25(OH)2D3诱导SW1353后， p-ERK1/2水平显著高于正常组，而p-p38和p-JNK低于正常组，差异具有统计学意义（p0.05）。qRT-PCR和ELISA法结果显示IL-1β诱导SW1353后，OPG、RANKL、RANK mRNA和蛋白的表达和OPG/RANKL比值高于正常组。SB203580组OPG mRNA、蛋白水平和OPG/RANKL比值低于模型组，而RANK mRNA、RANKLmRNA和蛋白量高于模型组；PD98059组OPG/RANKL比值高于模型组，差异具有统计学意义（p0.05）；SP600125组RANKL、OPG mRNA和蛋白、RANK
mRNA表达明显低于模型组，OPG/RANKL比值高于模型组，差异具有统计学意义（p0.05）。 结论：MAPKs通路可调节OA软骨细胞OPG、RANKL、RANK的水平。 第二部分：OPG对人软骨细胞增殖和凋亡影响的实验研究 目的：明确OPG对软骨细胞的作用及机制。 方法：予以不同浓度的重组人OPG-Fc作用于SW1353，MTT法检测细胞生存率，并筛选OPG-Fc的最佳作用浓度和时间纳入后续试验。以SW1353为研究对象，分为7组。分别以OPG-Fc、SB203580和PD980959对SW1353进行干预。Western 一般 blot法检测p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达。qRT-PCR法检测Bax、Bcl-2和caspase3mRNA的表达。流式细胞术检测细胞周期。 或者 结果：MTT结果提示:25ng/ml、50ng/ml的OPG-Fc能够促进SW1353细胞增殖，且50ng/ml组优于25ng/ml组。而100ng/mlOPG促进细胞凋亡。其中以72h作用显著。Western blot法结果显示，OPG-Fc诱导SW1353后，50ng/mlOPG-Fc组p-p38蛋白水平低于正常组，p-ERK1/2蛋白水平高于正常组，而100ng/ml组p-p38表达高于正常组，p-ERK1/2低于正常组。qRT-PCR法结果显示，50ng/mlOPG-Fc组Bax、caspase3mRNA和Bax/Bcl-2比值水平低于正常组，Bcl-2mRNA水平高于正常组，可被PD98059抑制；100ng/mlOPG-Fc组Bax、caspase3mRNA和Bax/Bcl-2比值水平高于正常组，而Bcl-2mRNA表达低于正常组，可被SB203580拮抗。流式细胞结果显示50ng/mlOPG-Fc组细胞增殖指数（PI）高于正常组，可被PD98059抑制；100ng/mlOPG-Fc组PI低于正常组，可被SB203580拮抗，差异具有统计学意义(p
卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,早期诊断困难,病理类型复杂多样,预后较差。虽经积极手术及术后化疗,五年生存率仍徘徊在40%左右。为了探寻卵巢癌治疗新靶点,我们在前期研究的基础上阐明了PAF/PAFR信号通路在卵巢癌侵袭中的作用及机制,观察了PAFR阻断剂银杏内酯B(GB)对裸鼠腹腔移植瘤的抑制作用,并初步探讨了GB降低携带BRCA1突变卵巢上皮细胞癌变风险的相关机制,研究分以下三部分：
Selleck GSI-IX 第一部分PAF促进卵巢癌细胞侵袭的相关机制 目的探讨PAF对PAFR阳性卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制。 方法(1)以不同浓度的PAF处理OVCA429细胞6h后检测环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)蛋白的表达水平,处理24h后检测基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白的表达水平；以100nM PAF处理OVCA432, ES-2,SKOV3-luc及RMUG-L细胞各6h,检测p-CREB变化以100nmol/L的PAF处理OVCA429细胞不同时间后检测有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白(p38MAPK).磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK). CREB及p-CREB蛋白的表达水平,上述各蛋白的表达水平均采用WesternBlot法检测。(2)在加入PAF (100nM)的基础上,分别加入各蛋白抑制剂,即PAFR抑制剂–GB (100μM)、p-p38MAPK抑制剂—SB203580(10μM)、CREB结合蛋白(CBP)-CREB相互作用抑制剂—217505(25gM)。实验分为6组：PAF组.PAF+GB组.PAF+SB203580组、PAF+217505组、PAF+SB203580+217505组及空白对照组,采用Western Blot法检测各组细胞中p-p38MAPK、p-CREB、MMP2蛋白的表达强度。(3)Transwell法检测上述6组处理细胞的侵袭能力。 结果(1)不同浓度的PAF处理后,OVCA429细胞中p-CREB、MMP2蛋白的表达水平呈明显的浓度依赖性(P0.05)。在OVCA432、ES-2及SKOV3-luc中可见到类似结果,但在RMUG-L细胞中未检测到p-CREB的变化。在100nmol/L的PAF处理不同时间后,OVCA429细胞中p38MAPK, CREB蛋白表达水平与无明显变化(P>0.05)；而p-p38MAPK、p-CREB蛋白表达水平明显升高趋势(P0.05),均显著低于DMSO组(P<0.