研究方法: 1. ODMECs分离、纯化和培养。选取卵巢上皮性恶性肿瘤组织进行原代卵巢癌微血管内皮细胞分离和培养,采用胰酶、胶原酶、dNaseI酶联合消化法获取ODMECs,并用连接有CD31抗体的免疫磁珠进行纯化。通过形态学、生化和表型特征对所获得的ODMECs进行鉴定;并检测其摄取可能乙酰化低密度脂蛋白(Acetylated-Low-Density Lipoprotein,DIL-acLDL)和结合凝集素Ⅰ(Ulex europaeus lectin I,UEA-Ⅰ)的能力,同时还观察到了其在体外培养中TLS的形成。 2.选定GenbankABT-199数据表号为NM_000118的Endoglin mRNA序列,作为siRNA设计的模板。设计具有短发夹结构的DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pGenesil- 1中构建重组质粒,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切和序列测定。 3.利用构建成功的Endogli不n基因siRNA表达质粒pGenesil-ENG1和pGenesil-ENG2,通过脂质体介导转染ODMECs,并通过半定量RT – PCR观察转染后48小时重组质粒对Endoglin mRNA表达的影响;MTT法检测转染后ODMECs细胞增殖的变化;并且通过光镜观察转染pGenesil-ENG1后,ODMECs体外二维管腔样结构形成的变化。