5组Smad2、TGF-β1、RORγt、Foxp3 mRNA水平均增高(P
研究背景和目的肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,每年新发现的病人约70万,其中半数发生在我国。发病率高、死亡率高及有效治疗手段的缺乏使深入研究肝癌发病机制、探寻防治新靶点显得极为迫切。绝大多数肝癌病人都有肝纤维化、肝硬化的病史。而肝纤维化是肝脏损伤的一种高度保守的反应,发生在几乎所有与肝细胞死亡相关的疾病中。肝纤维化的病因包括病毒性肝炎、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、胆汁阻塞性疾病和肝脏自身免疫性疾病等。肝纤维化是一个多细胞反应性疾病,其中肝星状细胞发挥最主要的作用,产生约90%的细胞外基质。肝纤维化晚期发展为肝硬化,而肝硬化具有很高的癌变风险,相当一部分最终发展为肝癌。因此,探寻肝纤维化的治疗手段和发现新的干预靶点具有同样重要的临床意义。HLF(Hepatic Leukemia Factor)的发现源于E2A-HLF融合基因的克隆。E2A-HLF是由t(17;19)(q22;p13)易位形成的融合基因(19号染色体短臂13区的E2A基因与17号染色体长臂22区的HLF基因融合),最早发现于儿童前体B细胞急性淋巴细胞白血病(B cell precursor acute lymphoblastic leukemia);当时通过Northern-blot检测发现,HLF的表达仅限于肝细胞和白血病细胞中,因此将其命名为肝细胞白血病因子。后续的研究还发现,HLF属于脯氨酸和酸性氨基酸含量丰富的碱性亮氨酸拉链(proline

and acidic amino acid-rich basic leucine zipper,PAR bZIP)转录因子家族成员；该转录因子家族另外两个成员是白蛋白-D位点结合蛋白(albumin Dabrafenib供应商 D-site-binding protein, DBP)和毒性当量因子(thyrotroph

embryonic factor,TEF)。HLF通过形成同型二聚体或与其他PAR bZIP家族成员形成异型二聚体的方式,结合靶基因启动子区特异的DNA序列并激活转录。PAR bZIP转录因子家族与细胞的生物节律密切相关。研究表明,PAR bZIP家族蛋白DBP、TEF和HLF的同时缺失,会导致小鼠寿命缩短,出现心肌肥大、低血压、低醛固酮等症状,并易发生癫痫而死亡。前期研究发现HLF与造血干细胞的分化和功能有关,在造血系统的恶性肿瘤中发挥重要的作用,同时它还参与肝脏的代谢。但HLF在肝纤维化和肝癌中的作用未见报道。因此,本课题将系统研究HLF在肝纤维化和肝癌发生发展中的作用及分子机制,并结合临床资料探讨其作为肝纤维化和肝癌干预靶点及预后标志物的可行性。研究方法：1.鉴定并繁殖HLF组成性转座敲除小鼠,建立CCl4及胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化模型,与对照组比较,研究HLF调控肝纤维化的作用；2.利用HLF转座敲除小鼠建立DEN诱导的小鼠肝癌模型,通过与对照组小鼠相比较,研究HLF调控肝癌发生的作用；3.构建过表达和干扰HLF的质粒,并利用慢病毒系统建立稳定过表达及干扰HLF的肝癌细胞系SMMC-7721 micro -HLF、MHCC-LM3 micro -HLF、97H micro-HLF、SMMC-7721 flag -HLF、MHCC-LM3 flag -HLF及其对照细胞系；4. SMMC-7721 micro -HLF、MHCC-LM3 micro -HLF、97H micro -HLF、 SMMC-7721 flag -HLF、MHCC-LM3 flag -HLF及其对照细胞系分别采用CCK-8实验、细胞周期检测、平板克隆实验、划痕实验、Invasion chamber迁移和侵袭实验观察过表达及干扰HLF后对肝癌细胞生长和转移等生物学特性的影响；5.将MHCC-LM3 点击此处 micro

-HLF及其对照细胞分别接种裸鼠皮下,观察HLF对肝癌细胞体内增殖能力的影响；6.将97H micro -HLF、MHCC-LM3 flag -HLF及其对照细胞分别进行裸鼠尾静脉注射,建立小鼠肝癌肺转移模型,观察HLF对肝癌细胞体内转移能力的影响。7.分离HLF组成性转座失活小鼠及对照小鼠原代肝星状细胞,利用CCK-8实验、划痕实验等方法观察HLF对肝星状细胞活化的影响;8.构建过表达HLF的腺病毒,感染人肝星状细胞系LX-2,采用CCK-8实验、细胞周期检测、Transwell实验等方法,观察过表达HLF对肝星状细胞增殖、迁移、分泌等生物学特性的影响；9.利用Realtime-PCR, western-blot、免疫共沉淀、表达谱芯片、ChIp-seq等方法研究HLF对c-Jun、p21和IL-6/STAT3及PTEN/Akt等信号通路的调控；10.利用RT-PCR, western-blot及免疫组化等方法检测肝纤维化临床样本中HLF的表达情况并运用统计学方法分析HLF的表达与临床病人肝纤维化程度的相关性；11.利用RT-PCR, western-blot及免疫组化等方法检测肝癌临床组织样品中HLF的表达情况并运用统计学方法分析HLF的表达与临床病理和预后资料的相关性。研究结果：1.以CCl4和胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化为模型,我们研究发现与野生型小鼠相比较,HLF敲除小鼠的肝纤维化明显减轻。2.分离原代小鼠肝星状细胞进行试验我们发现,与野生型小鼠相比HLF敲除小鼠肝星状细胞的增殖、迁移和分泌能力显著下降。3.将表达HLF的腺病毒感染肝星状细胞后进行RT-PCR、western blot和免疫组化检测发现,HLF可通过调控IL-6/STAT3信号通路促进肝纤维化。4.机制研究的结果还发现,肝星状细胞中HLF的表达受TGF-3调控。5.通过对带有详细病理资料的人肝纤维化组织进行HLF的western-blot及免疫组化检测并评分发现,HLF的表达与肝纤维化的程度呈正相关。6.利用经典的DEN诱癌模型我们发现,HLF敲除组小鼠肝癌发生率明显降低,形成肿瘤的数量和体积也显著低于对照组小鼠,提示HLF对肝癌发生具有促进作用。7.通过对DEN诱癌小鼠的肝癌与癌旁组织进行表达谱芯片分析发现,与对照小鼠相比,HLF敲除小鼠的肝脏癌组织中AP-1家族的表达差异最大,western selleck合成 blot检测的结果验证了这一发现,这提示HLF可能通过调控c-Jun促进肝癌的发生。8.在肝癌细胞中过表达或干扰HLF后进行增殖、周期、平板克隆形成及裸鼠荷瘤实验发现,HLF可促进肝癌细胞增殖和裸鼠成瘤能力。9.在肝癌细胞中过表达或干扰HLF后进行划痕实验、Transwell、Invasion chamber、裸鼠肺转移检测,结果发现HLF可促进肝癌细胞的体内外迁移和侵袭的能力。10.通过对过表达HLF肝癌细胞系及其对照细胞系进行免疫共沉淀、westernblot蛋白电泳、RT-PCR以及裸鼠皮下荷瘤及裸鼠肺转移灶上的免疫组化染色分析发现,HLF可通过调控p21信号通路促进肝癌细胞的增殖,通过调控PTEN/AKT信号通路促进肝癌细胞的转移。11.

