05)。PTEN、Caspase-3阳性表达率无淋巴结转移的癌组织中明显高于有淋巴结转移组(P<0.05),而Survivin阳性表达率无淋巴结转移的癌组织低于有淋巴结转移组(P<0.01)。Survivin与Caspase-3在食管鳞癌中表达呈负相关。结论:PTEN、Survivin和Caspase-3在食管鳞癌中的异常表达与食管鳞癌细胞的临床病理学特征关系密切,三者可能在食管鳞癌的发生发展过程中起重要作用。
肺癌是全球发病率和致死率最高的疾病之一。非小细胞肺癌(non-small

cell lung cancer,NSCLC)是肺癌最为常见的组织学类型。近些年,分子生物学的发展让我们对NSCLC的认识从组织水平深入到分子水平。表皮生长因子受体(epidermal RG7420 growth factor receptor,EGFR)基因突变和间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因是NSCLC患者最为重要的两个肿瘤驱动基因。针对它们的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)显著改善了带有这类分子特征的NSCLC患者的生存。不幸的是,目前几乎所有针对这两种突变的初始靶向治疗都会不可避免地出现耐药问题。有关EGFR-TKIs的耐药机制及其应对策略已经有很多文章进行阐述,而对于ALK 哪里 TKIs治疗后出现耐药问题的机制和相应的治疗策略还未曾有过详细的综述。因此,本文针对一代ALK TKI(克唑替尼)治疗ALK融合基因阳性的NSCLC患者(ALK+NSCLC)后引起耐药问题的机制和有关后续治疗策略做一综述。
Gastrointestinal stromal tumors(GISTs)

are the most common type of mesenchymal tumor of the gastrointestinal tract. The tumorigenesis of GISTs is driven by gain-of-function mutations in KIT or plateletderived growth factor receptor α(PDGFRA),resultingin constitutive activation of the tyrosine kinase and its downstream signaling pathways. Oncogenic 更多 KIT or PDGFRA mutations are compelling therapeutic targets for the treatment of GISTs,and the KIT/PDGFRA inhibitor imatinib is the standard of care for patients with

metastatic GISTs. However,most GIST patients develop clinical resistance to imatinib and other tyrosine kinase inhibitors. Five mechanisms of resistance have been characterized:(1) acquisition of a secondary point mutation in KIT or PDGFRA;(2) genomic amplification of KIT;(3) activation of an alternative receptor tyrosine kinase;(4) loss of KIT oncoprotein expression; and(5) wild-type GIST. Currently,sunitinib is used as a secondline treatment for patients after imatinib failure,and regorafenib has been approved for patients whose disease is progressing on both imatinib and sunitinib. Phase Ⅱ/Ⅲ trials are currently in progress to evaluate novel inhibitors and immunotherapies targeting KIT,its downstream effectors such as phosphatidylinositol 3-kinase,protein kinase B and mammalian target of rapamycin,heat shock protein 90,and histone deacetylase inhibitor. Other candidate targets have been identified,including ETV1,AXL,insulin-like growth factor 1 receptor,KRAS,FAS receptor,protein kinase c theta,ANO1(DOG1),CDC37,and aurora kinase A. These candidates warrant clinical evaluation as novel therapeutic targets in GIST.

恶性肿瘤患者的血液中可检测到循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)。转移性乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌中外周血CTC与疾病的复发及治疗反应的临床相关性已经被确立。研究晚期肺癌患者中CTC与临床的相关性对指导临床治疗的非常重要。CTC可能成为临床上提示肺癌预后;预测疾病进展;指导治疗的重要因素,将CTC检测转化到临床实践中并进一步改善标准化的CTC检测技术有重要意义。
多原发性肺癌的发病率和检出率逐年升高。目前临床上诊断多原发性肺癌(multiple primary lung cancer,MPLC)主要参照Martini-Melamed标准和美国胸科医师协会(American College of Chest Physicians,ACCP)标准,综合考虑临床表现、影像学特征、组织学类型和分子遗传学特征。组织学类型不同的MPLC诊断相对容易,而组织学类型相同的MPLC诊断仍相当困难。DNA倍体分析、基因突变检测、微卫星多态性分析等分子生物学技术为MPLC的正确诊断提供了新手段,可评估各病灶的克隆性关系,帮助鉴别MPLC与转移。MPLC的首选治疗方案为根治性手术,术式应考虑患者肺功能储备等因素,选择肺叶切除、肺段切除或楔形切除;对于不能根治性切除的病灶,可综合化疗、放疗、立体定向放疗(stereotactic ablative radiotherapy,SABR)、射频消融(radiofrequency

ablation,RFA)、分子靶向治疗等。
Few effective therapies have been developed for the treatment of lung squamous cell carcinoma(SQCC), Selleck Decitabine in part due to a lack of understanding regarding the mechanisms underlying the initiation and development of this disease. Whole transcriptome sequencing not only

provides insight into the expression of all transcribed genes, but offers an efficient approach for identifying genetic variations,including gene fusions, mutations and alternative splicing. In this study, we performed whole transcriptome sequencing of 10 patients with stage IIIA lung SQCC, and discovered a large NVP-BKM120制造商 number of single nucleotide variants(SNVs; mean of 12.2 SNVs/Mb), with C>T/G>A and A>G/T>C transitions being the most frequently observed. Additionally, a total of 132 gene fusions were identified based upon Top Hat alignments, 70.5%(93/132)

