5％去氧胆酸钠制成大鼠SAP时ALI模型。选用纯雄性健康Wistar大鼠共138只，随机分成5组：假手术对照组(SHAM，n=18)；SAP模型组(SAP，n=30)；SAP+乌司他丁治疗组(ULI，n=30)；SAP+地塞米松治疗组(DEX，n=30)；SAP+清胰汤治疗组(QYT，n=30)；每组分造模后6h、12h、24h三个时间点，分离肺泡灌洗液中PMN，利用流式细胞仪、RT-PCR、免疫组化等方法检测各组肺泡灌洗液PMN功能的变化，探讨1)SAP时ALI大鼠肺泡灌洗液PMN表面的整合素CD11b／CD18与血管内皮、上皮细胞表面ICAM-1配体的表达以及血清中s ICAM-1的表达；2)SAP时 ALI大鼠肺组织PMN凋亡的变化规律以及凋亡的信号转导机制;3)5妙时ALI 大鼠肺组织pMN呼吸爆发的变化;4)比较中药清胰汤、地塞米松和乌司他丁对 SAP时ALI大鼠肺组织PMN功能的影响，试图阐明PMN功能改变在S妙时

ALI中的发病学意义，论证清胰汤的治疗作用及可能机理，为临床SAP时ALI的 治疗提供新的方法和理论依据。实验结果如下: 一重症急性胰腺炎肺损伤模型的复制 CB-839浓度 本研究采用经胰管逆行注射1 .5%去氧胆酸钠复制大鼠S妙时ALI模型，造 模后在各时相点大鼠均出现呼吸困难、口唇发组;动脉血气分析结果显示PaOZ 明显降低、PaCO:明显升高及A一aDO:逐渐增加，提示大鼠均有明显的低氧血症 和氧利用障碍;肺组织病理显示微血管通透性升高，肺组织中有大量PMN浸 润，肺组织渗出、出血明显。以上实验结果表明用1.5%去氧胆酸钠制备的大鼠 SAP模型均并发急性肺损伤。 二.粘附分子表达在重症急性胰腺炎肺损伤大鼠PMN肺内聚集的作用 应用流式细胞仪和免疫组化法检测大鼠肺泡灌洗液中PMN表面 CDllb/CD18和肺组织ICAM一1蛋白的表达。结果显示:S妙组肺泡灌洗液中 PMN表面整合素CDI lb/CD18表达在各时间点均较SHAM组明显增强，6h表达 明显已明显增强，并持续到24h:SAP组大鼠肺组织ICAM一1蛋白表达强度在各 时间点均较SHAM组明显增强，组内动态观察发现随造模时间延长ICAM一1蛋白 表达增强，24h时表达最强:SAP组大鼠血清中slcAM一1浓度各时间点均较 SHAM组明显升高，24h时血清中sICAM一1浓度达到高峰，并且其变化规律与大

鼠肺损伤程度明显相关，提示血清中sICAM一1水平可以做为判断S妙病情严重 程度的一个指标及PMN活化粘附的标志。 三.重症急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织PMN凋亡及凋亡的信号转导机制 应用流式细胞仪检测肺泡灌洗液中PMN凋亡，结果显示造模后各时间点 SAP组肺灌洗液中PMN凋亡比例均比SHAM组降低:SAP组肺灌洗液中PMN 存活比例均明显高于SHAM组，表明PMN游出血管到达肺组织后PMN凋亡延 迟，存活时间延长。PMN的这种变化与SAP时ALI的发生可能有密切关系，因 为游出的PMN处于激活状态，持续释放炎性介质和毒性内容物，造成周围组织 损伤。由此我们推测，通过诱导凋亡来清除这些PMN也许可以避免继发性肺组 织损伤，从而保护器官功能。 应用免疫组化法检测肺泡灌洗液PMN中NF一KB，结果显示:SAP组术后6h 胞浆NF一xB表达开始增加，术后12h表达最明显;造模后6h，12hs”组肺泡灌 洗液中PMN胞浆[C扩+1i的浓度比sHAM组明显增加，术后24h基本恢复到正 常。RT一PCR检测肺泡灌洗液中PMN Fas邝asl mRNA表达，结果SAP组肺泡灌洗 液中PMN表面Fas用asl mRNA几乎检测不到。以上结果提示:细胞增殖和分化 已经 过程中的一些基因、信使分子是细胞凋亡过程中的调节因子，细胞凋亡与增殖、 、分化的信号途径有着某些共同的信号分子，细胞接受相同或不同的刺激后，不同 的调节途径就会导致细胞的不同走向(增殖或凋亡)，PMN内[C扩+]i升高、NF- KB表达增加和Fas下asl mRNA表达减少均可抑制肺组织中PMN凋亡，造成 PMN凋亡的延迟。 四.重症急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织PMN呼吸爆发的变化 SAP组与SHAM组比较，SAP组大鼠肺泡灌洗液中PMN呼吸爆发在6h、 12h增强?
目的 缺氧是实质性肿瘤物理微环境的基本特征之一。缺氧不但可以诱导肿瘤细胞对放疗及化疗的耐受性，同时可促进肿瘤进展。越来越多的证据表明缺氧是决定恶性肿瘤预后的重要因素。在本研究中，我们拟观察胃癌细胞系MGC803缺氧不同时间后细胞周期、抑癌基因PTEN、线粒体ATP6(mtATP6)和线粒体Cyt-b(mtCyt-b)mRNA及VEGF、EGFR蛋白表达变化与放射敏感性的关系；分析MAPK、PI3K信号传导通路抑制剂PD98059、LY294002、外源性PTEN对缺氧后胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期、VEGF及EGFR蛋白表达的影响及其与放射敏感性的关系及机制。

获悉更多 方法 将MGC803细胞施加缺氧(1％ O_2)处理，分别作用0hr、2hr、8hr、16hr、24hr，每一时间点又分为缺氧组及缺氧照射组；ASPC-1细胞分成常氧组、缺氧组、LY294002缺氧组、PD98059缺氧组、LY294002和PD98059缺氧组；将质粒pEAK8和pEAK8-PTEN分别转染ASPC-1细胞，获得ASPC-1-pEAK8细胞及稳定高表达PTEN的ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞，将ASPC-1-pEAK8-PTEN、ASPC-1-pEAK8和ASPC-1细胞各分成常氧组、缺氧组、照射组、缺氧照射组。缺氧组缺氧时间为24hr，照射组接受4Gy单次照射，缺氧照射组在缺氧情况下进行照射。用RT-PCR、Western blot、流式细胞术、成克隆分析法对MGC803和ASPC-1细胞进行检测。 结果 MGC803细胞PIEN mRNA的表达水平随缺氧时间延长而增加，至缺氧 24hr达最高点;缺氧开始后AIT巧mRNA表达水平下降，shr后又升高，以后 随着时间的延长，A叨币mRNA再次下降;Cyt一b mRNA缺氧shr出现一过性 下降，24hr又恢复到缺氧前水平;几GF、EGFR蛋白的水平随缺氧时间延长 也逐渐增加，缺氧24hr蛋白表达量最高;缺氧使MGC803细胞发生G，期阻 滞，S期细胞减少，但24坛后细胞周期分布基本恢复至缺氧前水平;随着缺 氧时间的延长缺氧组细胞存活分数逐渐下降，与缺氧时间呈负相关(r二 一0 .900，P二0.037)，而缺氧照射组MGC803细胞存活分数与缺氧时间呈正 相关(r二0 .900，P二0.037)，在缺氧24hr内，缺氧组及缺氧照射组细胞存活 分数与细胞周期各期细胞变化无相关性(p>0.