5HZ,8h/d,3d）条件下Ihh对软骨细胞肥大分化的影响。 方法 （1）培育Col2a1-CreERT2;Ihhfl/fl和Ihhfl/fl基因工程小鼠，并鉴定其基因型。（2）提取未成熟小鼠肋软骨细胞体外培养，并鉴定其表型。（3）取P1代未成熟小鼠肋软骨细胞，随机分为对照组和CTS组，CTS组加载CTS，通过RT-PCR和ELISA检测Ⅱ型胶原（Collagen GDC-0449订单 type Ⅱ，Col-Ⅱ）、蛋白聚糖（aggrecan，AGG）糖胺多糖（glycosaminoglycans，GAG）、X型胶原（Collagen type X，Col-X）和基质金属蛋白酶-13（Matrix metalloproteinase13，MMP-13），以观察CTS对软骨细胞肥大分化的影响。（4）对Col2a1-CreERT2;Ihhfl/fl基因工程小鼠进行Ihh基因敲除,取其P0代肋软骨细胞为敲除组;而Ihhfl/fl基因工程小鼠不能敲除Ihh基因为对照组，通过RT-PCR检测Ihh和Gil-1,观察Ihh基因敲除率。（5）对注射TM的Ihhfl/fl和Col2a1-CreERT2;Ihhfl/fl小鼠的P1代肋软骨细胞施加CTS,分为CTS组（Ihhfl/fl）和CTS+敲除组（Col2a1-CreERT2;Ihhfl/fl），RT-PCR检测Ihh、Gil-1、Col-Ⅱ、AGG、Col-X和MMP-13mRNA的相对表达量，ELISA检测Col-Ⅱ、GAG、Col-X和MMP-13的蛋白表达量，以观察CTS条件性下Ihh对软骨细胞肥大分化的影响。

结果 （1）从P0代到P2代，随着传代次数的增加，AGG和COL-Ⅱ mRNA的相对表达量逐渐下降，而COL-ⅠmRNA的相对表达量逐渐升高。（2）RT-PCR和ELISA检测：CTS组Col-Ⅱ和AGG（GAG）的表达低于对照组，Col-X和MMP-13的表达高于对照组。（3）敲除组Ihh和Gil-1mRNA相对表达量低于对照组,Ihh基因敲除率为64%。（4）RT-PCR检测：CTS+敲除组Ihh和Gil-1mRNA相对表达量低于CTS组，Col-Ⅱ和AGG mRNA相对表达量高于对照组，Col-X和MMP-13mRNA的相对表达量低于CTS组；ELISA检测：CTS+敲除组Col-Ⅱ和GAG的蛋白表达量高于对照组，Col-X和MMP-13的蛋白表达量低于CTS组。 结论 （1）体外单层培养未成熟小鼠肋软骨细胞，反复传代会导致其发生去分化。P1代软骨细胞能够保持其大部分分化表型。（2）CTS（sin10%,0.5HZ,8h/d,3d）促进软骨细胞肥大分化。（3）以P1代未成熟小鼠肋软骨细胞作为软骨细胞来源，用条件性敲除Ihh基因的方法研究发现，在CTS（sin10%,0.5HZ,8h/d,3d）条件下Ihh促进软骨细胞肥大分化。
目的：Notch信号通路主要影响细胞的生长、增殖和分化，其异常激活常常与肿瘤的发生相关，但是有关Notch诱导肿瘤发生的分子病理机制还不完全清楚。本课题以液体肿瘤急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）和实体肿瘤胰腺导管癌（PDA）为研究对象，通过细胞生物学和分子生物学等研究方法，研究Notch直接调控靶基因的分子机制，考察Notch阻断剂抑制癌细胞增殖的活性。这项工作不但有助于深入了解Notch诱导肿瘤发生的分子机制，而且有望为新型肿瘤分子靶向治疗提供新思路。

Microbiology抑制剂 方法：鉴定Notch信号通路在T-ALL中的新型靶基因：用γ分泌酶抑制剂GSI或负显性DNMAML1封闭小鼠T-ALL细胞中的Notch信号通路，然后分别检测新靶点重组激活基因（Rag1和Rag2）mRNA的表达水平和蛋白质的表达水平。随后利用染色体免疫共沉淀测序技术（ChIP）鉴定Notch是否能直接结合Rag1或Rag2基因表达调控区。 Notch信号通路影响胰腺导管癌细胞生长增殖的功能和机制研究：用MTT法测定GSI对胰腺癌细胞增殖的抑制作用；然后用同样方法测定GSI是否协同化疗药物吉西他滨对不同恶性程度的胰腺癌细胞增殖的抑制作用。最后的机制研究亦采用实时荧光定量PCR技术检测靶基因c-Myc、Hes1、Jagged1和Jagged2的mRNA含量。 结果：鉴定Notch信号通路在T-ALL中的新型靶基因：实时荧光定量PCR和Western Blot的结果显示，GSI处理的小鼠T-ALL细胞G4A2和T6E中Rag1和Rag2mRNA的表达水平和Rag1蛋白质的水平都发生了显著下调；DNMAML1转染的T6E细胞中，Rag1和Rag2mRNA的表达水平明显下降。染色体免疫共沉淀的结果显示进入细胞核内的Notch能与Rag2基因上游的转录调控区结合。 Notch信号通路影响PDA细胞生长增殖的功能和机制研究：MTT法检测显示， 很少 GSI能抑制多种胰腺导管癌细胞的增殖，但程度不显著；当GSI和传统化疗药物吉西他滨联合用药时，癌细胞的数量明显减少。实时荧光定量PCR的结果显示Notch信号通路下游基因c-Myc、Hes1、Jagged1和Jagged2mRNA的表达水平都有了不同程度的下降，在不同恶性程度的PDA细胞中靶基因受调控的程度不同；其中Hes1mRNA的表达水平在各种PDA细胞中都有较大程度的下降，而c-Myc在恶性程度较高的癌细胞中下调明显。 结论：在急性T淋巴细胞白血病细胞中，我们发现并验证了两个Notch信号通路能直接调控的靶基因Rag1和Rag2。在胰腺导管癌细胞实验中，GSI抑制胰腺癌细胞增殖的作用不显著，与吉西他滨协同用药后能抑制恶性程度较高的PDA细胞的增殖。Hes1在各种PDA细胞中都有较大程度的下降，c-Myc仅在恶性程度较高的肿瘤细胞中下调较明显，提示它们为Notch下游介导重要功能的靶基因。
目的：探讨Hedgehog信号通路在肝癌细胞HepG2.2.15增殖、迁移中的作用。 方法：培养肝癌细胞HepG2.2.15，用5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L环耙明处理HepG2.2.

骨髓移植实验证明免疫细胞在PDCD4缺失导致动脉粥样硬化减弱过程中发挥主要作用 (1)分别收集Pdcd4-/-和C57BL/6小鼠股骨和胫骨中骨髓细胞,通过尾静脉注射移植入受致死剂量X射线照射的Ldlr-/-小鼠体内,高脂喂养12周和16周后,分别处死小鼠,主动脉根部制备冰冻切片,HE和油红O染色观察并比较斑块的大小。 (2)冰冻切片进行免疫组化染色比较巨噬细胞和T细胞在斑块局部的浸润情况。 (3) Western blot的方法检测骨髓移植后高脂喂养2周、12周和16周的Ldlr-/-小鼠血管斑块中PDCD4的表达。