of which occurred as a result of intra-chromosomal rearrangements. Based on the number of supporting reads for each fusion, we further validated 20 of the 26 top gene fusions by RT-PCR and Sanger sequencing. Taken together, these data provide an in-depth view of transcriptional alterations in lung SQCC patients, and may be useful for identification of new therapeutic targets.
国际恶性淋巴瘤会议(International Conference of Malignant Lymphoma,ICML)是关于恶性淋巴瘤的基础和临床研究的一个国际性会议,为全球范围内涉及淋巴瘤各方面进展的规模最大、级别最高的学术论坛。从1981年第一届开始,每3年举办一次,后来又改为每2年举办一次,今年为第13届。每次会议均在瑞士南部的美丽小镇Lugano举行,淋巴瘤相关工作者约3000余人在此进行思想碰撞,历史上关于淋巴瘤诊治方面的多个决策也在此产生。由于儿童恶性淋巴瘤的病理类型、诊治和预后等与
本月全球药品研发进展取得成效的药物共有52个,较上月增加3个。进入注册阶段的有19个,较上月增加2个。其中,4个为全球首次注册的药品,在新市场补充注册的为15个。进入注册前阶段的有12个,较上月增加2个。进入Ⅲ期临床研究阶段的有21个,较上月减少1个。
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中肝细胞生长因子受体(c-Met)基因扩增与临床病理特征的关系以及分析c-Met与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的相关性。方法采用荧光原位杂交技术(FISH)检测108例NSCLC患者的c-Met基因扩增情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EML4-ALK融合基因及c-Met基因表达量,聚合酶链扩增反应(PCR)及直接测序法检测EGFR和K-Ras基因突变情况,并分析c-Met基因与临床病理特征的关系及其与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的关系。结果 不 NSCLC中c-Met基因扩增率为1.85%,其在吸烟和非吸烟患者中扩增率分别为2.94%和1.35%;腺癌c-Met基因扩增率为1.23%,鳞癌未发现c-Met基因扩增;仅Ⅰ期和Ⅲ期中分别有1例c-Met基因扩增。NSCLC中EGFR、K-Ras基因突变及EML4-ALK融合基因的阳性率分别为42.59%、5.56%和12.04%。结论 FISH法对c-Met基因扩增检出率与qRT-PCR检测的c-Met基因表达水平基本一致;c-Met基因扩增与EGFR、K-Ras突变及EML4-ALK融合基因之间几乎是不共存的,c-Met扩增与NSCLC患者年龄、性别、吸烟状态、肿瘤组织类型及临床分期无关。
Gastric cancer is the third leading cause of cancer death worldwide.

PCR array法检测结果显示，在短时间点（3h）UPR信号通路多种未折叠蛋白伴侣分子（包括PERK、ATF6和IRE1三条应答途径）表达上调应答了应激，长时间点（24h）则呈下降趋势，表明ERS趋缓，而JNK3则持续高表达，同时JNK家族其他亚型无明显变化。Western blot检测也显示JNK3蛋白水平表达上调。 3.结合mRNA及Western blot检测确认Si3为JNK3有效沉默序列。 4.较之S1处理，抑制剂Ⅻ和siRNA干预后，光镜下皱缩细胞增多；细胞存活率显著降低；抑制剂Ⅻ与S1联合应用后细胞凋亡率增加。 5.较之S1处理，抑制剂Ⅻ或siRNA与S1合并干预后，Bcl-2表达降低，同时Cleaved Caspase-3蛋白的表达增加；JNK靶标分子c-Jun、p-c-Jun表达明显下降；而c-Jun的负性调节靶标p53表达上调，相应地，p53下游分子Noxa和Bax表达亦明显上调；线粒体膜电位显著下降；未折叠蛋白反应伴侣分子Grp78表达降低、CHOP表达升高。

哪里 6.抑制剂Ⅻ与S1联合应用后，胞内ROS水平显著增加，氧化损伤导致的存活率降低可被抗氧剂NAC所逆转。 7. AO及Lyso-Tranker Red染色结果显示抑制剂Ⅻ与S1联合应用后胞内酸性结构明显增多；同时LC3-Ⅱ表达在S1组、S1合并Ⅻ处理组均显著增加，p62表达在合并处理组显著增加，相应地siRNA干预后也呈现出LC3-Ⅱ和p62表达升高的趋势；氯喹合并S1处理SKOV3/DDP细胞进一步降低了存活率。 结论 1. BH3模拟物S1能够降低卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP存活率；UPR相关基因JNK3的高表达可能与SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性密切相关。 2.抑制JNK3可通过阻断其下游靶蛋白c-Jun的活化，诱导p53表达增加，上调凋亡相关蛋白Noxa和Bax的表达，从而加剧S1诱导卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP凋亡。 3.抑制JNK3通过促进细胞氧化损伤从而提高了卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性。 4.抑制JNK3通过阻断细胞自噬通量从而提高了卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性。 本文首次探讨了JNK家族的亚型JNK3在卵巢癌细胞耐药中的作用，JNK3可能通过减少氧化损伤和激活自噬途径发挥了促进细胞存活的作用。因此JNK3可能是逆转肿瘤细胞耐药的一个潜在靶标。
在世界范围内大约有10%-15%的育龄夫妇正在遭受不育症的折磨。不育症夫妇中40%的男性是不育的,并且随着环境和社会等因素的影响,男性不育的比例正在逐渐增加。男性不育患者大部分为非梗阻性无精症(non-obstructive azoospermia, NOA),其病因不明,对临床治疗极为不利。随着对非梗阻性无精症的深入研究,发现男性不育与血睾屏障(Blood-testis

barrier, BTB)的功能异常有关,然而导致血睾屏障功能异常的分子机制仍有待阐明。 这个 位于生精上皮底部的支持细胞(Sertoli cell)通过彼此间的紧密连接构建血睾屏障,为精子发生提供一个稳定的微环境和独特的免疫屏障,并通过有序的开放调节精子生成。血睾屏障开放机制的异常使得精子发生的微环境和免疫屏障受损,进而影响精子生成,导致男性不育。血睾屏障的开放机制受到众多因子的调节,而TGF-β3是调节血睾屏障开放的主要因子之一,因此研究影响TGF-β3的表达和分泌的因素具有重要意义,这也是本文的第一个研究课题。

NXF3属于核输出因子蛋白家族(nuclear RNA export factor family, NXF),本文研究发现NXF3在小鼠睾丸的支持细胞中特异性地表达,并且在附睾头部、区的主细胞中也检测到NXF3的表达。在支持细胞中首次检测到NXF3的表达是小鼠出生后10天,而此时正是小鼠血睾屏障形成之时,因此NXF3极有可能与血睾屏障相关,这引起我们的极大兴趣。由于TGF-β3是参与血睾屏障调节的主要因子之一,我们检测了NXF3和TGF-β3在睾丸中的表达,发现两者之间具有负相关的关系。进一步的实验也证实了这一关系：在用热或CdC12处理小鼠睾丸后发现,NXF3的表达下降,而TGF-β3的表达上升了。随着研究的深入,发现NXF3参与调节TGF-β3转录负反馈的调控进而影响了TGF-β3的表达,即TGF-β信号通路激活后,NXF3增强了Smad2/3途径的活性,从而使TGF-P3的转录受到抑制。通过更详细的研究我们发现了NXF3的结合蛋白：STRAP, NVP-BKM120 TGF-β信号通路的抑制因子。因此NXF3调节TGF-p3的机制得以阐明：TGF-β信号通路激活后,NXF3与STRAP结合,抑制了STRAP与Smad7的结合,影响了TpR1-STRAP-Smad7复合体的形成,使得Smad2/3途径激活从而抑制了TGF-β3的转录,并且Smad2/3途径的下游靶基因Claudin11、WT1、GATA1和p21也受到调控. 拟染色小体(chromatoid body)是雄性圆形精子时期出现的一个特异性结构,在电子显微镜下呈纤维状结构,主要由蛋白质和RNA组成,不含DNA。由于其含有许多RNA结合蛋白、mRNA和nicroRNA,拟染色小体被认为是精子发生过程中的RNA存储和加工中心,参与精子发生过程中的基因表达调控,因此非常引人关注。距1891年拟染色小体首次被报道,至今已有一百多年,有关拟染色小体的研究取得了很大的进展,许多拟染色小体的蛋白和RNA组分被发现,但是拟染色小体的功能和机制仍然不清楚,需要进一步的探究。 本文发现CaMKIV (Ca2+/Calmodulin-dependent Protein Kinase IV, CaMKIV)定位在拟染色小体上,是拟染色小体的一个新的组分。CaMKIV是钙调蛋白激酶家族之一,据报道CaMKIV表达在睾丸的精原细胞和精子细胞中,并且camkiv基因敲除小鼠由于在精子变形过程中组蛋白替换异常而不育。研究发现CaMKIV能够和拟染色小体中的MVH.

