002);(3)抗胃动素血清可明显限制胃动素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(5.1±0.5)%(t=5.9, P=0.001)和(7.6±0.4)%(t=8.4, P=0.001),抗胃动素血清限制套索纤维收缩程度高于钩状纤维(t=3.02, P=0.040);磷脂酶C抑制剂U-73122明显抑制胃动素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(13.3±0.8)%(t=9.68, P=0.001)和(12.1±1.5)%(t=6.31, HIF cancer P=0.003),但两者比较无明显差别(t=1.29, P=0.268);三磷酸肌醇受体拮抗剂肝素分别阻断胃动素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(13.8±1.2)%(t=6.91, P=0.002)和(12.9±1.4)%(t=7.12, P=0.002),两者比较无明显差别(t=0.37, P=0.730);(4)胃动素使套索纤维和钩状纤维与[35S]GTPγS结合率明显升高(66.5±28.4)%(t=2.86, P=0.046)和(60.1±17.2)%(t=3.20, P=0.033),但两者比较无明显差别(t=0.32, P=0.764);(5) Gαi3抗体可明显抑制胃动素对套锁纤维和钩状纤维的收缩效应,细胞收缩百分数分别为(11.1±1.4)%(t=3.22, P=0.032)和(7.9±3.3)%(t=3.52, P=0.025),但两者比较无明显差别(t=1.10, P=0.333);Gαs和Gαq/11抗体对胃动素引起套锁纤维的收缩效应无明显影响。表明与胃动素耦联的G蛋白类型是Gi蛋白。

结论:胃动素受体在人LES套锁纤维和钩状纤维均有表达,套锁纤维表达高于钩状纤维;胃动素引起套锁纤维和钩状纤维收缩的规律明显不同,套锁纤维收缩反应强于钩状纤维。阐明了介导胃动素引起套锁纤维和钩状纤维收缩的信号转导通路为:胃动素与特异性的胃动素受体结合,通过Gi蛋白与磷脂酶C偶联,产生三磷酸肌醇,使胞内三磷酸肌醇敏感的钙库释放Ca~(2+),引起套锁纤维和钩状纤维收缩。 第二部分胃泌素对人类LES套索纤维和钩状纤维的调节作用及其信号转导通路 目的:胃泌素是脑肠肽的一种,是促进胃肠运动的重要激素。有研究显示短暂性LES松弛与胃泌素相关。本文主要讨论胃泌素引起套锁纤维和钩状纤维收缩规律及其信号转导通路。 方法:选取2009年5月至2010年10月期间因食管中段癌于河北医科大学第四附属医院行手术治疗患者5例,术中分别收集套锁纤维和钩状纤维。(1)制备游离的套锁纤维和钩状纤维单细胞悬液,不同浓度胃泌素溶液(10~(-6), 10~(-7), 10~(-8), 10~(-9), 10~(-10), 10~(-12)mol/L)作用于套锁纤维和钩状纤维引起收缩反应,随后应用2.5%的戊二醛终止反应,并记录套锁纤维和钩状纤维的长度变化。应用GraphPad Prism5.0软件对数据进行非线性回归分析,得出浓度-反应曲线,得到套锁纤维与钩状纤维发生最大收缩幅度时胃泌素溶液浓度;(2)应用皂苷制备可通透套锁纤维和钩状纤维单细胞悬液,分别观察胃泌素抗血清(1:100)、磷脂酶C抑制剂U-73122(10~(-6)mol/L)、三磷酸肌醇受体拮抗剂肝素(10μg/mL)对胃泌素引起套锁纤维和钩状纤维的收缩反应变化规律;(3)通过[35S]GTPγS结合实验,观察G蛋白水平变化;(4)观察特异性G蛋白抗体(Gαi3、Gαs、Gαq/11)对胃泌素作用的影响,分析与胃泌素受体耦联的G蛋白的类型。

点击此处 结果:(1)胃泌素在10~(-6)-10~(-12) mol/L范围内均对套锁纤维和钩状纤维产生收缩效应,呈剂量-效应关系,并且最大反应浓度为10~(-6)mol/L。胃泌素引起套索纤维和钩状纤维出现最大收缩百分率分别为(27.3±0.7)%和(23.7±0.6)%,套锁纤维收缩百分率高于钩状纤维(t=3.88, P=0.018);(2)胃泌素抗血清可分别阻断胃泌素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(10.9±1.1)%和(14.2±0.5)%,抗胃泌素血清限制套索纤维收缩程度高于钩状纤维(t=3.20,

P=0.033);磷脂酶C抑制剂U-73122分别阻断胃泌素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(13.1±2.1)%(t=6.15, P=0.004)和(11.4±2.0)%(t=4.71, P=0.009),两者比较无明显差异(t=0.54, P=0.620);三磷酸肌醇受体拮抗剂肝素分别阻断胃泌素对套锁纤维和钩状纤维收缩效应,细胞收缩百分数分别为(13.5±0.7)%(t=9.1, P=0.001)和(12.2±2.1)%(t=3.08, P=0.037),两者比较无明显差异(t=0.57, P=0.602);(3)胃泌素使套索纤维和钩状纤维[35S]GTPγS结合率明显升高(72.1±14.5)%(t=3.11, P=0.036)和(36.5±14.2)%(t=3.01, P=0.039),两者比较无明显差别(t=1.61, P=0.182);(4) Gαi3抗体可明显抑制胃泌素对套锁纤维和钩状纤维的收缩效应,细胞收缩百分数分别为(10.6±1.2)%(t=7.41, P=0.002)和(8.8±0.6)%(t=4.56, P=0.010),两者比较无明显差别(t=1.03, P=0.362); Gαs与Gαq/11抗体对胃泌素引起套索纤维收缩百分数分别(25.6±1.7)%(t=0.43, 寻找更多 P=0.688)和(24.6±5.1)%(t=0.69, P=0.528),对钩状纤维收缩百分数分别为(19.3±2.0)%(t=0.81, P=0.460)和(20.6±5.4)%(t=0.29, P=0.785),表明与胃泌素耦联的G蛋白是Gi。 结论:胃泌素受体在人LES套锁纤维和钩状纤维均有表达;胃泌素引起套锁纤维和钩状纤维收缩的规律明显不同,套锁纤维收缩反应强于钩状纤维。阐明了介导胃泌素引起套锁纤维和钩状纤维收缩的信号转导通路为:胃泌素与特异性的胃泌素受体结合,通过Gi蛋白与磷脂酶C通路偶联,产生三磷酸肌醇,使胞内三磷酸肌醇敏感的钙库释放Ca~(2+),引起套锁纤维和钩状纤维收缩。 第三部分促胰液素对人类LES套索纤维和钩状纤维的调节作用及其信号转导通路 目的:促胰液素是一种重要的胃肠调节激素,属于脑肠肽。生理剂量的促胰液素即可抑制胃运动,使胃舒张。本文主要讨论促胰液素引起套锁纤维和钩状纤维舒张变化规律及其信号转导通路。 方法:选取2009年5月至2010年10月期间因食管中段癌于河北医科大学第四附属医院行手术治疗患者5例,术中分别收集套锁纤维和钩状纤维。(1)制备游离的套锁纤维和钩状纤维细胞悬液,不同浓度促胰液素溶液(10~(-6), 10~(-7), 10~(-8), 10~(-9), 10~(-10), 10~(-12)mol/L)作用于套锁纤维和钩状纤维引起舒张反应,随后应用2.5%的戊二醛终止反应,并记录套锁纤维和钩状纤维的长度变化。应用GraphPad Prism5.