2.体内实验研究PDCD4缺失对巨噬细胞和T细胞亚群的影响 (1)Pdcd4-/-Apoe-/小鼠和Apoe-/-小鼠高脂喂养8周或16周后,研磨小鼠脾脏,制备脾细胞的单细胞悬液,用流式细胞术的方法检测并比较巨噬细胞和T细胞各亚群(CD4+,CD8+,Th17,Treg)比例的变化,并用直线回归的方法分析其比例与斑块面积大小的相关性。 (2)冰冻切片免疫荧光或免疫组化染色比较斑块局部CD4+和CD8+比例的变化。 3.体内实验研究PDCD4缺失对巨噬细胞和T细胞相关细胞因子的影响 (1)血清中：流式细胞微球芯片试剂盒和ELISA的方法检测并比较Pdcd4-/-Apoe-/-和Apoe-/-小鼠高脂喂养后血清中细胞因子(IL-2,IL-4,IL-6,IFN-γ, TNF-α, IL-17, IL-10, TGF-p)的改变,并用直线回归的方法分析细胞因子浓度与斑块面积大小之间的相关性。 Z-VAD-FMK核磁共振 (2)斑块局部： 1)冰冻切片免疫双荧光染色比较斑块局部IL-17和IL-10水平的变化。 2)将含有大量斑块的主动脉弓及胸腹主动脉血管组织裂解提取RNA或蛋白,分别用real time PCR或Western

blot的方法检测并比较斑块局部细胞因子的改变。 4.体外实验研究PDCD4对T细胞功能的影响及其机制 (1)对T细胞增殖能力的影响： 1)体外培养脾细胞并刺激活化,CCK8试剂盒检测并比较实验组与对照组的增殖情况。 2)流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞的增殖情况。 3)流式细胞仪分别检测CD4+和CD8+T细胞中协同刺激分子CD28、CD137和协同抑制分子CTLA-4比例的变化。 (2)对T细胞分泌细胞因子的影响：流式细胞微球芯片试剂盒检测并比较培养上 selleck怎么样

selleck好不好

selleck中国 清中细胞因子的改变。 5.体外实验研究PDCD4对巨噬细胞功能的影响：收集Pdcd4-/-和C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞进行体外培养,并用氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激不同的时间段使其活化,ELISA的方法检测并比较培养上清中促炎性细胞因子IL-6、TNF-α和抑炎性细胞因子IL-10的浓度。 6.体内干预治疗确定IL-17和IL-10在PDCD4缺失减弱动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用：以Apoe-/-小鼠做正常对照,将Pdcd4-/-Apoe-/-小鼠分为三组,高脂喂养4周后分别给予生理盐水、重组IL-17细胞因子和IL-10中和性抗体腹腔注射一周一次,共注射5周,处死小鼠,主动脉根部制备冰冻切片,HE和油红O染色观察并比较斑块的大小。 7.分子机制研究探讨PDCD4从翻译水平还是转录水平调控IL-10的表达 (1)RNA蛋白结合免疫沉淀试剂盒(RIP)获得与PDCD4结合的全部RNA, real time PCR扩增IL-10,确定PDCD4是否与IL-10mRNA形成复合体从而确定PDCD4是否从翻译水平调控IL-10的表达。 (2)提取活化巨噬细胞的总RNA,用RT-PCR的方法检测并比较IL-10在mRNA水平的表达。 (3)提取活化巨噬细胞的蛋白,用Western

blot的方法检测并比较MAPK (JNK,ERK1/2,P38)信号通路的活化情况,并通过加入信号通路抑制剂后ELISA检测上清中IL-10的表达情况确定PDCD4通过哪条信号传导通路调控IL-10的转录。 结果 一、PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达与作用 1.动脉粥样硬化小鼠模型的建立我们给予8周龄的Apoe-/-小鼠高脂饲料喂养,造成体内高血脂坏境,诱导斑块的形成。分别取8周龄(未高脂)做为无斑块期,16周龄(高脂8周)做为早期斑块期和24周龄(高脂16周)做为晚期斑块期。 2. PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达 或者 为了明确PDCD4在动脉粥样硬化发展过程中的表达情况,我们分离16周和24周Apoe-/-小鼠富含斑块的主动脉弓及胸腹主动脉裂解蛋白,以8周龄无斑块血管为对照,western blot的方法检测了PDCD4的表达情况,结果显示随着高脂喂养时间的延长(即动脉粥样硬化斑块的发展)PDCD4的表达明显升高。免疫组化染色发现PDCD4主要表达于免疫细胞(巨噬细胞和T细胞),另外,在平滑肌细胞中也有表达,提示PDCD4可能具有促进动脉粥样硬化斑块形成和发展的作用。 3. PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用 为了研究PDCD4在动脉粥样硬化形成过程中的作用,我们制备了Pdcd4和Aope双基因敲除(Pdcd4-/-Apoe-/-)小鼠,并以此小鼠为实验组,以Apoe-/-小鼠为对照组,研究了PDCD4缺失对动脉粥样硬化形成的影响。结果发现高脂喂养8周或16周后Pdcd4-/-Apoe-/小鼠主动脉根部的斑块和主动脉弓及胸腹主动脉段的斑块较对照组相比,面积均明显减小(p<0.01),脂质沉积减少(p<0.01),局部巨噬细胞和T细胞的浸润都较对照组明显减少(p<0.05)。另外,胶原含量、平滑肌细胞也明显减少(p<0.01),CD4+T细胞比例呈降低趋势,其中CD4+Foxp3+调节性T细胞(Treg)比例明显上升(p<0.01),而TregCFoxp3+)细胞数量占斑块面积的比例则比对照组明显升高(p<0.05),而IL-17和TGF-β浓度较对照组降低(p<0.05),而IL-10明显高于对照组(p<0.05),而TGF-β较对照组升高(p<0.05)；提供抑制信号的CTLA-4在CD4+和CD8+T细胞上的表达均较对照组升高(p
帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是一种常见的神经退行性疾病,在65岁以上人群中PD的患病率为1%-3%,其临床表现为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势不稳。PD由英国医师James B.

05)。但是与LPS组相比,LPS+小檗碱组ERK活性水平差异有统计学意义(P
目的:探讨p38MAPK蛋白在体外培养神经元中的激活及钙调蛋白抑制剂W-7的干预作用。方法:神经元原代培养并采用NSE免疫细胞化学技术鉴定神经元。取原代培养7d的大鼠皮质神经元随机分为5组:正常对照组,仅用DMEM/F12完全培养基;NMDA组,去除正常神经元培养液,加入NMDA50μmol.L-1,处理时间10min;W-7干预组,W-7浓度分别为25、50和100μmol.L-1,继续培养24h,加入NMDA

50μmol.L-1。免疫细胞化学染色法及免疫印记法检测皮质神经元内p38MAPK蛋白的表达水平。结果:培养6～12h后大部分神经元贴壁,随时间延长形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间互相接触形成网络。NSE鉴定神经元纯度为90.86%;免疫细胞化学染色法检测,NMDA组p38MAPK蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),W-7组低于NMDA组(P<0.05或P<0.05),W-7干预组p38MAPK表达水平低于NMDA组(P<0.01),呈剂量依赖性。结论:NMDA导致皮质神经元p38MAPK蛋白表达增高,W-7可降低p38MAPK的蛋白表达。
PC12细胞被广泛用于神经细胞功能、分化、凋亡和神经递质分泌,以及潜在的分子机制的研究。氧化应激可导致PC12细胞凋亡,其作用方式为激活对氧化还原反应敏感的细胞信号传导,主要与丝裂原活化蛋白激酶、线粒体凋亡及NF-κB信号传导途径有关。本文综述了氧化应激致PC12细胞凋亡的信号传导途径,旨在为神经系统氧化应激相关疾病的抗氧化剂药物治疗和凋亡信号途径药物干预治疗提供理论依据。
肠缺血再灌注(intestinal 点击此处 ischemia reperfusion,IIR)损伤是常见的组织器官损伤之一,它在严重感染、外伤、休克、心肺功能不全、器官移植等的过程中起重要作用。其机制主要为缺血一段时间后,组织适应了低氧环境的新陈代谢,血流的回复导致激活血管内巨噬细胞,继而相应的生成活性氧自由基(ROS),ROS又诱发内皮损伤,以及原炎性因子
前B细胞克隆增强因子(PBEF)是具有促进早期B细胞分化的一类生长因子,其基因于1994年首次自人外周血淋巴细胞cDNA基因文库中克隆获得。2005年在内脏脂肪细胞中发现一种与PBEF基因序列相同的cDNA基因序列,将其命名为Visfatin即内脏脂肪素或内脂素,此后研究发现其具有烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性,因此又将其命名为Nampt。现将近年来PBEF基因的分子生物学特征及其
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内主要的信号转导系统之一。p38MAPK是MAPK家族中的重要成员,其介导的信号转导通路在炎性反应中具有重要作用。p38MAPK与急性坏死性胰腺炎关系密切,不仅参与了急性坏死性胰腺炎胰腺的局部损伤,还参与了胰外并发症的发生。本文对p38MAPK信号通路在炎症中的作用及其在急性坏死性胰腺炎中的研究进展予以综述,旨在为急性坏死性胰腺炎的治疗提供新的思路。
缺血再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion

BVD-523溶解度 Injury,IRI)是指在缺血基础上恢复血流后,不仅未减轻原有组织的缺血性损伤,反而使其功能障碍或结构损伤进一步加重的现象。肠道是对缺血反应最敏感的组织之一,严重创伤、失血等原因均可引起肠缺血再灌注损伤(Intestinal {Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|buy Anti-infection Compound Library|Anti-infection Compound Library半抑制浓度|Anti-infection Compound Library价格|Anti-infection Compound Library花费|Anti-infection Compound Library溶解度|Anti-infection Compound Library购买|Anti-infection Compound Library制造商|Anti-infection Compound Library查找购买|Anti-infection Compound Library订单|Anti-infection Compound Library mouse|Anti-infection Compound Library chemical structure|Anti-infection Compound Library分子量|Anti-infection Compound Library molecular weight|Anti-infection Compound Library数据表|Anti-infection Compound Library supplier|Anti-infection Compound Library体外|Anti-infection Compound Library细胞系|Anti-infection Compound Library concentration|Anti-infection Compound Library nmr|Anti-infection Compound Library体内|Anti-infection Compound Library clinical trial|Anti-infection Compound Library cell assay|Anti-infection Compound Library screening|Anti-infection Compound Library high throughput|buy Antiinfection Compound Library|Antiinfection Compound Library半抑制浓度|Antiinfection Compound Library价格|Antiinfection Compound Library花费|Antiinfection Compound Library溶解度|Antiinfection Compound Library购买|Antiinfection Compound Library制造商|Antiinfection Compound Library查找购买|Antiinfection Compound Library订单|Antiinfection Compound Library chemical structure|Antiinfection Compound Library数据表|Antiinfection Compound Library supplier|Antiinfection Compound Library体外|Antiinfection Compound Library细胞系|Antiinfection Compound Library concentration|Antiinfection Compound Library clinical trial|Antiinfection Compound Library cell assay|Antiinfection Compound Library screening|Antiinfection Compound Library high throughput|Anti-infection Compound high throughput screening| Is-chemia-Reperfusion Injury,IIRI)。研究发现
近年来的研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是细胞将信号从细胞膜传递到细胞核的主要通路。其中p38MAPK可通过调节转化生长因子β1、核因子-κB及血管内皮生长因子等炎症因子的表达影响糖尿病肾病的进程。研究p38MAPK及其信号转导通路机制可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础,也可为临床提供新的更为有效的诊治手段。
目的探讨吡格列酮(PIO)对血管内皮细胞的保护作用及其可能机制。方法用四唑盐比色法(MTT法)检测PIO对高糖损伤血管内皮细胞的最佳保护浓度;按不同干预条件,将血管内皮细胞分为7组:正常培养组[A组,葡萄糖(Glu)5.5 mmol/L],高糖培养组(B组,Glu 37.5 mmol/L),C、D、E组分别为不同浓度PIO+高糖培养,F、G组为不同浓度SP600125+PIO+高糖培养。Western blot法检测各组c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达。结果 PIO在1×10-8~1×10-4mmol/L时对高糖损伤的血管内皮细胞有保护作用;与B组相比,C~E组p-JNK表达降低,差异有统计学意义(P<0.

01)、肿瘤分级(p<0.01)和淋巴结转移相关(p
低氧是实体瘤发展的必经过程,当微循环提供的氧量不能满足急剧增长的实体瘤所需的氧量时,实体瘤内的氧分压明显下降,形成肿瘤低氧。肿瘤低氧为癌症的治疗提供了重要的靶点。目前,很多抗肿瘤药物特异性的针对肿瘤低氧而开发。同时,肿瘤低氧环境又促进表皮生长因子受体(EGFR)的过度表达,EGFR是人类表皮生长因子受体(HER)家族的一员,它在细胞信号的传递过程中起着重要的作用。EGFR的过度表达可以引起包括非小细胞型肺癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌在内的多种实体瘤的发生。抑制肿瘤EGFR的表达已发展为癌症治疗的一种高效方法。以上结果提示我们若将具低氧还原活化型抗肿瘤化合物的药效团融入EGFR抑制剂中,有可能发展新型低氧还原活化型细胞毒/EGFR抑制剂。通过将低氧还原活化型药效团2-硝基咪唑引入到EGFR抑制剂的母核中,设计了四个系列含有硝基咪唑的还原活化型细胞毒/EGFR抑制剂。将硝基咪唑引入到4-苯胺基喹唑啉的C-6和C-7位,得到的45个化合物中,35个化合物对EGFR激酶的IC50值小于5

nM,8个化合物在常氧和低氧下对A549和HT-29细胞的增殖抑制活性均强于gefitinib.综合上述激酶及细胞增殖抑制活性评价,选取化合物1-50和2-28进行体外还原活化测试,证实了这两个化合物在低氧下被还原活化的过程。进一步的肝微粒体稳定性测试表明它们在低氧下能被轻易的激活,而在常氧下具有一定的稳定性。分子对接实验预测了该类化合物与EGFR激酶可能的结合模式。将2-硝基咪唑引入到4-苯胺基喹唑啉类C-4位的苯环,合成了21个化合物,其中10个化合物表现出了优于阳性lapatinib的细胞增殖抑制活性,其中化合物3-43与EGFR的分子对接实验展示了其可能的结合模式。本文对含2-硝基咪唑片段的4-苯胺基吡咯[3,2-d]并嘧啶类化合物作为低氧还原活化型细胞毒/EGFR抑制剂进行了初步探索,共合成了11个化合物,发现将2-硝基咪唑引入到吡咯[3,2-d]并嘧啶的N-5上对酶和细胞增殖抑制活性最有利。本文还对含有氮氧化物的还原活化型细胞毒/EGFR抑制剂进行了初步探索。在4-苯胺基蝶啶的N-5位和N-8位上引入氧原子的尝试中,我们意外地发现了一种合成蝶啶酮的方法。在4-苯胺基喹唑啉的C-6位侧链上引入脂肪基氮氧化物致使化合物丧失细胞增殖抑制活性,在4-苯胺基喹唑啉的N-1位引入氧原子可导致小分子稳定性变差。N-1位含有氧原子的3-氰基-4-苯胺基喹啉类化合物具有较好的稳定性、酶及细胞增殖抑制活性,并表现出低氧还原活化的性质,初步达到了预期。
原发性支气管肺癌，是人类最常见的恶性肿瘤之一，其发生率及死亡率居全球肿瘤首位。根据组织病理学主要分为两大类，即非小细胞肺癌（non-small

KRX-0401溶解度 Capmatinib体内 cell lungcarcinoma, NSCLC）和小细胞肺癌（small ce8l lung carcinoma, SCLC），前者占肺癌中的85%以上。世界卫生组织（WHO）将NSCLC分为鳞癌、腺癌、大细胞癌、腺鳞癌，及伴有多行性、肉瘤样或肉瘤成分癌等，以腺癌最为多见。组织学类型对治疗结果的预测作用日益受到广泛关注,根据组织学类型，选择不同的治疗方案使治疗更加个体化，已是目前肺癌治疗的方向。