05)；SAP+W组肺组织p-PKB表达也自3h后开始上升，至12h达最高，较SO组升高,但较SAP组明显降低(P<0.05)。SAP组肺组织MPO、MMP-9活性也随发病时间推移逐渐升高，与该组p-PKB升高趋势保持一致，与SO组比较(P<0.05)，同时肺含水率、胰肺病理损伤等情况变化与SO组比较明显升高（P<0.05)；SAP+W组肺组织MPO、MMP-9的表达也与该组p-PKB变化情况一致，但较SAP组明显降低(P<0.05)，余指标与SAP组比较明显好转(P
目的：观察退变腰椎间盘髓核组织中P-p38MAPK的表达情况和Ⅱ型胶原含量的变化，探讨P-p38MAPK与腰椎间盘退变程度间的关系。

点击此处 内容：HE染色后在光镜下观察实验组和对照组的髓核组织病理差异;免疫组化法测定实验组和对照组的髓核组织中Ⅱ型胶原的含量；免疫组化法测定实验组和对照组中P-p38MAPK在髓核细胞中的表达情况。 方法：选取40例临床病人术后腰椎间盘标本。分为2组。第1组（实验组）:共25例。其中男性17例，女性8例，年龄32-65岁。来自腰椎间盘突出症患者。第2组（对照组）：共15例，男性11例，女性4例，年龄6-36岁。其中12例来自腰椎骨折的年轻病人，2例来自腰椎结核邻近节段的椎间盘组织；1例来自儿童腰5半椎体畸形的病人，所有病人无腰疼病史、CT和MRI检查未见有腰椎间盘突出。 所有标本分别制作蜡块和冰冻切片。HE染色后，在光镜下观察实验组和对照组的髓核组织病理差异。用免疫组化法测定P-p38MAPK的表达情况。阳性结果判断：P-p38MAPK蛋白表达于细胞核，呈黄色或棕黄色颗粒。免疫组化法测定Ⅱ型胶原纤维表达情况。Ⅱ型胶原纤维表达在细胞浆和细胞外基质中。Ⅱ型胶原免疫组化阳性结果判断：Ⅱ型胶原在基质和细胞浆中表达，呈现黄色或棕黄色。应用图像分析软件评价分析免疫组化染色的P-p38MAPK和Ⅱ型胶原在相应区域的表达情况，自动计算出其灰度值查看表达的强弱。灰度分级O–255级，0级最深，255级最浅，其值越小，表达就越强。测定结果为视野内的平均灰度。每个标本选取7个视野，取其平均值作为该标本的平均灰度值。对照组和实验组的数据用双自由样本t检验进行统计分析。最后分析每个标本中的P-p38MAPK和Ⅱ型胶原的相关性。

结果：1HE染色普通目镜下观察：对照组：髓核组织切片中髓核细胞分布于细胞外基质中，数量较多，呈圆形或椭圆形，细胞周围胶原纤维排列有序形成网状结构。实验组：髓核组织切片中髓核细胞和软骨细胞数目较少，细胞较大且外形不规则，细胞质中出现“空泡征”。细胞外周胶原纤维排列混乱,有粘液性变。其间可见空洞或断裂的纤维结构。 2免疫组化法测定P-p38MAPK结果如下：对照组中P-p38MAPK表达较少，平均灰度值为198.81±17.52；实验组中P-p38MAPK表达较多，平均灰度值为115.99±21.11；两者差异性明显（P＜0.05)。 3免疫组化法测定Ⅱ型胶原结果如下：对照组中Ⅱ型胶原表达较多，平均灰度值为163.52±11.27；实验组中Ⅱ型胶原表达较少，平均灰度值为187.98±17.25；两组间差异性明显（P＜0.05)。 Capmatinib供应商 4随着椎间盘退变，P-p38MAPK在髓核细胞中的表达逐渐增多，Ⅱ型胶原的含量逐渐减少。两则之间具有相关性。相关系数为r=-0.731。 结论：1在退变的腰椎间盘组织中存在P-p38MAPK的大量表达。 2随着腰椎间盘组织退病变程度的加重，P-p38MAPK的表达量也逐渐增加，P-p38MAPK可能参与了椎间盘的退变过程,是腰椎间盘退变的原因之一。
目的：分析心血管疾病患者合并消化道出血的临床特征,以及服用抗血小板药物对于消化道出血的影响。 方法：对近年来浙江大学附属第一医院的心血管疾病合并消化道出血的住院患者进行回顾性分析,根据是否服用抗血小板药物分成服药组和对照组,比较两组的各项指标。 结果：所调查患者男性占62.1%,年龄72.25±14.38岁,女性占37.9%,年龄73.94±9.74岁。消化道出血原因中,药物相关、门脉高压等引起的出血与既往消化道出血病史相关联(p=0.023),血管畸形多引起下消化道出血(p=0.00),血管畸形和原因不明的消化道出血常出现更低的血红蛋白浓度(p=0.013)。

