以期揭示FLNa与恶性黑色素瘤发生和发展的分子机制,为FLNa成为恶性黑色素瘤临床诊断参考指标和基因治疗新靶点等提供理论依据。 方

以期揭示FLNa与恶性黑色素瘤发生和发展的分子机制,为FLNa成为恶性黑色素瘤临床诊断参考指标和基因治疗新靶点等提供理论依据。 方法: 1FLNa对人恶性黑色素瘤细胞株增殖、迁移及侵袭的影响 体外培养不表达FLNa的人恶性黑色素瘤M2细胞及其稳定表达FLNa的亚克隆M2A7细胞;将表达FLNa-shRNA的分子量质粒转染高表达FLNa的人恶性黑色素瘤UACC647细胞,经嘌呤霉素筛选获得沉默FLNa表达的UACC647(KD)细胞,利用western blot验证沉默效果。 1.1体外检测FLNa对人恶性黑色素瘤细胞增殖能力的影响 利用MTT法体外检测FLNa对细胞活力的影响。实验细胞分别Gefitinib接种于96孔板,血清饥饿4小时后,加入不同浓度EGF(4,20,100nM)培养44小时,加入MTT溶液继续培养4小时,弃去上清液,加入DMSO振荡溶解后置于酶标仪570nm处检测OD值。 利用平板克隆法体外检测FLNa对细胞贴壁后克隆形成的影响。实验细胞吹打混匀为单细胞悬液后分别可能接种于35mm培养皿,在含1%或10%胎牛血清培养基及EGF刺激条件下培养2周,苏木素染色后,镜下观察并计数克隆形成数量。 利用软琼脂克隆法体外检测FLNa对细胞非锚定增殖的影响。用含0.35%低熔点琼脂糖的培养基制备单细胞悬液后,分别接种于预先铺有含0.6%琼脂糖培养基的6孔培养板,在含1%或10%胎牛血清及EGF刺激条件下培养2周,镜下观察并计数克隆形成数量。

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *

*

You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>