目的： 分析晚期肺腺癌的发病及预后相关因素；观察PC、DC、GC3种方案一线治疗晚期肺腺癌的疗效和毒性反应，为预测晚期肺腺癌预后，选择合适化疗方案提供参考。 方法： 对我院2009年1月至2011年2月收治的，经病理学确诊的139例晚期肺腺癌患者资料进行回顾性分析，研究流行病学及临床特征对肺腺癌发病及预后影响；对晚期一线采用PC、DC、GC3种方案治疗的患者，收集近期有效指标及不良反应发生情况，同时随访PFS、OS及1年生存率等以观察远期疗效。 结果： 肺腺癌患者中，男性：女性为1.68：1；吸烟：发病患者中，吸烟者明显高于不吸烟者（74.8%vs25.2%），结果具有统计学意义；晚期肺腺癌因转移部位不同，1年生存期存在显著差异（P＜0.05），伴有脑转移者预后较差。 139例患者中一线化疗总ORR为32.3%。其中PC组ORR、DCR分别为33.8%、80.3%，均高于DC和GC组，结果有显著统计学差异（χ2=9.635，P＜0.05）。 CP-868596制造商 139例患者的1年生存率为49.6%，PFS为6个月，OS为12.4个月。PC、DC、GC各方案疗效比较：PC组1年生存率为57.7%，PFS为6.8个月，OS为12.9个月；DC组1年生存率为44.7%，PFS为5.8个月，OS为12.5个月；GC组1年生存率为33.3%，PFS为4.0个月，OS为10.5个月。PC组PFS较DC、GC组有显著差异（P＜0.05），而1年生存率、OS均无统计学差异（P>0.05）。 3种方案化疗的主要不良反应是骨髓抑制、胃肠道反应，PC方案组显著低于DC组、GC组，结果具有显著统计学差异（P﹤0.05）。 结论： 1.男性、吸烟者肺腺癌发病率高，女性患者发病比例呈上升趋势。吸烟是肺腺癌发病及预后相关因素，病灶转移部位是影响肺腺癌患者的预后的危险因素，伴有脑转移的肺腺癌患者预后最差。 2. PC、DC方案在一线治疗晚期肺腺癌中具有优势，PC方案疗效略优于DC方案。PC方案的不良反应较DC、GC方案显著减轻，尽管DC方案不良反应与PC方案存在差异但可耐受，应根据患者个体情况进行选择。 3.

p.)、模型对照组(saline,1ml·100g-1,i.p.)、卡托普利组(captopril,30mg·kg-1,i.g.)、CAP干预组(CAP,2.0g·kg-1,i.p.)。采用大鼠腹主动脉缩窄术复制POH模型。于术后第8周测定心功能及血液指标,包括心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MBP)、左室收缩峰压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、室内压最大下降速率(-dp/dtmax)、左室质量指数(LVMI)、AngⅡ、ET、ALD、ANP、NO、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)。取部分左室游离壁中段心肌组织,经全自动图象分析系统行图象分析:HE染色观察心肌病理改变并测量各组心肌细胞直径(MD);Masson染色观察心肌胶原变化并计算心肌胶原容积分数(CVF)。

PF-02341066制造商 结果: 1、POH组HR为384.0±21.5,SBP、DBP、MBP分别为28.12±1.75、18.24±1.18、24.78±1.27,与假手术对照组相比均有显著性差异(P<0.05或P<0.05或P<0.05或P<0.05),不同浓度的CAP(4.8mg·L-1、0.48mg·L-1)caspase-3活性分别为1.2±0.4、1.8±0.5,明显低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。AngⅡ组Bcl-2蛋白表达显著降低为11.95±3.98,与空白组相比有显著性差异(P<0.01),不同浓度的CAP(4.8mg·L-1、0.48mg·L-1)组Bax蛋白表达分别为22.26±6.53、17.34±4.05,明显高于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01),不同浓度的CAP(4.8mg·L-1、0.48mg·L-1)组CaN蛋白表达分别为11.28±2.68、14.82±3.67,明显低于AngⅡ组(P<0.05或P
研究背景

时间 心血管病变是糖尿病患者的主要死亡原因,其大血管病变(主要是动脉粥样硬化)和微血管病变是糖尿病病人致病率和死亡率最主要的原因之一。糖尿病导致心血管病的机制是复杂的、多方面的,其中血管内皮功能异常是糖尿病血管并发症发生的重要因素。高血糖可通过糖基化终末产物(AGEs)途径、多元醇途径、蛋白激酶C激活途径、己糖胺途径和氧化应激等多种机制导致血管内皮细胞功能不全,其损伤的机理并不十分清楚,其中高糖诱导内皮细胞凋亡是研究重点和热点之一。 细胞凋亡(apoptosis),亦称为程序化的细胞死亡(Programmed cell death,PCD),是一种不同于细胞坏死的生理性或者病理性的死亡过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等多个方面。目前认为,细胞凋亡在器官发育、伤口愈合、免疫反应等过程中调控细胞增殖与更新间的平衡,维持组织器官正常生理功能及细胞数量的相对稳定。高胰岛素血症、AGEs、血管紧张-Ⅱ、氧化的LDL、活性氧(reactive oxygen species,ROS)以及炎性细胞因子等多种因素均可诱导血管内皮细胞发生凋亡。研究证实,高糖诱导活性氧的产生,而活性氧进一步能引起细胞功能失调,甚至细胞死亡。细胞凋亡在高糖对内皮细胞损伤过程中扮演重要的角色。因此,防治高糖诱导的内皮细胞的凋亡在预防糖尿病血管并发症方面具有重要的作用。 这个 研究证明,Akt的激活能促进内皮细胞的存活。Akt,又称PKB,是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,主要通过PI-3K激活。Akt的Ser-473和Thr-308位点被磷酸化后,产生一系列生物学效应。PI-3K在多种死亡信号诱导的细胞死亡过程中起着重要的预防作用。Akt能引起抗凋亡基因家族bcl-2的表达,激活内皮源性的一氧化氮合酶(endothelial

nitric oxide synthase,eNOS),从而产生NO防止超氧阴离子产生歧化产物。因此,PI-3K/Akt/NO信号通路在防止ROS诱导的内皮细胞凋亡方面发挥着重要的作用。因此,该信号通路是本研究的焦点之一。 NF-κB是多种信号通路的交汇点,NF-κB的激活能控制炎症反应、细胞生长、存活和凋亡过程中的多个基因的转录。最近的研究证明,NF-κB的激活能下调促凋亡的JNK信号途径,进而预防多种细胞类型的凋亡。但是,对于内皮细胞而言,NF-κB的激活能促进凋亡,ROS依赖的NF-κB的激活在高糖诱导的内皮细胞凋亡过程中具有重要作用。因此,NF-κB途径也是研究的重点之一。 西红花酸是西红花(Crocus sativus L.)提取物的有效成分之一(近年从栀子中也成功提取出相同的有效结构),有多不饱和共轭烯酸结构,属于类胡萝卜素类。研究表明西红花酸具有抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、降血脂、心肌保护、肝脏保护以及精神神经疾病的保护治疗作用。西红花酸对糖尿病亦具有有益的保护作用。但是,西红花酸是否能抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,国内外未见报道。因此,本文通过内皮细胞的体外培养,建立高糖诱导内皮细胞凋亡模型,从生化指标、形态学、蛋白表达等多方面比较系统地观察了西红花酸对高糖诱导内皮细胞凋亡的抑制作用并探讨其可能的机制,为西红花酸在临床用于防治糖尿病及其血管并发症提供理论依据。 第一部分高糖体外诱导内皮细胞凋亡及西红花酸对其抑制作用的观察 目的 观察高糖对人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用及西红花酸对其抑制作用。 方法 取健康、足月新生儿产后的新鲜脐带,原代培养、传代脐静脉内皮细胞并根据细胞的形态、生长习性以及Ⅷ因子抗原等鉴定。选生长良好的HUVECs第3-5代用于试验。试验分为:①对照组(NG):含有终浓度5.5mM的葡萄糖,与内皮细胞共同培养24,36,48h。②高糖15组(HG15):含有10%胎牛血清的RPMI1640培养液和含终浓度为15mmol/L的葡萄糖,与内皮细胞共同培养24,36,48h。②高糖组33(HG33):含有终浓度为33mM的葡萄糖,与内皮细胞共同培养24,36,48h。③高糖组+西红花酸组:不同终浓度的西红花酸(0.01,0.1,1.