服药组和对照组在年龄、平均住院日、OB转阴时间、休克指数、反映出凝血、生命体征的各指标上经统计学检验均无显著差异(p>0.05)。但服药组发生消化道大出血(大于1000m1)明显高于对照组(p=0.007),服药组患者的既往心血管病史明显长于对照组(p=0.002),住院前消化道出血时间更短(p=0.029)。 获悉更多 结论：消化道出血同时合并心血管疾病以老年男性为主,出血原因以消化性溃疡、血管畸形、药物相关为主,合并的心血管疾病以高血压、冠心病、心律失常为主。部分消化道出血原因与出血部位、既往出血病史相关。 服抗血小板药物患者的消化道大出血明显高于对照组,且患心血管病史更长,更早发现消化道出血并就诊。服药不影响住院消化道出血患者的病情及病程。
1.研究背景及目的 乙型病毒性肝炎是一种世界性疾病,感染者可发展为慢性肝炎,最终导致肝硬化和肝癌。全国现有慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者约3000万人其中约5%的患者将发展成为重型肝炎。一旦发展至重型肝炎,病人临床救治成活率不足40%。做到早期发现、早期干预,对于防止肝炎重症化的发生非常重要。因此,迫切需要找出早期预示疾病发生、监测疾病发展和严重程度的敏感、可靠的指标。 我们前期基因芯片实验发现在ConA诱导的小鼠肝炎模型中RCOR3表达有显著差异。RCOR3是抑制元素-1沉默转录因子协阻抑因子(repressor element silencing transcription factor corepressor, CoREST)家族成员之一,其功能就是作为REST的协阻抑因子协助REST发挥转录抑制作用,REST抑制功能的发挥依赖于RCOR3目前为止,未见到关于REST (RCOR3)与乙型肝炎的相关研究报道。 本研究旨在研究慢性乙型肝炎患者外周血RCOR3在不同病情状态下的差异表达,并分析其与临床炎症损伤指标的相关性,并通过探析抗炎制剂对RCOR3的调控作用及其机制,揭示RCOR3参与慢性乙型肝炎的作用机制。 2.研究方法 2.

7-0.9μm范围,中值直径在0.1μm左右,气溶胶总浓度为0.2mg/m3。暴露后小鼠从病理症状看出类似急性呼吸窘迫综合症,并最终导致全身器官衰竭而死亡。经双向电泳及质谱鉴定等技术分析出6种肺组织差异表达蛋白：载脂蛋白A-1、14-3-3蛋白、高迁移率族蛋白B1、过氧化物酶6、二氢嘧啶酶相关蛋白-2、硒结合蛋白-1,分别与脂肪代谢、蛋白质表达调控、机体功能调控、氧化还原、神经元合成、抗癌元素结合等功能相关。为建立生物气溶胶感染模型和肺沉积模型提供了新的实验依据,为蓖麻毒素气溶胶粒子致呼吸系统损伤机制的研究奠定了理论基础,同时有望深入阐明蓖麻毒素的致毒作用机制提供了新的方向,为呼吸系统治疗药物的开发提供新的靶点和契机。
近二十年来,随着分子生物学理论和分子生物技术的迅猛发展,研究者获得了大量与动植物经济性状的遗传标记和候选基因,使得分子育种日益受到重视。在动物生产中,标记辅助选择(marker

assisted selection,MAS)能够直接在DNA水平上对性状进行有选择性地选择,选择准确性得到极大较高。动物生产和遗传育种工作者通过标记辅助选择,结合常规的育种选择,使得猪的生产性状有了较大幅度的提高。 本研究利用比较基因组学、生物信息学和分子生物学等方法,对3个猪骨骼肌生长发育相关的基因:原肌球调节蛋白1(TMOD1)、促分裂原活化蛋白激酶激酶3(MKK3)和促分裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)的部分基因组序列进行了克隆,在此基础上开展了单核苷酸多态(SNP)搜寻及与猪生产性状的关联分析。研究取得的结果如下: (1)成功获取了猪TMOD1基因的cDNA部分序列,MKK3基因第七内含子部分序列和MKK6基因第四内含子部分序列,并已递交到GenBank。 selleck化学药品液面控制 (2)对上述三个基因进行SNPs的检测,发现TMOD1基因第7外显子存在一个A134G突变,属于同义突变,该突变位点能被MvaI识别;MKK3基因第7内含子存在一个C439T突变,该突变位点能被AvaⅠ识别;MKK6基因第4内含子存在一个A324G突变,第9内含子存在一个C208T突变,分别能够被AvaⅢ和AluI所识别。 Cytoskeletal Signaling抑制剂 (3)利用PCR-RFLP方法对上述3个基因4个SNPs在我室与通城县畜牧局合作组建的试验猪群中进行分型和关联分析,试验猪群包括通城(38头)、长白(25头)、大白(22头)、长大通(长白猪♂×(大白×通城)♀)(34头)和大长通(大白♂×(长白×通城)♀)(38头)。结果表明TMOD1基因的SNP-A134G与背最长肌pH显著相关(P＜0.05)。MKK3基因SNP-C439T与胴体直长显著相关(P＜0.05)。MKK6基因的SNP-C208T主要与大理石纹显著相关(P＜0.05)。

(4)对上述3个基因4个SNPs在美国依阿华州立大学Berkshire×Yorkshire F2群体中(n=515)中进行分型和关联分析。结果发现TMOD1基因的SNP-A134G与眼肌面积、平均背膘厚、最后肋背膘厚、腰部背膘厚、第10肋背膘厚、腿肌pH和背最长肌pH显著相关(P＜0.05);MKK3基因SNP-C439T与眼肌面积、硬度显著相关(P＜0.05);MKK6基因的SNP-A324G与平均糖酵解能力和系水力显著相关(P＜0.05);MKK6基因的SNP-C208T主要与测试期日增重和初生重著相关(P＜0.05)。 综合本研究结果,TMOD1、MKK3、MKK6基因与猪的部分生产性状显著关联,可作为影响生产性状的潜在候选基因。
目的

