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目的探讨TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制。方法将小鼠皮肤成纤维细胞(野生型和Smad 3 Knockout型)分为9组:野生型FB组、野生型FB+TGF-β1组、野生型FB+SB 431542组、野生型FB+SB 431542+TGF-β1组、Smad 3 KO FB组、Smad 3 KO FB+TGF-β1组、野生型FB+SB 203580+TGF-β1组、野生型FB+PD 98059+TGF-β1组和野生型FB+SP600 125+TGF-β1组。各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以TGF-β1刺激。收集细胞,…
目的:探讨木鳖子醇提物(ethanol extract of cochinchina momordica seed,CMSEE)诱导黑素瘤B16细胞分化的作用机理。方法:CMSEE处理B16细胞后,经瑞氏染色,倒置相差显微镜下观察B16细胞的形态学变化;比色法检测B16细胞黑素含量。Western blotting检测经CMSEE和p38、ERK通路抑制剂SB203580和SD98059处理后p-p38、p-ERK表达的变化。结果:经10μg/ml～40μg/ml CMSEE处理后,B16细胞呈现典型的细胞分化形态,黑色素量含量明显升高(P
目的研究吡格列酮(Pio)对脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞(AC)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的抑制作用及其作用机制。方法

AC分别加入Pio 0.1,1.0和10.0μmol·L~(-1),c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125 20.0μmol·L~(-1),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB20358020.0μmol·L~(-1)或过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制剂GW9662 10.0μmol·L~(-1),1 更多 h以后加入LPS 10.0 mg·L~(-1),继续作用24 h。Griess法测定培养AC上清液中一氧化氮(NO)含量。免…
Objective To further understand the mechanisms of signal transduction pathways for the formation of F-actin (polymerization of actin) and the activation of NADPH oxidase in phagocytic cells, the effects of 不 various inhibitors on them were studied. Methods Differentiated HL60 cells were studied to

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目的:观察 P38激酶特异性抑制剂 SB203580及反义 P38激酶 cDNA 对胆红素诱导人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞凋亡的影响,探讨 P38激酶信号转导通路在胆红素诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法:分别经 SB203580和二甲基亚砜预处理的 SH-SY5Y 细胞在胆红素作用3h 和5h 后, 在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。采用脂质体法将含人反义 CAL-101细胞系 P38cDNA 的真核表达载体 pcDNA3.0-antiP38导入 SH-SY5Y 细胞,建立稳定低表达 P38…
儿童肾病综合征治疗以糖皮质激素为主,多数患儿可以迅速缓解,但部分患儿出现原发或继发糖皮质激素抵抗,导致临床症状不能缓解,出现进行性肾脏损害,糖皮质激素抵抗发生机制至今不清。糖皮质激素是脂溶性类固醇激素,与细胞浆中的糖皮质激素受体(GR)结合211位丝氨酸磷酸化后转位入核发挥作用。糖皮质激素抵抗的机制目前尚不清楚,临床观察表明感染与激素抵抗密切相关,我们认为有感染或多途径所导致的细胞外信号调节激酶(ERK)的持续活化可能是儿童肾病综合征发生糖皮质激素抵抗的关键。本研究首先观察儿童肾病综合征糖皮质激素抵抗病人外周血淋巴细胞ERK活化及糖皮质激素受体GRα核转位受阻情况,以及ERK抑制剂对体外培养的…
【目的】甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)是否可通过丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径,调节Kv2.1蛋白,进而影响海马神经元凋亡。【材料和方法】用300μM的Meth对原代培养的海马神经元处理24小时,利用western

