01);与模型组相比,香砂六君子汤组大鼠胃黏膜TLR2,TLR4,p-P38MAPK蛋白以及细胞核内NF-κB蛋白表达逐渐降低,以高剂量组降低最为明显(P
目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对人鼻黏膜上皮细胞分泌黏蛋白MUC5AC的促进作用及其分子机制。方法体外培养人鼻黏膜上皮细胞,用1、10、100μg/ml MAPK抑制剂 SEB孵育细胞0~24 h,ELISA法检测培养上清中MUC5AC;Western blotting分析p38的磷酸化。最后采用20μmol/L p38抑制剂SB203580处理人鼻黏膜上皮细胞,观察其在介导MUC5AC分泌中的作用。结果 1、10、100μg/L SEB作用鼻黏膜上皮细胞24 h后,MUC5AC含量分别为(62.40±20.12)、(128.45±14.07)、(312.74±30.58)μg/L,未经SEB处理的鼻黏膜上皮细胞MUC5AC量为(22.34±6.32)μg/ml,不同浓度SEB作用的鼻黏膜上皮细胞分泌SEB量均高于未经SEB处理的细胞,差异有统计学意义(P均
用血清调理的酵母聚糖（ｓｅｒｕｍ－ｏｐｓｏｎｉｚｅｄ　ｚｙｍｏｓａｎ　，ｓＯＺ）刺激多性核白细胞（ＰＭＮ）引起的Ｏ２－产生受到ｐ３８ＭＡＰＫ抑制物（ＳＢ２０３５８０），ＰＩ３－Ｋ抑制物（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）和ＰＫＣ抑制物（ＧＦ１０９２０３Ｘ）的明显抑制，这些抑制物也明显引起ｓＯＺ诱导的一种ＮＡＤＰＨ氧化酶的胞浆成分

ｐ４７ｐｈｏｘ的磷酸化。可是流式细胞分析表明，ＳＢ２０３５８０和 ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ使吞噬作用减弱，而 ＧＦＩＯ９２０３Ｘ使吞噬作用增强。这些结果表明，虽然ＰＩ３－Ｋ和ｐ３８ ＭＡＰＫ都参与ＮＡＤＰＨ氧化酶激活和吞噬作用的信号传导，但ＮＡＤＰＨ氧化酶激活的信号传导途径与吞噬作用的信号传导途径不同。
目的:研究p38和p42/p44 Ca~(2+).钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CCDPK)信号通路对过氧化氢(H_2O_2)诱导牛主动脉内皮细胞(BAEC)凋亡的调节作用.方法:H_2O_2处理BAEC 24 h后,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数.MTT法测定细胞活性,琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解,蛋白质印迹法检测磷酸化p38和p42/p44

CCDPK表达.结果:H_2O_2诱导BAEC产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染,核碎裂)和DNA断片.H_2O_2(100-500μmol·L~(-1))浓度依赖性刺激磷酸化p42/p44和p38 CCDPK的表达.p42/p44 CCDPK抑制剂U0126显著增强H_2O_2致凋亡作用;然而p38 CCDPK抑制剂SB203580可增强H_2O_2诱导的磷酸化p42/p44 CCDPK的表达,但不影响BAEC的存活.结论:p42/p44 CCDPK对H_2O_2诱导的BAEC凋亡起保护作用,而p38 CCDPK不是介导H_2O_2所致细胞凋亡的主要信号通路.
目的:研究肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导牛主动脉内皮细胞(BAEC)凋亡及其信号途径。方法:BAEC培养并传代于DMEM。经TNF-α处理24h后,Hoechst33258染色,荧光显微镜观察形态学变化及凋亡细胞计数。MIT法测定细胞活性,琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解,Western A-1210477 blot法检测磷酸化p38和p44/42CCDPK表达。结果:TNF-α诱导BAEC产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染,核碎裂)和DNA断片。TNF-α(100-5000kU/L)浓度依赖性诱导BAEC凋亡,并同时刺激磷酸化p44/42和p38CCDPK的表达.p44/42CCDPK抑制剂U0126可完全阻断TNF-α诱导的p44/42CCDPK的活化,显著增强TNF-α致凋亡作用;而p38 CCDPK抑制剂SB203580可完全阻断TNF-α诱导的p38CCDPK的活化,还可增强TNF-α诱导的磷酸化p44/42CCDPK的表达,明显抑制TNF-α促凋亡作用。结论:TNF-α同时激活p38和p44/42CCDPK,这两种CCDPK信号通路在TNF-α诱导BAEC凋亡中起相反作用。
目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路在络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)蛋白表达中的作用及通络药物保护血管内皮,防治血管病变的作用机制。方法首先建立络气虚滞型血管内皮功能障碍(VED)大鼠模型,用模型大鼠血清体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞株,实验分为5个组:空白对照组、正常血清组、模型血清组、通心络(TXL)组、SB203580组。采用Western

