结果：1.hsa-miR-7、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-26b、hsa-miR-30c、hsa-miR-25、hsa-miR-222为与肺癌转移相关的microRNA。2.EGFR、PAK1、RAF1和MMP20是预测受hsa-miR-7调控的靶基因。3.DNMT3A/DNMT3B、SPARC、CDC4Selleckchem Obeticholic Acid2、VEGFA、IGF1是预测的受hsa-miR-29 (hsa-miR-29a、hsa-miR-29b)调控的靶基因。4.ZEB2、MAPK1和HGF、MAPK1和DNMT3A、MMP1和ZEB2分别是预测的受hsa-miR-25、hsa-miR-26b、has-miR-30c、hsa-miR-222调控的靶基因LY294002 花费。 结论：1.目前已经证实has-miR-7通过抑制EGFR的表达而抑制肺癌转移,并且还可能通过调控PAK1、RAF1、MMP20而调控肺癌转移,尚需进一步确认,并且明确其调控机制和通路。2.国外有研究证实,在非小细胞肺癌中,hsa- miR-29家族通过调控DNMT3A/DNMT3B,使异常甲基化的沉默抑癌基因重Bioactive Compound Library花费新表达,从而抑制肿瘤的增殖和转移,本研究显示hsa-miR -29可能还通过下调SPARC、VEGFA、IGF1来抑制肺癌转移,尚需进一步实验研究明确其调控的机制和通路。3.hsa- miR-25、hsa-miR -26b、hsa-miR-222、has-miR-30c可能分别通过调控ZEB2、MAPK1和HGF、MMP1和ZEB2、MAPK1和DNMT3A来抑制肺癌转移,尚需进一步研究确认。

对于身体状况许可的SCLC复发患者,应接受二线及以上化疗。拓扑替康是惟一获得美国食品药品管理局批准用于SCLC二线治疗的药物;氨柔比星在日本获得批准。本文针对耐药问题,综述不同类型药物的联合应用,以及针对SCLC的生物靶向治疗药物的研发。
上皮性卵巢癌在妇女常见肿瘤中占第5位,也是死亡率位居第2位的妇科恶性肿瘤。虽然采用了肿瘤细胞减灭术和持续性化疗,但因大多数卵巢癌患者就诊时已届晚期,5年Bafilomycin A1临床实验生存率不足50%。尽管大多数卵巢癌散发,但许多研究表明,部分卵巢癌病例呈家族传递现象,人乳腺癌(breast cancer,BRCA)基因突变被证实是一种重要的预后因素。此外,BRCA基因突变无症状携带者的筛查为卵巢癌的预防提供了前所未有的机遇。
目的探讨AG014699提高含BRCA2基因缺陷的胰腺癌细胞放射敏感性的作用机制。方法选择Capan-1和Panc-1已经 2种胰腺癌细胞株,分成单纯药物组、单纯放疗组、药物联合放疗组,MTT法检测药物IC50,通过细胞克隆形成率分析细胞存活状态,应用免疫荧光法观察H2Ax的形成。结果单药AG014699(≤10μM)对Capan-1细胞有毒性作用,对Panc-1无效应;放疗联合药物组对Capan-1细胞克隆形成率影响最明显,与单药和单放疗组比较(P0.05);DNA损伤表现为H2Ax查找更多形式,提示DNA双链断裂是细胞死亡的主要模式。结论 AG014699对含有BRCA2基因缺陷的胰腺癌细胞Capan-1有放疗增敏作用。
三阴性乳腺癌(TNBC)是雌激素受体、孕激素受体以及人表皮生长因子受体均为阴性的乳腺癌。相对于其他乳腺癌亚型,其具有侵袭性强、恶性程度高、患者预后差、辅助治疗后复发转移率高等特点。TNBC对化疗较为敏感,治疗仍以细胞毒性药物为主。近年来,随着肿瘤分子生物学研究的深入,分子靶向治疗成为近几年乳腺癌研究和关注的焦点。