blot方法,观察Meth对于MAPK信号通路中ERK、JNK、p38通路及其磷酸化水平的影响。对海马神经元预敷ERK1/2、JNK和p38 MAPK通路抑制剂PD98059(10μM)、SP600125(10μM)和SB203580(10μM)1 h,随后加入300μM/L Meth作用…
目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在高氧性肺损伤的保护作用,并研究p38MAPK信号途径在NAC干预高氧性肺损伤中表达的变化。方法 40只3周龄普通级Wistar大鼠随机等分为5组:空气组(A组)、高氧损伤组(B组)、高氧+NAC组(C组)、高氧+SB203580组(D组)、高氧+NAC+SB203580组(E组)。
The purpose is to establish a model of acute ischemic kidney injury,as well as to examine the role of ADMA in ALl induced by AKI.Forty-five male Wistar rats were randomly divided into three groups(control,AKI and AKI+SB203580).Plasma ADMA levels and permeability index(PI)in the AKI group were sig…

1mg/kg)及高剂量LY294002组(0.5mg/kg),每组含10只裸鼠。每天给药连续10天。每周3次测量各移植瘤的体积(体积=1/2ab~2,其中a,b分别为移植瘤的长短径)。至第14天时牺牲裸鼠,HE染色观察移植瘤组织形态,IHC法检测Ki67表达并测定肿瘤细胞增殖活性,同时行Western blot方法检测AKT活化情况。并计算实体肿瘤质量抑瘤率和体积抑瘤率。(3)将荷瘤鼠(肿瘤大小均约600-800mm~3)随机分为4组,即6h处理组、18h处理组、24h处理组及48h处理组,每组4只裸鼠分别腹腔内注射对照(20%DMSO)、0.02mgLY294002、0.1mgLY294002或1.0mgLY294002。分别于给药一次后6h、18h、24h和48h牺牲裸鼠,采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测肿瘤细胞的细胞周期和细胞凋亡。(4)将荷瘤鼠(肿瘤大小均约200-400mm~3)随机分为4组,即单用LY294002(0.5mg/kg)组、单用阿霉素(doxorubicin,DOX)(5.0 mg/kg)组、LY294002(0.5mg/kg)与DOX(5.0

mg/kg)联合用药组以及对照组,每组含10只裸鼠。LY294002为每日给药连续10天,DOX为处理起始第1天和第3天给药。肿瘤体积观测、体积抑瘤率和质量抑瘤率计算、形态学观察及和细胞增殖活性检测大致同(2)。 结果: 第一部分:(1)pAKT和pmTOR在DLBCL中的阳性率分别为73.3%(55/75)和74.7%(56/75),二者的表达强度、阳性细胞分布基本一致。(2)non-GCB型DLBCL中pAKT和pmTOR的阳性率分别为82.5%(47/57)和84.2%(48/57),显著高于GCB型中的阳性率44.4%(8/18)和44.4%(8/18)(均p＜0.01)。(3)pAKT和pmTOR高表达组的Bcl6蛋白阳性率与mRNA水平均显著低于pAKT和pmTOR低表达或不表达者(均p＜0.01)。(4)pAKT和pmTOR阳性患者中乳酸脱氢酶(LDH)异常者高于阴性患者中的比例,差异达临界统计学意义(p=0.055)。pAKT和pmTOR的表达与性别、年龄、临床分期、KPS评分、B症状之间没有相关性(p＞0.05)。pAKT和pmTOR阳性患者的预后较阴性患者差,但差异没有显著性(p＞0.05)。