没有 blot技术检测各组中F-actin、p38、磷酸化p38(phospho-p38)蛋白表达的变化。结果与空白对照组和正常血清组比较,模型血清组F-actin的蛋白表…
Background Cathepsin S and its endogenous inhibitor cystatin C are implicated in the pathogenesis of atherosclerosis,especially in the plaque destabilization and rupture leading to acute coronary syndrome.However, whether circulating cathepsin S and cystatin C also change in association with coro…
Introduction:Smoke-inhalation injury causes a destruction ofthe ciliated epithelium that lines the tracheobronchial tree.Casts produced from these cells,polymorphonuclear leukocytesand mucus can cause upper-airway obstruction,contributing topulmonary failure.We have reported that a combination o…

以1.0,2.0,10.0,20.0,50.0μmol/L的AOH分别作用NIH3T3细胞24 h和48 h,MTT法观察不同浓度的AOH对细胞增殖的影响;以1.0,2.0,10.0,20.0,50.0μmol/L的AOH作用NIH3T3细胞4 h,单细胞凝胶电泳实验观察AOH对DNA损伤程度;以1.0,2.0,10.0,20.0,50.0μmol/L的AOH作用NIH3T3细胞24 h,流式细胞术(FCM)检测AOH对NIH3T3细胞周期的影响;以1.0,2.0,10.0,20.0,50.0μmol/L的AOH作用NIH3T3细胞48 h,将存活细胞传代后,重复刺激48 h,将细胞接种在六孔板中(150个/孔),克隆形成率实验观察AOH对NIH3T3细胞的转化作用。 2.分别用2.0,10.0,20.0μmol/L AOH作用NIH3T3细胞16 h,采用RT-PCR、免疫细胞化学法和Western Blotting检测不同浓度的AOH对NIH3T3细胞中polβmRNA和蛋白水平表达的影响。 结果 1.一定浓度的AOH抑制NIH3T3细胞增殖 1.0μmol/LAOH作用24 h和48 h吸光度值与对照组相比无统计学差异(P＞0.05);2.0μmol/L以上各浓度组24

h和48 h的吸光度值均较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05),显示明显的浓度依赖关系。 2.AOH损伤NIH3T3细胞DNA 计算出各组细胞的尾部DNA含量,发现1.0,2.0μmol/L AOH剂量组与对照组无明显差异,10.0,20.0,50.0μmol/L AOH组均高于对照组(P＜0.05),且50.0μmol/L组高于10.0,20.0μmol/L组,说明AOH可造成DNA损伤,且存在浓度依赖性。 3.AOH引起NIH3T3细胞周期G2/M期阻滞 1.0μmol/L和2.0μmol/L组细胞周期与对照组相比,无明显变化。随着AOH浓度的增加,G2/M期细胞百分比逐渐增大,而G0/G1期细胞百分比降低,且呈浓度依赖性,与对照相比差异均有统计学意义(P＜0.05),表明细胞被阻滞于G2/M期。 4.AOH处理的NIH3T3细胞克隆形成率提高 Selinexor 克隆形成实验结果显示,随着AOH浓度的增大,平均克隆率逐渐增高(P＜0.05),但是50.0μmol/L

AOH组克隆形成率降低了。 5.AOH诱导NIH3T3细胞中polβ表达增高 RT-PCR、免疫细胞化学和Western Blotting结果表明,2.0,10.0,20.0μmol/LAOH作用NIH3T3细胞16 h后,polβ表达增高,具有浓度依赖性。 第二章AOH激活NIH3T3细胞中PKA-CREB和p38MAPK-ATF2信号通路 ZD6474 价格 方法 1.分别用2.0,10.0,20.0μmol/L AOH作用NIH3T3细胞1 h,检测NIH3T3细胞中PKA的活化水平;作用2 h,检测CREB的活化水平。20.0μmol/L AOH作用细胞0,30,60和120 min,检测NIH3T3细胞中PKA和CREB的活化水平。PKA特异性抑制剂H89预处理细胞1 h,再加入20.0μmol/LAOH作用1 h,检测PKA活性变化;作用2 h,检测CREB的活性变化。 2.分别用2.0,10.0,20.0μmol/L AOH作用NIH3T3细胞2 h,Western Blotting方法检测细胞中p38和ATF2的磷酸化水平;20.0μmol/L AOH作用细胞0,1,2和4h,检测p38和ATF2的磷酸化水平;利用p38特异性抑制剂SB203580预处理细胞1 http://www.selleckchem.cn/products/AG-014699.html h,再加入20.0μmol/L AOH作用2 h,检测p38和ATF2磷酸化水平的变化。 3.JNK特异性抑制剂SP600125预处理细胞1 h后,再加入20.0μmol/L AOH作用细胞2 h,同时设20.0μmol/L