材料和方法采用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA和蛋白酶体抑制剂MG-132作用淋巴瘤细胞系EL4、WEHI-231和多发性骨髓瘤细胞系J558、SP2/0、P3NSI。分别应用台盼兰法和AnnexinV/PI双、单染流式细胞仪观察两种药物以不同浓度单独和联合作用后细胞增殖、周期和凋亡的变化。Bliss法计算TSA/MG-132对各细胞株的IC50值,基于Isobolographic m许多ethod法的Calcuysn软件计算协同作用指数CI(Combination indices,CI),评价药物协同作用。Westernblot检测不同浓度药物单独和联合作用后细胞内周期和凋亡相关蛋白表达的变化,包括细胞内周期相关蛋白CyclinD1、p21和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3。同时,观察了IRF4和c-Myc蛋白表达水平在药Selleck物作用的淋巴瘤和骨髓瘤细胞中的差异。 结果TSA和MG-132均可在24小时后呈药物浓度依赖的细胞增殖抑制。对于TSA,各细胞株IC50为3.5-8.0nM,MG-132为2.2-4.4uM。对5株细胞的协同作用指数CI值均小于1:P3NSI的CI值为0.004-0.293,J558的CI值为0.068-0.423,SP2/0D的CI值为0.029-0.3drug discovery19,WEHI的CI值为0.056-0.741,EL4的CI值为0.109-0.346。TSA/MG-132单独作用各细胞株时,细胞凋亡呈药物浓度依赖性增高;联合药物作用于细胞株,细胞凋亡率增长,协同诱导细胞凋亡作用明显。细胞凋亡相关蛋白caspase-3激活,Bax、Bcl-2表达均减少。各细胞均阻滞于G0-G1期。药物作用24后,G0/G1期细胞平均约增长一倍:41%增加到75%。统计分析显示,药物伍用对细胞周期阻滞没有协同作用。

MAPK1在不同类型的细胞和不同刺激下发挥促凋亡或抗凋亡作用。研究表明MAPK1增强多种细胞中cisplatin和celecoxib诱导的细胞凋亡。RPS6KA3是MAPK1的下游底物,属于Ser/Thr激酶家族,在细胞存活、增殖和凋亡中发挥双重作用。近期研究表明MAPK1和RPS6KA3通过调节ATF4和DDIT3的表达而影响TNFRSFIOB的表达。蛋白mTOR抑制剂激酶C (protein kinase C, PKC)在调节细胞增殖和凋亡中起重要作用。一般认为PKCδ是促凋亡蛋白,凋亡刺激下PKCδ在调节亚基和催化亚基之间被切割,产生具有持续生物学活性的片段,该片段促进细胞凋亡。PKCα一般在细胞存活中发挥作用,但有研究发现它也促进细胞凋亡,如PKCα促进喜树碱诱导的凋亡。关于PKCα是否在P许多S-341诱导的细胞凋亡中发挥作用目前仍不清楚。很多前期数据表明蛋白酶体抑制剂PS-341单独或联合其他药物作用时具有明显的抗肿瘤效果,但是PS-341诱导细胞凋亡的具体分子机制仍不是很清楚。我们的前期实验已经证明PS-341诱导TNFRSF10B上调,所以本论文将进一步探讨在非小细胞肺癌细胞中PS-341诱导TNFRSF10B上调Osimertinib分子量的分子机制。赖氨酸乙酰化在多种生物过程中发挥作用,例如细胞信号转导、细胞骨架动力学、代谢和DNA复制等。蛋白乙酰化和去乙酰化的平衡由乙酰转移酶和去乙酰化酶共同维持。越来越多的非组蛋白被证明发生乙酰化修饰,例如TP53.PKM2、 c-MYC、NF-κB、 a-tubulin等；乙酰化修饰影响蛋白的结构和功能。蛋白的乙酰化水平在多种肿瘤中都有明显变化,也是肿瘤形成一个重要因素,因此乙酰化是肿瘤治疗的一个重要靶点。

患者性别、年龄、初诊时PLT计数及成人危险度分层等因素对ALL患者的复发率无明显影响；初诊时WBC≥50×109/L的ALL患者及骨髓中白血病细胞比例≥90%的ALL患者具有较高复发率，T-ALL的复发率较B-ALL高，Ph+-ALL患者缓解后易复发；异常核型的ALL患者复发率高于正常核型ALL患者，而t(9;22)异常核型的患者与非t(9;22)异常SCH772984核型患者的复发率比较无明显差异；儿童高危组患者的复发率明显高于低危组患者。单因素分析显示ALL患者的性别、年龄、初诊时PLT及WBC计数对患者无病生存时间无明显影响；儿童低危组患者及骨髓中白血病细胞比例＜90%的患者可获得更长的无病生存时间。化疗相关感染发生率为49.46%。结论ALL患者的年龄、血小板计数、白细胞计数、骨髓中Hydroxychloroquine购买白血病细胞比例、免疫表型、染色体核型均是影响ALL患者疗效及预后的因素。
伊马替尼作为首个分子靶向治疗慢性粒细胞性白血病(CML)的酪氨酸激酶抑制剂，它所取得的成就是巨大的。但是随着其在临床上的广泛应用，一些不良反应和耐药性等相关问题陆续出现，新的酪氨酸激酶抑制剂的开发成为目前研究的热点。 本论文重点研究了伊马替尼重要中间体寻找更多N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-哌啶胺的合成及工艺优化。以2-甲基-5-硝基苯胺和3-乙酰基吡啶作为起始原料，经硝化、加成、环合、还原得到伊马替尼活性母体结构N-(2-甲基-5-氨基苯基)-4-(3-吡啶基)嘧啶-2-胺。将此化合物作为母体结构，对其进行结构修饰和改造，设计合成了苯氧乙酰胺类、脲类、芳酰基硫脲类共计19个伊马替尼衍生物，并通过IR、MS、1H-NMR等确证了分子结构。