05）。在p38MAPK AS-ODNs+CIP组中，PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达均明显降低，且随着p38MAPK AS-ODNs剂量的增大，PPARγ蛋白和NF-κB

p50蛋白的表达呈剂量依赖性降低。p38MAPK S-ODNs+CIP组与CIP组相比，PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达无明显变化（P＞0.05）。在2d时间点，各组中PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白表达的变化趋势同6h时间点一致。结果表明p38MAPK AS-ODNs剂量依赖性地阻断CIP后PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白表达的上调。 3、p38MAPK AS-ODNs对CIP诱导脑缺血耐受过程中大鼠海马CA1区PPARγ、NF-κB p50蛋白表达的影响 Western blot分析显示，在6h时间点，与CIP+II组相比，p38MAPKAS-ODNs+CIP+II组PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达均明显降低，且随着p38MAPK AS-ODNs剂量的增大，PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达呈剂量依赖性降低；p38MAPK S-ODNs+CIP+II组PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达无明显变化（P＞0.05）。在2d时间点，各组中PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白表达的变化趋势同6h时间点一致。结果表明p38MAPK AS-ODNs剂量依赖性地阻断CIP诱导脑缺血耐受过程中PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白表达的上调。 没有 4、p38MAPK AS-ODNs对CIP诱导的脑缺血耐受的影响 在Sham组、CIP组中，大鼠海马CA1区神经元致密有序的排列、共2~3层，胞核饱满，核仁清晰，均未见神经元受损，组织学的分级为0级，ND值分别为196.12±6.93和182.67±10.07。同sham组相比，II组出现了较明显的迟发性的神经元死亡，神经元的密度明显下降，组织学的分级为Ⅱ~Ⅲ级，ND值为17.33±6.11，显著降低（P＜0.01）。在CIP+II组与II组相比，神经元的存活状态有明显改善，即CIP可显著抑制脑缺血损伤引起的迟发性神经元死亡，ND值为178.67±6.11，明显增高（P＜0.01）。ACSF+CIP+II组与CIP+II组相比，神经元的存活状态没有发生改变，即注射脑脊液对神经元的存活状态无影响，ND值为178.78±7.03，无差异（P＞0.05）。与ACSF+CIP+II组相比，p38MAPKAS-ODNs+CIP+II组出现了显著的迟发性神经元死亡，表现为组织学分级升高，锥体神经元密度降低，且此种变化与p38MAPKAS-ODNs的注射剂量呈明显正相关。在p38MAPK

查找更多 S-ODNs+CIP+II组中，海马CA1区锥体神经元存活状态良好，未见锥体神经元受损，ND值为174.20±13.61，与ACSF+CIP+II组相比无差异（P＞0.05）。结果表明p38MAPK AS-ODNs剂量依赖性地阻断CIP所诱导的脑缺血耐受。 结论：p38MAPK-PPARγ/NF-κB信号通路参与CIP诱导的脑缺血耐受。
目的：糖尿病神经痛（diabetic neuropathic pain, DNP）是糖尿病的常见并发症之一，而在糖尿病患者中，神经痛合并抑郁的发病率也逐渐增加，并严重影响糖尿病人的生活。糖尿病患者抑郁发病率可达到普通人群的1.6-2.0倍，其中2型糖尿病抑郁发病率更高达13%。糖尿病神经痛合并抑郁的形成机制是非常复杂的，目前已知中枢γ-氨基丁酸B型受体（GABAB受体）的表达变化在其形成中发挥重要作用，GABAB受体的激动剂和拮抗剂均被证实具有抗抑郁作用，但其具体机制尚不清楚，探讨其机制可为临床治疗提供更好的研究方向。 GABAB受体在神经系统广泛分布，调控突触传递，其中中枢GABAB受体与许多神经系统疾病密切相关，包括抑郁、焦虑、药物成瘾、疼痛、癫痫等。巴氯芬作为GABAB受体的特异性激动剂，具有明显的镇痛作用，且近年研究显示其具有显著的抗抑郁作用，GABAB受体抑制剂CGP55845也可产生抗抑郁作用。研究发现：各种原因导致的脑源性神经生长因子（BDNF）的减少易诱发抑郁，而大脑BDNF水平的升高可产生抗抑郁效果，这表明BDNF与抑郁形成密切相关。但是GABAB受体的表达变化是否通过影响BDNF的表达而参与抑郁的形成，目前尚不清楚。

本实验通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ），结合强迫游泳实验，制备糖尿病神经痛合并抑郁大鼠模型，模型制备成功后给予GABAB受体激动剂（巴氯芬）和拮抗剂（CGP55845）。通过观察正常对照组（C组）、糖尿病神经痛合并抑郁模型（D1组）、巴氯芬组（D2组）、CGP55845组（D3组）、CGP55845+巴氯芬组（D4组）的50%机械缩足阈值（PWT），强迫游泳实验不动时间（IMSFT）变化，采用免疫组织化学法和分子生物学方法比较各组大鼠海马组织BDNF的表达变化，从而观察GABAB受体对糖尿病神经痛合并抑郁大鼠海马BDNF表达的影响，探讨其在抗抑郁方面的作用及其机制。 ZD6474 价格 方法：清洁级雄性SD大鼠30只，180～200g，3～4周，由河北医科大学动物实验中心提供，随机分为两组，正常对照组（C组）10只和糖尿病神经痛模型组（D组）20只，分别腹腔注射生理盐水或链脲佐霉素(STZ，60mg/kg)。D组于腹腔注射后2周末测定空腹血糖浓度，空腹血糖浓度>16.7mmol/L的大鼠为糖尿病模型制备成功，然后对糖尿病大鼠进行15min/次（1次/周）强迫游泳实验以制备抑郁模型，其方法为：将大鼠单独放入高40cm、直径20cm的圆柱形玻璃缸中，缸内水深25cm，水温(25±2)℃，从大鼠入水后计时15min，为避免相互影响，每只大鼠进行强迫游泳之前更换玻璃缸中的水。于腹腔注射后3周末利用Von Frey针测定大鼠机械缩足阈值，采用Dixon方法计算出50%缩足阈值（PawWithdraw Threshold, PWT），PWT16.

47%),N-cadherin明显升高(30%VS61.84%),两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);E-cadherin、N-cadherin两者表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05),表现为TNM分期和淋巴结转移程度越严重,E-cadherin阳性表达越低,N-cadherin阳性表达越高;Her2、N-cadherin阳性表达患者的病死率更高,而E-cadherin阴性表达患者的病死率更高,阴性组与阳性组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Her2阳性表达促进乳腺癌细胞上皮间质转换过程,同时增强乳腺癌的浸润转移能力,严重影响患者的预后情况。
PI3K-Akt通路是生长因子受体下游有关细胞生存、增生的最主要的信号通路。在多数恶性肿瘤中,PI3K-Akt通路呈被激活状态,因此其一直作为肿瘤治疗的靶点备受瞩目。
研究表明,PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌存在异常激活,对肿瘤细胞的增殖、凋亡、存活、耐药等起着重要的作用。顺铂是临床最常用一线化疗药物,但随着治疗的进展肿瘤对其耐药的现象越来越普遍,严重制约其临床效果。顺铂耐药是多种机制共同参与的复杂过程,其中PI3K/AKT通路或其组分持续被激活是非常重要的因素之一。本文对二者关系研究领域的进展作一综述。
对磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidyl

为什么 inositol 3-kinase,PI3K)抑制剂作为抗肿瘤药物的临床研究进展作一综述。PI3K在细胞生长,增殖和凋亡等过程中起重要调节作用,与乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等肿瘤的发生发展密切相关。因此,PI3K已成为很有前途的癌症治疗靶标,超过10多种PI3K抑制剂作为抗肿瘤药物已进入临床研究。
肺癌是中国发病率及死亡率最高的恶性肿瘤。肿瘤细胞在驱动基因的作用下持续生长,并对该驱动基因的抑制剂具有高敏感性。近年来,针对驱动基因的检测技术不断发展,相应的驱动基因靶向药物也层出不穷。本文主要从中国肺癌的驱动基因、驱动基因的检测及针对驱动基因的靶向治疗3个方面进行综述,并展望中国肺癌驱动基因的应用前景。
PI3K脂激酶家族介导的细胞信号转导通路,调节细胞增殖、分化、凋亡等一系列活动,已经成为治疗肿瘤、炎症等疾病的重要靶标。近来出现了多种结构类型的该通路抑制剂,笔者总结了近年内进入临床研究的具有PI3K-mTOR双重抑制活性的小分子化合物。
肺癌是癌症死亡的重要原因。驱动基因的发现使肿瘤治疗不再”一刀切”。靶向治疗改变了癌症药物治疗的现状成为”带眼睛的子弹”,其疗效可见并为肺癌治疗带来一场革命。驱动基因及靶向治疗已经成为非小细胞肺癌(non-small