研究黄芪多糖（APS）对腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥厚的改善作用及其在能量代谢方面的作用机制。 方法 采用腹主动脉缩窄(AAC)法制作心肌肥厚大鼠模型，实验分为假手术组(Sham组)、肥厚模型组（AAC组）和黄芪多糖治疗组（APS200、400、800mg kg-1组）APS治疗组在手术1周后ig给予APS200、400和800mg selleck激酶抑制剂 kg-1共给药11周。测定大鼠的心脏血流动力学改变，计算心脏指数(HMI)和左心室质量指数（LVMI）； HE和Masson染色观察大鼠左室心肌形态学改变；免疫荧光和Western法测定心肌细胞骨架及微管蛋白含量；采用高效液相色谱法测定心肌组织中ATP，ADP和AMP含量；测定左心室游离脂肪酸（FFA）和乳酸（LAC）的含量；采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定心肌心钠素mRNA（ANPmRNA）表达；采用JC-1法测定心肌细胞线粒体膜电位（MMP）的变化。 结果 与Sham组相比AAC大鼠心脏功能下降，心脏重量指数增加(P<0.01)；光镜下观察：心肌细胞变大，排列紊乱；细胞骨架粗糙，无清晰的结构；心钠素（ANP）的mRNA的表达，心肌游离脂肪酸（FFA）和乳酸（LAC）含量显著升高(P<0.01)；ATP，ADP，AMP含量降低(P<0.01)；线粒体膜电位降低(P<0.01)；与其相比APS组大鼠心脏功能改善，心脏重量指数降低（P<0.05或P<0.01）；光镜下观察：心肌细胞肥大程度较AAC组减轻，心肌纤维排列整齐；心肌细胞骨架明显改善；ANP的mRNA的表达降低（P<0.05或P<0.01）；FFA和LAC含量显著降低；心肌ATP，ADP和AMP含量增高；线粒体膜电位增高（P<0.

GO)勺注释分析,总结出有差异的基因功能集,并从中筛选出与肿瘤发生、进展密切相关的信号通路,作为后续功能验证的基础。试图阐述两个方面问题：一是基因表达模式是如何在EML4-ALK融合型NSCLC中发生变化的；二是差异表达基因参与的代谢途径有哪些以及这些代谢途径在EML4-ALK融合型NSCLC发生过程中的可能作用。 材料与方法 综合数据挖掘工具BRB-Array Tools(v4.1)、DAVID(Database for Annotation. Visualization, and Integrated Discovery, v6.7、GSEA(Gene Set Enrichment Analysis,v3.7),分别对ALK融合型NSCLC和非ALK融合型NSCLC表达谱芯片数据集进行数据挖掘,参考数据库为GO、KEGG等,并应用文献自主挖掘系统对pubmed上可检索到的文献(仅针对摘要内容)进行了初步的挖掘与筛选,以寻找组间差异表达基因,并对其生物学行为过程、分子生物功能、信号转导通路等领域进行了基因集富集和聚类分析。 结果 EML4-ALK融合型与野生型NSCLC相比存在83个差异表达基因,其中30个基因出现表达水平的显著上调；53个基因出现显著下调。这些差异表达基因经注释和富集分析,涉及5个生物学过程和4条信号转导通路。 Doxorubicin体内 结论 差异表达基因间具有一定的“相关性”,很少出现单个或是几个基因参与某个生物过程。EML4-ALK融合型肺癌形成并非某个分子的生物学行为,上述这些基因功能和信号转导通路的变化相互交错、互相影响,最终构成了EML4-ALK融合型NSCLC区别其他肺癌的分子基础。

第二部分EML4-ALK信号通路关键基因STAT3的初步功能验证 第一章STAT3表达产物的蛋白质相互作用网络构建 目的 将与STAT3基因产物相互作用的蛋白质构建相互作用网络,以此为依托探索其中的核心蛋白STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中的作用。以期从蛋白质相互作用水平阐述STAT3勺异常与该型肺癌的联系。 材料与方法 以EML4-ALK融合型肺癌和野生型肺癌差异表达基因为基础,应用cytoscape(v2.8)软件系统构建蛋白质相互作用网络,在蛋白质数据库SWISS-PORT、HPRD中检索相关蛋白质相互作用并结合文献数据挖掘构建与STAT3基因产物相互作用的网络,对STAT3在肺癌参与的信号通路进行富集分析,并与EML4-ALK出现异常的生物学行为和信号转导网络进行比对。 结果 以肺癌中与STAT3存在相互作用的蛋白质为基础,构建蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction, PPI)。之现113个蛋白与STAT3相互作用,涉及至少23条与肺癌显著相关的生物学过程、分子功能及信号转导通路；将其进行功能聚类后与EML4-ALK融合型肺癌中出现异常表达的基因集求交集(与非ALK融合型非小细胞肺癌比较,ALK融合型肺癌存在83个异常表达基因。见第一部分第二章结果部分),发现STAT3调节的ALK、GHR两个分子在EML4-ALK型肺癌中异常表达；STAT3参与调节的Wnt通路在EML4-ALK融合型肺癌中也表达失调。

还有 结论 STAT3通过与ALK的直接相互作用,可能参与EML4-ALK融合型肺癌的发生与增殖；该基因调节的Wnt等信号通路在EML4-ALK融合型肺癌中亦存在异常。这些发现揭示了STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中的重要作用,有必要对STAT3基因的功能在EML4-ALK融合型肺癌中的作用进行进一步验证。 第二章模式细胞中STAT3的表达对其生物学特性的影响 目的 根据生物信息学分析,STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中发挥了重要的信号转导功能。本研究应用表达载体介导的RNAi技术及分子克隆技术,构建STAT3干扰或过表达载体并通过在模式细胞中控制该基因表达,探索EML4-ALK融合型肺癌中沉默或上调STAT3信号通路后肿瘤细胞生物学行为的改变。 点击此处 方法 细胞培养：复苏表达EML4-ALK融合基因的人肺腺癌H2228及EGFR/K-RAS野生型肺腺癌细胞株H1299,并用含10%胎牛血清的RPMI1640传代培养。 确定shRNA-STAT3序列：根据Genebank中检索到人STAT3全长开发读码框(open reading frame, ORF),调取3条不同的RNAi Consortium数据库中经商业验证的shRNA-STAT3序列,并进行BLAST验证比对。 重组载体pSilencer4.1_CMV_STAT3的构建与鉴定：以这三条验证有效的siRNA干扰序列为基础,遵从Ambion公司提供的pSilencer4.1_CMV载体构建说明,将其设计为特异性的shRNA-STAT3单链模板。将合成的3对单链寡核苷酸经HPLC纯化、等比例混合退火后,与经BamHI和Hind Ⅲ双酶切线性化的pSilencer4.1_CMV按说明书建议比例以T4DNA连接酶16℃过夜连接；环化成功的质粒转化DH5a;以Amp筛选阳性克隆并挑取之,然后过夜摇菌扩增；小提质粒双向测序鉴定；中提并纯化成功构建的干扰质粒pSilencer4.1_CMV_STAT3,分装备用。