以期揭示FLNa与恶性黑色素瘤发生和发展的分子机制，为FLNa成为恶性黑色素瘤临床诊断参考指标和基因治疗新靶点等提供理论依据。 方法： 1FLNa对人恶性黑色素瘤细胞株增殖、迁移及侵袭的影响 体外培养不表达FLNa的人恶性黑色素瘤M2细胞及其稳定表达FLNa的亚克隆M2A7细胞；将表达FLNa-shRNA的分子量质粒转染高表达FLNa的人恶性黑色素瘤UACC647细胞，经嘌呤霉素筛选获得沉默FLNa表达的UACC647(KD)细胞，利用western blot验证沉默效果。 1.1体外检测FLNa对人恶性黑色素瘤细胞增殖能力的影响 利用MTT法体外检测FLNa对细胞活力的影响。实验细胞分别Gefitinib接种于96孔板，血清饥饿4小时后，加入不同浓度EGF（4,20,100nM）培养44小时，加入MTT溶液继续培养4小时，弃去上清液，加入DMSO振荡溶解后置于酶标仪570nm处检测OD值。 利用平板克隆法体外检测FLNa对细胞贴壁后克隆形成的影响。实验细胞吹打混匀为单细胞悬液后分别可能接种于35mm培养皿，在含1%或10%胎牛血清培养基及EGF刺激条件下培养2周，苏木素染色后，镜下观察并计数克隆形成数量。 利用软琼脂克隆法体外检测FLNa对细胞非锚定增殖的影响。用含0.35%低熔点琼脂糖的培养基制备单细胞悬液后，分别接种于预先铺有含0.6%琼脂糖培养基的6孔培养板，在含1%或10%胎牛血清及EGF刺激条件下培养2周，镜下观察并计数克隆形成数量。

这些化合物通过MTT法细胞活性初步测试，结果表明都具有一定的抗肿瘤活性，其中化合物F-7和G-5的活性较好，具有潜在的进一步研究价值。
研究背景 胃癌是世界上常见的消化道恶性肿瘤。目前治疗胃癌的主要方式为手术,化疗和放疗,但是其临床效果不尽人意,寻求更新的胃癌治疗手段特别是基因治疗势在必行。研究发现,c-Met基因在胃癌中表达较高。当c-Met蛋白与配体肝细胞生长Dolutegravir数据表因子(HGF)结合后,激活下游PI3K/Akt信号通路,可以强烈的刺激肿瘤细胞增生、浸润、侵袭、转移和血管再生。RNA干扰技术能特异性的沉默目的基因,目前已经成为肿瘤基因治疗的研究热点。 本试验应用RNA干扰技术,沉默胃癌MKN-45细胞的c-Met基因,从基因和蛋白两个水平观察转染前后胃癌MKN-45细胞c-Met及其下游PI3K/AktBaf-A1售价信号分子表达的变化,为胃癌的基因靶向治疗提供理论依据。 材料和方法 1、胃癌MKN-45细胞由中南大学湘雅医院病理实验室赠予,将细胞放置于含有10%胎牛血清的DMEM完全培养基,并置于37℃、5%C02、湿度为80%的培养箱中培养。从Genebank基因数据库查得c-Met基因序列,设计并合成3条c-Met-siRNA序列,合成工作委托上海点击此处吉玛制药技术有限公司完成。 2、通过脂质体LipofectaminTM2000介导,将3条c-Met-siRNA序列转入人胃癌MKN-45细胞中。 3、转染48h后,从基因和蛋白水平,利用实时定量PCR(real time-PCR, RT-PCR)方法和Western-Blot方法,检测转染前后胃癌MKN-45细胞c-Met及下游信号分子表达的变化。 4、采用SPSS17.0统计软件包对数据进行分析,以P0.05)。