也许 第二部分:(1)4个催化亚单位在DLBCL中按照mRNA表达水平从高到低依次是PIK3CD,-B,-A和-G。其中PIK3CD表达水平略高于PIK3CB(p＞0.05),显著高于PIK3CA和PIK3CG(p＜0.05)。(2)PIK3CB的表达也显著高于PIK3CA和PIK3CG(p＜0.05),并且PIK3CB在DLBCL中的表达显著高于RH中(p＜0.05)。(3)pAKT阳性组中PIK3CB和PIK3CD的表达水平均显著高于pAKT阴性组(p＜0.05)。(4)76例DLBCL中仅有1例检出了PIK3CA基因的突变,突变率为1.32%。(5)该病例共有3个突变位点,其一为c.1634A＞C,发生在曾报道的热点部位之一;另两个突变位点是c.1658G＞C的颠换和其后单个碱基(T)的缺失(c.1659delT),导致移码突变,该两个突变均未见文献报道,为新发现的突变类型。 PLX3397数据表 Hydroxychloroquine小白鼠 第三部分:(1)运用LY8细胞株在裸鼠成功进行了人DLBCL细胞的种植,截至本次实验观察时已传至第9代,共移植裸鼠124只,其中114只成瘤,成瘤率达91.1%。每代移植瘤的生长特点均相似:于移植后约2周长出,随后即进入快速生长,约在3周左右长至1000mm~3,4周左右达3000mm~3大小。经病理形态学分析、IHC检测、基因重排检测及基因组DNA微卫星序列检测,表明与人DLBCL细胞相似,证实了移植瘤的稳定性和可重复性。(2)与对照组相比高剂量组LY294002显示出明显的抗肿瘤效应,且大致呈时间依赖性。高剂量LY294002组的肿瘤体积和质量与对照组相比均显著降低(p＜0.01);低剂量组降低不显著(p＞0.05)。与对照组相比低剂量组与高剂量组pAKT表达均显著降低,高剂量组尤其显著。(3)低剂量组和高剂量组LY294002肿瘤细胞增殖活性(Ki67阳性率)显著低于对照组,以高剂量组尤其显著(均p＜0.05)。(4)FCM检测发现6h和18h不同剂量组、24h低、中剂量组及48h中剂量组均显示肿瘤细胞的细胞周期S期细胞比例较对照略有降低而G1期细胞增加,提示出现G1期阻滞,但效果均不显著(p＞0.05)。24h时高剂量组和48h时低剂量组及高剂量组均显示出S期细胞比例明显降低(p＜0.05),提示出现显著的G1期阻滞。其中对细胞周期阻滞效果最显著的是48h时高剂量处理组。另外本试验也显示,LY294002促细胞凋亡的效果不明显(p＞0.05)。(5)与LY294002或DOX单用组及对照组相比,LY294002与DOX联合组荷瘤鼠较早地出现了对肿瘤生长的明显抑制。联合组的肿瘤体积抑瘤率显著优于任何单用组(p＜0.05);而质量抑瘤率显著优于LY294002单用组(p＜0.05),也优于DOX单用组,其差异达临界统计学意义(p=0.057)。通过检测Ki67的表达分析了LY294002对DLBCL肿瘤细胞增殖活性的影响,结果发现LY294002与DOX联用组的肿瘤细胞增殖活性显著低于对照组和任一药物单用组(均p＜0.01)。

结论: 1.AKT/mTOR信号传导通路活化在DLBCL发生中起重要作用,特别与Bcl6低表达或不表达以及non-GCB亚型密切相关,该信号通路有望成为部分DLBCL治疗的新靶点。 2.在DLBCL中PIK3CD和PIK3CB均高表达并且与pAKT的表达显著相关,提示PIK3CD和PIK3CB可能在DLBCL中PI3K/AKT通路的活化中发挥重要作用。PIK3CB在DLBCL中的表达水平显著高于RH,提示其可能参与了DLBCL的发病机制。PIK3CA基因突变在DLBCL中发生率极低,提示其可能不是DLBCL中PI3K/AKT通路活化的主要机制。 3.本研究成功建立了人DLBCL裸鼠移植瘤模型,为进一步体内研究提供了较理想的动物模型。利用该模型本研究表明LY294002在体内可以抑制AKT活化从而抑制DLBCL肿瘤的生长,并且主要是通过调节细胞周期而非细胞凋亡,同时可以抑制肿瘤细胞增殖活性。另外LY294002在体内也可以增加化疗药物DOX的肿瘤抑制作用。上述结果与本课题组前期体外实验结果相符,为DLBCL的治疗提供了新的理论依据和思路。 本课题的创新性在于: 1.