5-FU临床实验 cell lung cancer,NSCLC)新的代名词。2013年中国美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)年会发布了关于NSCLC的11种驱动基因突变频率,本文将就此11种NSCLC驱动基因突变的结构、功能及靶向药物治疗进行阐述。
3-Amino-2-methoxycarbonylthiophene

used as the main raw material,an intermediate(thiofuran siamese) 2,4-dichloro-thieno[3,2-d]pyrimidine was synthesized.The prod-uct was 那个 characterized by nuclear magnetic resonance(NMR).The first step yield was 84%(190 ℃) and the second step yield was 81.4%(105 ℃,m(intermediate):m(phosphorus oxychloride) = 1:6.4).The raw product was refined with a unique refining process,which can enhance the purity up to 99.5% to meet the requirement of condi-tions for the development and research of thiofuran siamese as a new medicine of anticarcinogen.Contrasted with the traditional technique,this process featured with cheap raw materials,possible for solvent recovery and reuse,low comprehensive cost,and suit-able for production on certain scale.

et Wils.)的单体提取物,其分子式为C19H23NO4,分子量329.38。青藤在中国应用于治疗风湿病已经有上千年历史。其目前在应用上主要以其盐酸盐形式为主即盐酸青藤碱为主。青藤碱具有抗炎、抗风湿、免疫抑制、镇痛、抗血管生成、抗心律失常等广泛的药理作用。新近研究报导其具有一定的抗肿瘤作用。 细胞凋亡,又称程序性死亡,包括一系列生物化学事件,引起细胞发生特征性形体变化和生物化学改变。一些药物通过诱导凋亡的方式抑制恶性肿瘤的增殖。细胞凋亡主要有三种通路：一种是以Fas和TNFR为代表死亡受体信号转导途径,凋亡发生过程中伴有caspase-8的活化；第二种是以线粒体为核心的凋亡途径,Cytochrome

c从线粒体释放到胞浆与APaf-1继而与Caspase-9结合,引起Caspase-9自身剪切激活,启动凋亡过程中伴有caspase-9的活化；第三种是以内质网为核心的凋亡途径,凋亡过程中伴有caspase-12的活化。目前青藤碱对肺癌细胞是否有抑制作用的研究尚未见报导。 本实验研究青藤碱对非小细胞肺腺癌细胞系NCIH-460增殖和凋亡的影响,并研究其机制,为深入研究青藤碱抗肿瘤机制提供实验基础,应用于临床治疗肺癌提供理论依据。 实验材料与方法 一、青藤碱对肺癌细胞系NCI-H460增殖、凋亡的影响的研究 采用四甲基偶氮噻蓝(MTT)法检测青藤碱对NCI-H460细胞增殖的；采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡；TdT酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNNEL)方法观察细胞的形态变化；采用扫描电镜观察细胞超微结构的变化。 BTK inhibitor 二、青藤碱诱导肺癌细胞系NCI-H460凋亡的机制的研究 采用罗丹明123(Rhodamine123)染色,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位(△Ψm)；采用分光光度法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性的变化；采用Western blot方法检测SN对凋亡相关的蛋白如细胞色素C、Bcl-2、Bax的表达的影响。 三、MEK／ERK和PI3K／Akt信号通路参与青藤碱诱导NCI-H460细胞凋亡的研究 采用Western blot法检测SIN对NCI-H460细胞的ERK1／2、p-ERK1／2、Akt、p-Akt的表达的影响；采用流式细胞仪PI单染的方法检测信号通路阻滞剂与青藤碱联合对NCI-H460细胞凋亡的影响。 结果 一、青藤碱对肺癌细胞系NCI-H460增殖、凋亡的影响： 随着SIN浓度的加大和作用时间的延长,其对细胞的增殖有明显的抑制作用,呈现明显的时间-剂量效应关系。SIN 240μg／ml作用72 h,其抑制率达到最大的85.89%。流式细胞AnnexinV/PI检测细胞凋亡分析表明,SIN作用48 h,随浓度的增高,早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例都逐渐增加,与对照组相比差异具有显著性(P
近几年来,主要组织相容性复合体-I类相关链A(major histocompatibility complex class I-related chain A,MICA)抗体与实体器官移植特别是肾移植的排斥反应和移植肾长期存活率之间的关系成了移植免疫学基础和临床研究的热点。在等待肾移植的患者体内检测到了预存的MICA抗体,说明在移植前患者就接触到了MICA抗原而产生了特异性的抗体;移植后MICA抗体与免疫排斥反应和慢性移植肾失功之间均存在着密切的关系。由于MICA蛋白可以表达在血管内皮细胞表面,但不表达在T淋巴细胞,因而MICA分子可能直接引起移植肾血管的损伤,进而导致移植肾功能损害。有学者研究了MICA抗原对淋巴细胞生物学特性的影响,发现MICA抗原对T细胞和B细胞有促进其增殖的作用。最近对心脏移植的研究中发现,血清中的可溶性MICA(sMICA)分子可以减轻移植物的免疫损伤,对移植物起到保护作用。MICA分子和NKG2D是互为配受体的关系,且NKG2D是NK细胞表面的一种激活性受体。但是MICA抗原对内皮细胞的生物学特性的影响,

Fulvestrant制造商 sMICA在肾移植中的是否有保护作用,以及NK细胞能否被激活而对内皮细胞产生杀伤作用,均未见报道。 因此,本课题将分三个部分进行研究:(1)应用MICA重组蛋白对血管内皮细胞进行刺激,观察它对内皮细胞的生物学特性及其分泌功能的影响;(2)外源性抗原对内皮细胞MICA基因表达的调节作用,以及对细胞上清中sMICA的水平的影响;(3)表达MICA分子的内皮细胞与NK细胞共同培养,观察NK细胞对内皮细胞的杀伤作用,并探讨其可能的作用机制。

第一部分MICA抗原对内皮细胞生物学功能的影响 目的观察主要组织相容性复合体-I类相关链A (MICA)抗原对血管内皮细胞生物学功能的影响。 方法将外源性重组MICA蛋白分A5(5ng/ml),A10(10ng/ml),A25(25ng/ml)三个剂量加入培养基中作为实验组,A0组加入等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照组,对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)予以培养。用流式细胞仪检测其细胞周期和凋亡情况,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,并测定各组细胞上清液中前列环素代谢产物6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、内皮素(ET-1)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI)的水平。 AG14699 结果各实验组(A5,A10,A25 )内皮细胞A570值均高于对照组(A0)。以A5组增殖最为明显,A10组比A5组稍下降,两组之间差异统计学意义(P > 0.05),但明显高于A25组差异有统计学意义(P < 0.05)。在相同剂量下48h时增殖率最高,A570值分别为0.458, 0.446, 0.389。72h和96h呈持续缓慢增殖,随着时间延长增殖率逐渐下降,差异有统计学意义(P < 0.05)。A10, A25组细胞上清中的6-keto-PGF1α水平分别为144.6, 132.8pg/ml,A0, A5组分别为226.5, 232.6pg/ml;A10,A25组ET-1水平分别为23.6, 25.8pg/ml,A0,A5组分别为11.8, 10.4pg/ml。A10,A25组和A0,A5组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05);而A10与A25组比较,A0与A5组比较,差异均无统计学意义(P > 0.05)。各实验组(A5,A10,A25 ) t-PA、PAI分别为161.2, 154.2, 157.8ng/ml;221.6, 248.5, 252.4ng/ml;而对照组(A0)分别为233.5ng/ml、137.8ng/ml。实验组和对照组之间比较,差异均有统计学意义(P < 0.05);而各实验组之间比较,差异均无统计学意义(P > 0.