WB比较MHCC-97H和MHCC97H-OXA细胞中Aurora-A和IDl的表达,发现MHCC97H-OXA中Aurora-A和ID1表达均较野生株升高。通过划痕实验分析耐药细胞株的迁移能力,结果发现MHCC97H-OXA细胞株的迁移明显增强(P<0.0001)。进而通过Transwell实验分析耐药细胞株的侵袭能力,GW-572016制造商发现MHCC97H-OXA细胞株的侵袭能力显著增强(P<0.0001),对奥沙利铂的敏感性显著增强(P<0.0001),显著增加其对奥沙利铂的敏感性(P<0.0001)、侵袭能力(P<0.0001)、克隆形成能力均明显受抑(P<0.0001),VX-689也逆转了MHCC97H-OXA细胞的耐药性Idelalisib(P<0.0001)。4.对152例HCC患者的组织进行免疫组化分析,中位随访时间为51.17±21.46个月。Aurora-A高表达患者58例,低表达94例。低表达组的中位0S尚未达到,高表达组的中位0S为30个月,P<0.001；低表达组的中位RFS尚未达到,而高表达组的中位RFS为15个月,Selleck Ruxolitinib两组间比较P值<0.001。ID1高表达组患者68例,低表达患者84例,低表达组的中位OS尚未达到,高表达组的中位OS为35个月,P
背景恶性肿瘤已经成为严重影响人类生存与健康的第一因素,而胃癌因其临床症状隐匿、检测手段单一、临床治疗方法疗效甚微等一系列因素的制约,致死率在消化系统肿瘤中居于前列。因此胃癌的早期诊断对胃癌诊断与治疗是十分重要的,而内镜技术在其中的地位不言而喻。

研究方法: 1. ODMECs分离、纯化和培养。选取卵巢上皮性恶性肿瘤组织进行原代卵巢癌微血管内皮细胞分离和培养,采用胰酶、胶原酶、dNaseI酶联合消化法获取ODMECs,并用连接有CD31抗体的免疫磁珠进行纯化。通过形态学、生化和表型特征对所获得的ODMECs进行鉴定;并检测其摄取可能乙酰化低密度脂蛋白(Acetylated-Low-Density Lipoprotein,DIL-acLDL)和结合凝集素Ⅰ(Ulex europaeus lectin I,UEA-Ⅰ)的能力,同时还观察到了其在体外培养中TLS的形成。 2.选定GenbankABT-199数据表号为NM_000118的Endoglin mRNA序列,作为siRNA设计的模板。设计具有短发夹结构的DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pGenesil- 1中构建重组质粒,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切和序列测定。 3.利用构建成功的Endogli不n基因siRNA表达质粒pGenesil-ENG1和pGenesil-ENG2,通过脂质体介导转染ODMECs,并通过半定量RT – PCR观察转染后48小时重组质粒对Endoglin mRNA表达的影响;MTT法检测转染后ODMECs细胞增殖的变化;并且通过光镜观察转染pGenesil-ENG1后,ODMECs体外二维管腔样结构形成的变化。

通过western blotting检测到化合物与Rapamycin联用可以抑制Histone H3(Ser10)的磷酸化水平,初步探明了化合物与Rapamycin联用的机制。在动物水平上,使用了人类QGY裸鼠移植瘤模型检测了化合物与Rapamycin的联用能力,与Sorafenib+Rapamycin阳性对照组相比,化合物与Rapamycin表现点击此处出与之相当的联用效果以及较低的毒性。 我们还初步检测到化合物与Sunitinib联用可以抑制包括肝癌、宫颈癌、结肠癌等多种肿瘤细胞系的生长,利用流式细胞仪发现化合物与Sunitinib联用可以引起细胞凋亡。此联合应用在体内的效果及其机制正在进一步研究中。 此外,我们还对筛选到的阳性化合物S7及S39做了进一步药效药理的研究没有。 使用基于Kinase-Glo发光激酶检测法的Aurora B高通量筛选模型检测了阳性化合物对体外Aurora B激酶活性的抑制能力,发现阳性化合物的抑制能力与VX680相当。利用分子对接的方法模拟了阳性化合物与Aurora B的结合作用。 进一步验证了化合物在细胞水平上对肿瘤细胞系的生长抑制的IC50值,两个化合物分别Alisertib临床试验对不同组织来源的细胞系包括肝癌、黑色毒瘤、结肠癌、宫颈癌等显示出不同程度的生长抑制；通过对多种细胞株的时间梯度和药物浓度梯度生长曲线进行检测,测定出化合物对细胞生长抑制的的时间曲线；通过克隆形成率实验证明化合物处理的肿瘤细胞单克隆的形成能力大大下降；通过RNAi的方法发现化合物对内源性Aurora B消减后细胞生长的抑制作用下降。 利用流式细胞仪检测到化合物处理的细胞出现显著的G2/M期阻断和细胞凋亡。