克隆STAT3基因：根据Genebank检索到人STAT3基因最长转录本的开发读码框(open reading frame, ORF),设计带有酶切位点的引物,以H2228细胞总cDNA为模板进行扩增 重组质粒pcDNA3.1+STAT3的构建及鉴定：将模板扩增PCR产物纯化后与克隆载体pMD-18T连接,转化感受态、筛选阳性克隆并扩增；抽提质粒行双向测序等鉴定。中提并纯化重组质粒,分装保存等步骤获取重组载体pcDNA3.1+STAT3。 瞬时转染：应用Roche Fugene6转染系统,将重组质粒和对照质粒转染人肺腺癌细胞株H2228和H1299。 基因沉默效果检测：Real Time qPCR及Western Blotting检测各组细胞中STATS及其他肺癌中的关键通路蛋白表达状态。 基因沉默后生物学特性改变：流式细胞仪Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡指数。 结果 STAT3基因特异性沉默效果检测：用Western Blotting检测siRNA-STAT3-1和shRNA-STAT3-2干扰效果,具体分为5组：shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2、 shRNA-scrambled、vector和空白。在模式细胞株H2228中,STAT3蛋白表达下调分别为64±2.3%和52±3.7%,ERK1/2和AKT及相应的磷酸化程度无明显变化,：nTOR出现了表达下调,其磷酸化水平呈显著降低；在模式细胞H1299中,shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2分别使其STAT3表达下调65±3.1%和55±4.

CCK-8法检测姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用。 2．侵袭小室观察姜黄素对TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞内的侵袭能力的影响。 3. Western blot检测姜黄素对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞内MMP-9的蛋白表达以及上游Smad2、ERK1/2、p38的磷酸化水平。

4.明胶酶谱法检测姜黄素对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞上清液中MMP-9的活性变化。 5. Western 通常 blot和酶谱法检测姜黄素，ERK特异性抑制剂PD98059，p38特异性抑制剂SB203580对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9蛋白表达及活性变化。 结果：1. CCK-8结果证实低浓度(≤10μM)姜黄素作用48h内，对乳腺癌MDA-MB-231细胞没有明显的细胞毒性作用（P＞0.05）；浓度大于10μM的姜黄素呈剂量，时间依赖性抑制细胞的生长（P＜0.05）。 2.侵袭小室检测显示姜黄素(≤10μM)呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量（P＜0.05）。 3. Western blot显示姜黄素(≤10μM)可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9，p-Smad2，p-ERK1/2以及p-p38的蛋白表达，其抑制作用呈浓度，时间依赖性。 4.明胶酶谱法结果表明姜黄素(≤10μM)随浓度增加对TGF-β1诱导的MMP-9活性的抑制作用显著增强（P＜0.05）。 5. ERK特异性抑制剂PD98059（30μM）抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素(10μM)相似，而p38特异性抑制剂SB203580（20μM）对MMP-9没有明显影响（P＞0.05）。 NVP-BEZ235 结论：姜黄素可能通过TGF-β/Smad，TGF-β/ERK信号通路降低TGF–β1诱导的MMP-9表达及其活性，从而抑制MDA-MB-231细胞侵袭性。
目的：甲基乙二醛（MGO）是葡萄糖活性代谢产物，晚期糖化终产物受体（RAGE）可抑制MGO代谢的关键酶乙二醛酶1（GLO-1）。MGO和晚期糖化终产物受体的水平在糖尿病人中明显增高，与糖尿病加速动脉粥样硬化有关，但它们之间相互作用在糖尿病加速动脉粥样硬化中的意义仍不清楚。本课题组前期研究发现MGO诱导Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-α、IFN-γ。本实验将进一步研究RAGE及其胞内信号对MGO诱导的Jurkat细胞分泌TNF-α和IFN-γ的影响，为了解糖尿病加速动脉粥样硬化机制提供了实验基础。

方法：①不同浓度的MGO（0、15、30、60μM）作用PHA（0.25μg/ml）预刺激的Jurkat细胞24h，Western blot检测RAGE表达。②不同浓度MGO（0、15、30、60μM）作用于PHA预刺激的Jurkat细胞24h，ELISA检测TNF-α和IFN-γ的分泌；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。③不同浓度MGO（0、15、30、60μM）作用PHA预刺激的Jurkat细胞24h, 获悉更多 Western blot测钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（CaMKIV）的表达；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。免疫荧光检测30μM MGO作用0、15、30、60min后的Jurkat细胞内CaMKIV转核情况；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。④30μM

MGO作用PHA预刺激24h的Jurkat细胞0、15、30、60min，Western blot检测p38MAPK磷酸化表达；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。⑤30μMMGO作用于CaMKIV抑制剂KN62（10μM）、p38MAPK抑制剂SB203580（25μM）预处理的Jurkat24h，ELISA检测TNF-α和IFN-γ的分泌。 结果：①MGO作用于PHA预刺激的Jurkat细胞24小时，Western Blot显示Jurkat细胞表达RAGE，15、30、60μM MGO均上调RAGE的表达，与MGO未作用组比较差异有统计学意义（P<0.05）。RAGE抗体能抑制MGO诱导Jurkat细胞分泌TNF-α及IFN-γ（p0.05）。③15-60μM MGO能增加CaMKIV的表达，与MGO未作用组比较差异有统计学意义（p<0.05）。RAGE抗体抑制MGO诱导的CaMKIV的表达（p0.05）。免疫荧光显示30μM MGO作用15-60min促进Jurkat细胞CaMKIV核转位；RAGE抗体抑制MGO诱导的CaMKIV蛋白核转位，而非特异抗体预处理对MGO诱导CaMKIV蛋白核转位无影响。④30μM MGO作用Jurkat细胞15-60min引起Jurkat细胞内p38MAPK磷酸化表达增加（p<0.05）；RAGE抗体抑制MGO引起的p38MAPK磷酸化（p0.05）。⑤CaMKIV，p38MAPK通路抑制剂预处理抑制MGO诱导TNF-α和IFN-γ的分泌（p
目的：探讨烟酸能否通过诱导血红素加氧酶1表达抑制氧化应激导致的内皮细胞凋亡，以及烟酸诱导血红素加氧酶1表达的信号途径。进一步阐明烟酸抗动脉粥样硬化的药理机制，为烟酸的临床应用提供新的实验依据。 方法：过氧化氢（100uM）用于诱导氧化应激，实验分别使用不同浓度烟酸（0.25，0.5或1.

