MTT法结果显示，天麻素给药72h后，与谷氨酸模型组比较，各天麻素组对损伤的PC12细胞均呈现一定的保护作用；细胞形态学观察结果显示，天麻素组的细胞损伤程度减轻。

3. AO/EB染色结果显示正常组细胞形态规则，大部分细胞经AO染色成均匀一致的绿色，模型组细胞呈现橘红色荧光，天麻素给药组的细胞与模型组相比被EB染成橘红色的细胞数量较少。 4. Hoechst33258荧光染色结果显示谷氨酸模型组细胞，多数细胞核呈现蓝白色、碎块状致密浓染，呈现典型的凋亡细胞核特征；而天麻素处理后呈现凋亡特征的细胞数量减少。 5.流式细胞仪检测结果表明，天麻素给药组可明显抑制谷氨酸引起的ROS的累积；Annexin V/PI双染结果表明天麻素在一定程度上能够降低谷氨酸诱导的PC12细胞的凋亡率；罗丹明123染色结果显示天麻素给药组线粒体膜电位升高，线粒体损伤程度减轻。 6. Western blotting法检测结果表明，天麻素给药组与模型组相比能够显著下调p38的磷酸化水平，降低ERK1/2的磷酸化表达，抑制谷氨酸诱导的活性caspase-3的表达。 结论： 在一定的浓度范围内，天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有明显的保护作用，其保护作用可能与减少细胞内活性氧的生成，阻止氧化应激的发生，保护细胞膜的正常结构及稳定线粒体膜电位有关。其保护机制可能是通过下调p38磷酸化水平，降低ERK1/2的磷酸化状态及抑制活性caspase-3蛋白表达，从而阻止谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡。
目的： selleck化学药品液面控制 观察氯化镧（lanthanum chloride）对RANKL（Receptor activator of NF-κBligand）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的作用。观察破骨细胞基因（c-fos、trap、cathepsin K、MMP-9）及NF-κB通路基因（traf6、c-src、RANK、Fra1）mRNA的表达，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞生成数量，噻唑蓝（MTT）观察破骨细胞活性，流式细胞术检测破骨细胞凋亡情况。初步分析稀土镧元素与RANKL诱导的破骨细胞之间相互关系。 方法： 实验细胞株采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7，购自中国科学院细胞库(ATCC:TIB-71)。氯化镧(LaCl3·7H20，纯度99.9%)购于美国Simga公司。重组鼠核因子KB受体活化素的配体(Receptor

Activator of Nuclear Factor-κB ligand，RANKL)购自美国R&D公司。按照实验设计以添加氯化镧浓度不同分为五组：①空白组（RAW264.7）②对照组（RAW264.7+50ng/ml RANKL）③实验组低浓度镧（RAW264.7+50ng/ml RANKL+2.5μmol/L LaCl3）④实验组中浓度镧（RAW264.7+50ng/ml RANKL+20μmol/L LaCl3）⑤实验组高浓度镧（RAW264.7+50ng/ml 所以 RANKL+100μmol/L LaCl3）。采用MTT、流式细胞术观察镧对RANKL诱导的RAW264.7活性，RT-PCR检测破骨细胞基因表达，TRAP染色分析破骨细胞生成数量。 结果： MTT检测24、48及72小时，不同浓度镧对RANKL诱导的RAW264.7无明显毒性作用，OD值差异无统计学意义（P>0.05）。 TRAP染色检测不同浓度镧对RANKL诱导RAW264.7生成破骨细胞数量。空白组无成熟破骨细胞；实验组(137.60±4.54)/cm2、(102.70±3.23)/cm2、(72.20±5.28)/cm2相较于对照组（163.00±5.82）/cm2，破骨细胞数量减少（P0.05）。 流式细胞术检测镧对破骨细胞凋亡作用，各组别之间差异无统计学意义（P>0.05）。

RT-PCR检测破骨细胞基因及通路基因c-fos、trap、RANK、traf6、c-src、Fra1、cathepsin Purmorphamine浓度 K及MMP-9的表达。对照组较实验组表达增多，差异明显（P0.05）。 结论： 不同浓度（2.5、20、100μmol/L）氯化镧对RANKL诱导的RAW264.7分化、增殖、凋亡无明显毒性作用。 不同浓度（2.5、20、100μmol/L）氯化镧减少RANKL诱导的RAW264.7向成熟破骨细胞分化。但各浓度组之间抑制作用无明显差异。 RANKL可单独诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化成熟。
猪链球菌2型(Strreptococcus suis serotype2, SS2)是一种人畜共患传染病病原,对于养殖业的健康发展以及人类的生命健康具有严重威胁。近年来,猪链球菌2型的危害引起国内外的广泛关注,其分子致病机理和免疫方面的研究是目前研究的热点。尽管很多学者从单个或多个毒力因子的角度去阐述猪链球菌2型的分子致病机理,取得了一些进展,但仍无法很好的解释其如何突破机体的天然免疫系统以及血脑屏障,从而引起脑膜炎等病症。 病原菌致病通常不是由单一毒力因子引起,而是由多种毒力因子的共同作用而造成的,毒力因子在调控系统的控制下,形成一个精致的调控网络。双组份调控系统(Two-Component Regulatory System, TCS)是细菌中广泛存在的一种重要的信号转导机制,能将外界环境中感应到的信息传给内部系统。研究证实,TCS参与调控细菌毒力因子表达、细菌致病性和生长代谢等,目前在SS2中发现有至少15对双组分调控系统。中性粒细胞(Polymorphonuclear leukocytes, PMNs or Neutrophils)存在血液中,是体内数量最多的白细胞,类似巨噬细胞,具有吞菌活性,在急性炎症中起着十分重要的作用,是机体抵抗病原菌的第一道防线。 病原与宿主的相互作用在其致病过程中扮演重要作用。尽管多种SS2毒力因子已被证实在致病中具有重要作用,但细菌与天然免疫系统作用后基因表达变化的全面分析报道却很少。而且,对猪链球菌2型引起急性炎症或逃避宿主天然免疫的分子机制了解非常有限。本文选取SS2野生株SC19和猪中性粒细胞(PMNs)为研究对象,将SS2与PMNs相互作用后,通过基因表达谱芯片、生物信息学分析、荧光定量PCR等方法获得差异表达基因并分类；以CD1小鼠为模型评价双组份调控系统基因1660HK/RR,1910HK/RR和1094HK/RR基因缺失突变株△1660HK/RR,△1910HK/RR、△1094HK/RR的毒力以及引起的炎症反应,为阐明双组份调控系统引起急性炎症反应或免疫逃避的分子机制,深入研究S. suis2分子致病机理奠定理论基础,也为S. suis2新型疫苗和药物靶标分子设计提供新的思路。具体研究内容如下： 1.猪中性粒细胞的分离和培养 本研究采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PMNs,经Giemsa染色后检测PMNs的纯度为98%,采用苔盼蓝(0.01%浓度)排除法检测PMNs活力为96%,符合实验要求。 2.猪链球菌2型感染猪中性粒细胞后转录表达谱结果与分析 将SS2与PMNs互作,并在0.