PI3K与结肠癌的发生相关，但与结肠癌的浸润、转移及疾病进展时间无关，与结肠癌预后无相关性。 3.PTEN、PI3K在结肠癌中的表达呈负相关，表明PTEN的缺失可能引起PI3K信号通路的激活，两者均与结肠癌的发生密切相关，可指导结肠癌的个体化治疗。
目’的： 1.研究P13K新型抑制剂BKM120对不同分子分型乳腺癌细胞系及相应干细胞的作用,观察BKM120对不同乳腺癌干细胞生物学特性的影响。 2.研究BKM120联合多西紫杉醇对不同分子分型乳腺癌细胞系及相应干细胞的作用,观察BKM120联合多西紫杉醇用药对乳腺癌干细胞的影响。

3.研究BKM120联合靶向治疗药物曲妥珠单抗对HER2阳性的SK-BR-3乳腺癌细胞系及相应干细胞的作用,观察BKM120联合曲妥珠单抗对乳腺癌干细胞的影响。 Ipatasertib体内 4.研究BKM120联合多西紫杉醇在体内实验中对乳腺癌干细胞的作用。方法： 1.体外细胞学实验：采用无血清培养液悬浮培养球囊细胞的方法富集相应乳腺癌细胞系干细胞,并经过流式验证其中ESA+CD44+CD24-/low细胞亚群比例。采用MTT法分别检测BKM120、多西紫杉醇、曲妥珠单抗等单药对不同乳腺癌细胞及其干细胞的生长抑制作用；检测BKM120联合多西紫杉醇、BKM120联合曲妥珠单抗对不同乳腺癌细胞和相应干细胞的生长抑制作用,计算药物联合指数。通过划痕实验观察单药和联合用药对不同乳腺癌细胞迁移能力的影响。进一步通过球囊形成实验分析单药和联合用药对不同分子分型乳腺癌细胞系球囊形成能力的影响。利用平板克隆实验检测单药和联合用药对不同分子分型乳腺癌细胞系克隆形成能力的影响,并分析其中的差异。采用免疫蛋白印记方法检测单药和联合用药对不同分子分型乳腺癌细胞及相应乳腺癌干细胞中AKT,pAKT,S6,pS6蛋白水平的影响。 2.体内裸鼠移植瘤实验：成功建立裸鼠乳腺癌干细胞移植瘤动物模型。随机分组条件下,予以单药及联合用药,记录实验期间裸鼠移植瘤体积大小变化和裸鼠体重变化,观察药物在体内对乳腺癌干细胞的影响。 结果： 1.BKM120对乳腺癌细胞及干细胞的作用：在体外与对照组相比,BKM120对乳腺癌细胞及干细胞生长均具有一定的抑制作用,干细胞对BKM120具有一定的耐药性。抑制作用呈一定的浓度剂量依赖性。BKM120可以一定程度的降低乳腺癌细胞的迁移能力,减低乳腺癌细胞克隆形成能力,并可以显著的减少乳腺癌细胞的球囊形成,并呈一定的浓度剂量相关。一定作用浓度下,BKM120可以显著的降低乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞中pAKT、pS6蛋白水平,并呈一定的浓度剂量依赖性。在体内实验中,一定剂量的BKM120可以抑制裸鼠乳腺癌干细胞移植瘤的增长,而不造成小鼠的体重明显下降。 2.BKM120联合多西紫杉醇对乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞的作用：经过药物联合指数计算,两药联合后呈激动作用。体外实验中与对照组、任一单药组相比,联合用药可进一步的抑制乳腺癌细胞的生长、降低乳腺癌细胞的迁移能力、减少乳腺癌细胞球囊的形成,降低乳腺癌细胞的克隆形成能力。与对照组及单药作用组相比,双药联合组更加明显的降低了乳腺癌细胞中pAKT,pS6等蛋白水平。体内实验中,与对照组及任一单药组相比,联合用药可更有效的遏制乳腺癌干细胞移植瘤的生长,同时未明显降低小鼠的体重。

查找更多 3.BKM120联合曲妥珠单抗对HER2阳性乳腺癌细胞及相应干细胞的作用：经过药物联合指数计算,两药联合后呈激动作用。体外实验中与对照组、任一单药组相比,联合用药可进一步的抑制乳腺癌细胞的生长、降低乳腺癌细胞的迁移能力、减少乳腺癌细胞球囊的形成,降低乳腺癌细胞的克隆形成能力。与对照组及单药作用组相比,双药联合组更加明显的降低了乳腺癌细胞中pAKT,pS6等蛋白水平。 结论：

1.P13K抑制剂BKM120对乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞生长增殖均产生一定的抑制作用。 2.BKM120联合多西紫杉醇在体内体外对乳腺癌干细胞生长增殖产生一定抑制作用。与单药组相比,联合用药可增强药物抗肿瘤作用,一定程度上克服乳腺癌干细胞对多西紫杉醇的耐药性。 3.BKM120联合靶向药物曲妥珠单抗在体外对HER2阳性的乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞均产生一定抑制作用。与单药组相比,联合用药可一定程度上增强药物抗肿瘤作用,克服Her2阳性乳腺癌干细胞对曲妥珠单抗的耐药性。
目的通过对胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GISTs)患者临床病理特征及术后随访资料的分析,探讨PTEN蛋白表达特点以及Ki-67标记指数与GISTs患者临床病理特点及预后的关系。 方法回顾分析2005年1月至2011年1月在扬州大学临床医学院胃肠外科接受手术治疗的84例原发性GISTs患者的临床病理资料及随访资料。收集GISTs肿瘤组织标本为实验组,收集同期手术的50例GISTs瘤旁正常胃肠道间质组织标本为对照组,制备组织芯片。应用免疫组织化学方法检测PTEN蛋白及Ki-67蛋白的表达水平,并将PTEN蛋白表达特点及Ki-67标记指数与GISTs患者的临床病理特征和无复发生存率(relapse-free survival, RFS)进行分析。 结果GISTs组中PTEN蛋白阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达率分别为13.1%、39.3%、44.0%和3.6%,对照组中PTEN蛋白阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达率分别为8.0%、20.0%、40.0%和32.0%, GISTs组中PTEN蛋白表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P1%(P=0.043)均与患者5年RFS相关。多因素生存分析结果显示,消化道出血[风险比(hazard MEK inhibitor cancer ratio,HR)=3.85,95％可信区间(confidence interval,CI):1.63-9.10,P=0.002]、肿瘤大小(HR5.1-10cm.≤5cm=1.86,95％CI:0.67-5.15；HR>10.m.10/50HPFs vs.≤5/50HPFs=3.44,95％CI:1.13-10.45；总体P=0.002)是影响GIST患者术后RFS的独立危险因素。 结论PTEN蛋白表达水平的表达缺失可能与GISTs的发生、发展及不良预后有关。Ki-67标记指数可用于GISTs术后恶性程度及预后的评估。消化道出血、肿瘤大小及核分裂象计数是原发性GISTs患者预后的独立危险因素；综合分析消化道出血、肿瘤大小、肿瘤部位、核分裂象计数及肿瘤破裂5个因素能更有效地进行GISTs患者术后危险度评估。
肿瘤的发生和发展与许多信号通路息息相关,因此靶向作用于特定的信号转导分子,从而预防和治疗肿瘤的研究策略日益受到越来越多的关注。在下游生存信号中,PI3K/Akt通路具有十分重要的作用,因此更深入的研究这一通路将会促进开发新颖的肿瘤治疗药物。 绵马素PB(aspidin PB)是从香鳞毛蕨Dryopteris fragrans (L.