002);(3)抗胃动素血清可明显限制胃动素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(5.1±0.5)%(t=5.9, P=0.001)和(7.6±0.4)%(t=8.4, P=0.001),抗胃动素血清限制套索纤维收缩程度高于钩状纤维(t=3.02, P=0.040);磷脂酶C抑制剂U-73122明显抑制胃动素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(13.3±0.8)%(t=9.68, P=0.001)和(12.1±1.5)%(t=6.31, HIF cancer P=0.003),但两者比较无明显差别(t=1.29, P=0.268);三磷酸肌醇受体拮抗剂肝素分别阻断胃动素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(13.8±1.2)%(t=6.91, P=0.002)和(12.9±1.4)%(t=7.12, P=0.002),两者比较无明显差别(t=0.37, P=0.730);(4)胃动素使套索纤维和钩状纤维与[35S]GTPγS结合率明显升高(66.5±28.4)%(t=2.86, P=0.046)和(60.1±17.2)%(t=3.20, P=0.033),但两者比较无明显差别(t=0.32, P=0.764);(5) Gαi3抗体可明显抑制胃动素对套锁纤维和钩状纤维的收缩效应,细胞收缩百分数分别为(11.1±1.4)%(t=3.22, P=0.032)和(7.9±3.3)%(t=3.52, P=0.025),但两者比较无明显差别(t=1.10, P=0.333);Gαs和Gαq/11抗体对胃动素引起套锁纤维的收缩效应无明显影响。表明与胃动素耦联的G蛋白类型是Gi蛋白。

结论:胃动素受体在人LES套锁纤维和钩状纤维均有表达,套锁纤维表达高于钩状纤维;胃动素引起套锁纤维和钩状纤维收缩的规律明显不同,套锁纤维收缩反应强于钩状纤维。阐明了介导胃动素引起套锁纤维和钩状纤维收缩的信号转导通路为:胃动素与特异性的胃动素受体结合,通过Gi蛋白与磷脂酶C偶联,产生三磷酸肌醇,使胞内三磷酸肌醇敏感的钙库释放Ca~(2+),引起套锁纤维和钩状纤维收缩。 第二部分胃泌素对人类LES套索纤维和钩状纤维的调节作用及其信号转导通路 目的:胃泌素是脑肠肽的一种,是促进胃肠运动的重要激素。有研究显示短暂性LES松弛与胃泌素相关。本文主要讨论胃泌素引起套锁纤维和钩状纤维收缩规律及其信号转导通路。 方法:选取2009年5月至2010年10月期间因食管中段癌于河北医科大学第四附属医院行手术治疗患者5例,术中分别收集套锁纤维和钩状纤维。(1)制备游离的套锁纤维和钩状纤维单细胞悬液,不同浓度胃泌素溶液(10~(-6), 10~(-7), 10~(-8), 10~(-9), 10~(-10), 10~(-12)mol/L)作用于套锁纤维和钩状纤维引起收缩反应,随后应用2.5%的戊二醛终止反应,并记录套锁纤维和钩状纤维的长度变化。应用GraphPad Prism5.0软件对数据进行非线性回归分析,得出浓度-反应曲线,得到套锁纤维与钩状纤维发生最大收缩幅度时胃泌素溶液浓度;(2)应用皂苷制备可通透套锁纤维和钩状纤维单细胞悬液,分别观察胃泌素抗血清(1:100)、磷脂酶C抑制剂U-73122(10~(-6)mol/L)、三磷酸肌醇受体拮抗剂肝素(10μg/mL)对胃泌素引起套锁纤维和钩状纤维的收缩反应变化规律;(3)通过[35S]GTPγS结合实验,观察G蛋白水平变化;(4)观察特异性G蛋白抗体(Gαi3、Gαs、Gαq/11)对胃泌素作用的影响,分析与胃泌素受体耦联的G蛋白的类型。

点击此处 结果:(1)胃泌素在10~(-6)-10~(-12) mol/L范围内均对套锁纤维和钩状纤维产生收缩效应,呈剂量-效应关系,并且最大反应浓度为10~(-6)mol/L。胃泌素引起套索纤维和钩状纤维出现最大收缩百分率分别为(27.3±0.7)%和(23.7±0.6)%,套锁纤维收缩百分率高于钩状纤维(t=3.88, P=0.018);(2)胃泌素抗血清可分别阻断胃泌素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(10.9±1.1)%和(14.2±0.5)%,抗胃泌素血清限制套索纤维收缩程度高于钩状纤维(t=3.20,

P=0.033);磷脂酶C抑制剂U-73122分别阻断胃泌素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(13.1±2.1)%(t=6.15, P=0.004)和(11.4±2.0)%(t=4.71, P=0.009),两者比较无明显差异(t=0.54, P=0.620);三磷酸肌醇受体拮抗剂肝素分别阻断胃泌素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(13.5±0.7)%(t=9.1, P=0.001)和(12.2±2.1)%(t=3.08, P=0.037),两者比较无明显差异(t=0.57, P=0.602);(3)胃泌素使套索纤维和钩状纤维[35S]GTPγS结合率明显升高(72.1±14.5)%(t=3.11, P=0.036)和(36.5±14.2)%(t=3.01, P=0.039),两者比较无明显差别(t=1.61, P=0.182);(4) Gαi3抗体可明显抑制胃泌素对套锁纤维和钩状纤维的收缩效应,细胞收缩百分数分别为(10.6±1.2)%(t=7.41, P=0.002)和(8.8±0.6)%(t=4.56, P=0.010),两者比较无明显差别(t=1.03, P=0.362); Gαs与Gαq/11抗体对胃泌素引起套索纤维收缩百分数分别(25.6±1.7)%(t=0.43, 寻找更多 P=0.688)和(24.6±5.1)%(t=0.69, P=0.528),对钩状纤维收缩百分数分别为(19.3±2.0)%(t=0.81, P=0.460)和(20.6±5.4)%(t=0.29, P=0.785),表明与胃泌素耦联的G蛋白是Gi。 结论:胃泌素受体在人LES套锁纤维和钩状纤维均有表达;胃泌素引起套锁纤维和钩状纤维收缩的规律明显不同,套锁纤维收缩反应强于钩状纤维。阐明了介导胃泌素引起套锁纤维和钩状纤维收缩的信号转导通路为:胃泌素与特异性的胃泌素受体结合,通过Gi蛋白与磷脂酶C通路偶联,产生三磷酸肌醇,使胞内三磷酸肌醇敏感的钙库释放Ca~(2+),引起套锁纤维和钩状纤维收缩。 第三部分促胰液素对人类LES套索纤维和钩状纤维的调节作用及其信号转导通路 目的:促胰液素是一种重要的胃肠调节激素,属于脑肠肽。生理剂量的促胰液素即可抑制胃运动,使胃舒张。本文主要讨论促胰液素引起套锁纤维和钩状纤维舒张变化规律及其信号转导通路。 方法:选取2009年5月至2010年10月期间因食管中段癌于河北医科大学第四附属医院行手术治疗患者5例,术中分别收集套锁纤维和钩状纤维。(1)制备游离的套锁纤维和钩状纤维细胞悬液,不同浓度促胰液素溶液(10~(-6), 10~(-7), 10~(-8), 10~(-9), 10~(-10), 10~(-12)mol/L)作用于套锁纤维和钩状纤维引起舒张反应,随后应用2.5%的戊二醛终止反应,并记录套锁纤维和钩状纤维的长度变化。应用GraphPad Prism5.

