重要的是,ERs肝癌细胞的外泌体冲击DCs介导的抗肿瘤免疫效应强于未ERs肝癌细胞外泌体,但是原因和机制尚不清楚。因此探索ERs肝癌细胞外泌体携带的抗原成分及其介导抗肿瘤免疫应答,对于基于DCs免疫治疗的新抗原的发现具有重要意义。目的观察ERs肝癌细胞外泌体对DCs影响及DCs体内外介导的抗肿瘤免疫效应;通过蛋白质谱技术寻找ERs与未ERs肝癌细胞外泌体中差异表达的蛋白,分析和探讨该MK-5108体内蛋白在ERs肝癌细胞外泌体对DCs影响中的作用,为基于DCs免疫治疗的新抗原的发现提供理论基础。方法(1)使用衣霉素((Tunicamycin,TM)诱导HepG2发生ERs,Western-blot检测ERs相关蛋白的表达。(2)从ERs和未ERs HepG2的培养上清中提取外泌体,电子透射显微镜下观察外泌体形态,Western-blot鉴定外泌体中CD6更多3、TSG101等蛋白的表达。将ERs和未ERs HepG2外泌体标记为“EXO-TM”和“EXO-CON”。(3)PKH67(膜荧光染料)标记外泌体,将PKH6-外泌体与DCs共孵育12小时,激光共聚焦显微镜下观察DCs对外泌体的摄取。(4)用ERs或未ERs HepG2外泌体冲击DCs,倒置显微镜下观察DCs细胞形态,流式细胞仪检测DCs的表面分子的表达不要,CBA试剂盒检测炎性细胞因子。未成熟DC标记为“iDC”;ERs或未ERs HepG2外泌体冲击的DCs标记为“DC_(EXO-TM)”和“DCEXO-CON”(5)用荧光染料CFSE预染的淋巴细胞与DCs共培养,细胞比例为51,流式细胞仪检测并分析细胞的增殖情况,CBA试剂盒检测淋巴细胞因子。(6)通过RTCA(实时细胞分析仪)DP系统连续监测淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。按效靶(CD8~+T细胞肿瘤细胞)为251,计算杀伤效率。