方法 培养人脐静脉内皮细胞,加入不同浓度Hcy诱导人脐静脉内皮细胞损伤,检测P66Shc、 active-Caspase3的蛋白表达水平并应用甲基化特异性PCR检测P66Shc的DNA甲基化状态改变。另同时加入不同浓度甲基化抑制剂5-氮杂胞嘧啶核苷(5-Azacytidine)并检测P66Shc、 active-Caspase3的蛋白表达水平。结果 Hcy诱导人脐静脉内皮以及细胞中P66Shc和active-Caspase3蛋白表达增加,并可引起P66Shc的DNA低甲基化。加入5-Azacytidine可以下调P66Shc和active-Caspase3蛋白表达。结论 Hcy可以通过降低P66Shc的DNA甲基化状态,引起血管内皮细胞凋亡导致血管内皮损伤。
观察caveolin-1和cyclophilin Awww.selleck.cn/products/PD-98059.html在血管平滑肌细胞荷脂过程中的表达变化及其对细胞内胆固醇蓄积的影响。实验采用Western-blot、免疫荧光法分别定量,定位检测caveolin-1和cyclophilin A蛋白的表达;油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况;高效液相检测细胞内外总胆固醇含量;免疫共沉淀检测caveolin-1和cyclophilin A相互作用。结果显示,随着荷脂还有时间延长,caveolin-1和cyclophilin A的蛋白表达逐渐减弱;细胞内脂滴形成逐渐增多,细胞内总胆固醇含量不断增加;caveolin-1和cyclophilin A在大鼠血管平滑肌细胞中相互结合,并且cyclophilin A活性抑制后,与caveolin-1结合能力减低,而细胞内胆固醇含量增加。这提示,caveolin-1和cyclophilin A在血管平滑肌细胞内可相互结合,并参与改善细胞内胆固醇蓄积。