绵马素PB对多种肿瘤细胞株具有良好的增殖抑制作用。其中对HepG2细胞的抑制作用最强,IC50值是10.59±0.67μM,进一步检测结果表明,绵马素PB对HepG2细胞的增殖抑制作用是呈时间和浓度依赖的。然而,正常的小鼠单核巨噬细胞Raw264.7和小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的IC50值分别是42.50±0.54μM和38.19±0.92μM,远远大于HepG2细胞,说明绵马素PB对正常细胞株的毒性较小。另外,使用激光共聚焦显微镜从形态学角度观察绵马素PB作用于人肝癌HepG2细胞后的变化,可以看出其细胞染色质凝集并固缩,细胞核膜核仁碎裂成小片段形成凋亡小体。

2.绵马素PB能够诱导HepG2细胞发生凋亡。首先,使用罗丹明123染色法检测绵马素PB作用于人肝癌HepG2细胞后线粒体跨膜电位的变化,结果呈现明显地下降趋势。其次,采用琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带(DNA 以及 Ladder)的产生,可以看出加入绵马素PB后的HepG2细胞的泳道内均有明显的DNA Ladder出现。最后,利用AnnexinV-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡百分率,结果显示绵马素PB作用于HepG2细胞48h后,细胞的凋亡百分率显著升高,并且呈浓度依赖的方式。 3.绵马素PB通过调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路从而引起HepG2肝癌细胞凋亡(1)绵马素PB可以抑制PI3K的表达,抑制Ser473Akt的磷酸化,抑制Ser9GSK-3β的表达,随后上调NAG-1的表达。相似地,加入PI3K抑制剂渥曼青霉素后,各蛋白的表达效果和绵马素PB作用一致。该结果说明PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能是绵马素PB作用于HepG2肝癌细胞的主要分子机制之一。 VX-770临床试验 (2)绵马素PB诱发了caspase-3的激活和PARP的裂解。用广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理HepG2细胞2h后,可明显地抑制二者的变化。这说明绵马素PB诱导的HepG2细胞凋亡是通过caspase所依赖的途径。 综上所述,绵马素PB在不影响正常细胞生长的状况下,可以有效地抑制HepG2肝癌细胞的增殖,这种增殖抑制作用与其诱导的细胞凋亡密切相关。绵马素PB通过caspase所依赖的途径诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡,其中PI3K/Akt/GSK-3β/NAG-1信号通路可能作为最主要的分子机制之一。上述研究结果将对绵马素PB进一步的研究并开发为新药提供良好的理论基础。
世界范围内，乳腺癌发病率与死亡率高，是影响女性健康的重要疾病。其中HER-2(Human

epidermal growth factor receptor-2)蛋白过表达乳腺癌，传统检测易误诊、漏诊，在治疗过程中易产生副作用及引发不良预后。随着纳米科技理论的进步及纳米颗粒制备工艺的改善，因金纳米颗粒独特的理化特性，将其引入肿瘤医学领域，对乳腺癌的检测与治疗有创新意义。 目的 通过金纳米颗粒制备及曲妥珠金纳米探针合成，探讨颗粒毒性、探针暗场应用及处理乳腺癌细胞实验效果，为乳腺癌纳米医学诊断与治疗研究提供依据。 哪里 方法 以柠檬酸盐还原法制备金纳米颗粒(Gold nanoparticles,GNPs)，对颗粒进行透射镜(TEM)表征及紫外吸收光谱检测，通过静置检测金纳米颗粒时间稳定性；GNPs通过静电作用吸附曲妥珠单抗(Herceptin)，进而合成曲妥珠金纳米探针(GNP@Herceptin)，表征及稳定性检测方法同GNPs；中科院上海细胞库购买人乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3，免疫组化检测细胞HER-2蛋白表达；利用扫描电镜(SEM)，检测定位于细胞膜表面GNP@Herceptin，并在暗场环境下观察细胞膜上GNP@Herceptin；设置0-400mg/mL7浓度梯度GNPs，并设置培养液空白组，细胞增殖抑制剂盒检测GNPs细胞毒性；设置0-200ng/mL7浓度梯度GNPs、Herceptin和GNP@Herceptin，并设置培养液空白组，细胞增殖抑制试剂盒检测MCF-7与SK-BR-3细胞增殖抑制效果；设置0-1.0μg/mL4浓度梯度Herceptin、GNP@Herceptin，细胞凋亡试剂盒检测SK-BR-3细胞凋亡，细胞周期试剂盒检测SK-BR-3细胞周期阻滞；运用SPSS21.0对同种细胞不同浓度颗粒毒性、抗体与探针增殖抑制、细胞凋亡及周期阻滞数据进行单因素方差分析，同一浓度两种细胞颗粒毒性数据及抗体与探针最佳处理剂量采用两组独立样本t检验，检验水平α为0.05。

结果 金纳米颗粒近似圆形，粒径大小(14.11±1.13) nm，并可与曲妥珠单抗成功吸附，溶液澄清透亮，稳定性好；GNPs与Herceptin结合率为2.25：1，结合效果好；通过SEM检测，可发现定位于细胞膜表面的GNPs@Herceptin，并且在暗场环境下，可看到SK-BR-3细胞周围的橘黄色生物探针；GNPs浓度在400μg/mL时，MCF-7细胞存活率减少至43.9%(t=39.709，P=0.001)，在100μg/mL时，SK-BR-3细胞存活率为65.1%(t=6.796，P=0.002)，均有明显细胞毒性效果，但金纳米颗粒浓度下降至50μg/mL时，SK-BR-3与MCF-7细胞生存率分别为82.8%(t=1.979，P=0.119)、99.3%(t=0.177，P=0.868)，且未显示出细胞增殖抑制效果，说明低浓度GNPs有良好的生物相容性。Herceptin处理SK-BR-3细胞后，最佳用药剂量为7.143ng/1×104细胞，GNP@Herceptin处理细胞后最佳用药量从50ng/mL降低至25ng/mL，且差异具有统计学意义(t=14.