AOH直接作用组,Western Blotting检测AOH对NIH3T3细胞中JNK1/2的磷酸化作用和对ATF2磷酸化水平的影响。 4.p38特异性抑制剂SB203580预处理细胞1 h,再加入20.0μmol/L AOH作用细胞2h,Western Blotting检测细胞中磷酸化CREB表达水平的变化。 结果 1.AOH激活NIH3T3细胞中PKA-CREB信号通路 1.1 AOH诱导PKA激活并发生核转位 Western Blotting的结果表明,2.0μmol/L AOH对PKA的活化作用不明显(P＞0.05),而10.0,20.0μmol/L的AOH能够强烈激活PKA,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05),显示浓度依赖关系。免疫细胞化学法检测结果与之一致。免疫荧光结果表明,PKA活化并转位入核。 20.0μmol/L的AOH作用NIH3T3细胞不同时间,Western Blotting的结果表明,随着作用时间的延长,PKA的活化水平逐渐增高,在60 min时达到高峰,显示时间依赖关系。 抑制实验的Western Blotting结果显示,H89预处理组活化的PKA的表达水平低于AOH直接处理组(P＜0.05),免疫细胞化学法和免疫荧光检测结果与之一致。 1.2 AOH诱导转录因子CREB激活 Western Blotting的结果表明,2.0μmol/L AOH对CREB磷酸化水平增加不明显(P＞0.05),而10.0,20.0μmol/L的AOH能够强烈激活CREB,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05),显示浓度依赖关系。免疫细胞化学法、免疫荧光检测结果与之一致。 20.0μmol/L的AOH作用NIH3T3细胞不同时间,Western Blotting的结果表明,随着作用时间的延长,CREB的磷酸化水平逐渐增高,在2 h达到高峰,显示时间依赖关系。 抑制剂H89预处理细胞后,Western Blotting的结果表明,H89部分阻断AOH诱导的CREB的活化,H89预处理组磷酸化CREB的表达水平低于AOH直接处理组(P＜0.05),免疫细胞化学法和免疫荧光检测结果与之一致。提示AOH处理细胞后,CREB的磷酸化一定程度上依赖于上游PKA的激活。 2.AOH激活NIH3T3细胞中p38MAPK-ATF2信号通路 2.1 AOH诱导p38MAPK激活 Western Blotting的结果表明,2.0,10.0,20.0μmol/L的AOH均能够增加p38的磷酸化水平,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05),并显示浓度依赖关系。 20.0μmol/L的AOH作用NIH3T3细胞不同时间,Western Blotting的结果表明,随着作用时间的延长,p38的活化水平逐渐增高(P＜0.

01）。在Ins+血脂康组、AngII+血脂康组、Ins+AngII+血脂康组相比于对应未加入血脂康的Ins组、AngII组、Ins+AngII组COX-2mRNA和蛋白表则明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。

(3) PGI2表达结果：血脂康组PGI2表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；Ins组、AngII组、Ins+AngII组相比于对照组PGI2表达量明显减少（P＜0.05）；且Ins+AngII组相比于Ins组、AngII组减少更为明显（P＜0.01）；而在Ins+血脂康组、AngII+血脂康组、Ins+AngII+血脂康组相比于Ins组、AngII组、Ins+AngII组PGI2表达量升高（P＜0.05）。 结论： 通过体外实验表明，AngII、Ins能促进细胞增殖，同时也能促进HUVECsCOX-2的mRN和蛋白表达，使得PGI2合成减少，且两者具有协同作用；而血脂康能一定程度上抑制细胞增殖，同时也可使AngII、Ins诱导的HUVECs的COX-2的mRNA和蛋白表达上调，PGI2合成水平增加。为研究AngII、高胰岛素血症促AS及他汀类抗AS作用进一步提供了理论依据。
研究背景和目的：吸烟是引发慢性阻塞性肺部疾病(Chronic BMS-754807浓度 obstructive pulmonary diseases, COPD)的主要危险因素。香烟含有大量的氧化物质,这些氧化物能激活蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2(protein tyrosine

phosphatase, Shp2)。Shp2是一种由PTPNII基因编码的蛋白酪氨酸磷酸酶,含有2个SH结构域,其作为细胞因子、生长因子及其他胞外刺激因素的下游信号分子广泛地表达于机体各种组织和细胞中,参与细胞增殖、分化、死亡等诸多细胞生命活动环节。我们之前研究证明吸烟和香烟烟雾提取物(Cigarette selleckchem smoke extract,CSE)能够激活人上皮细胞Shp2mRNA和蛋白的表达,Shp2抑制剂干预和肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠或细胞可减轻吸烟诱导的肺部炎症反应与上皮细胞炎症因子表达。本课题中我们探讨抑制和基因敲除Shp2减轻吸烟诱导小鼠肺纤维化的作用及机制。 方法： 1、整体实验：观察Shp2特异性抑制剂PHPS1干预和肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠对吸烟引起的肺纤维化指标的影响。小鼠每天吸烟10支,连续10天,诱导肺纤维化模型,检测指标包括转录生长因子β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproleinase-9, MMP-9)、钙结合蛋白(Calcium binding protein, S100A4),胶原纤维沉积以及Shp2表达。 1)收集肺泡灌洗液(BALF),采用酶联免疫吸附(Elisa)法检测BALF上清中MMP-9和TGF-β1蛋白表达；

2)收集肺组织,制备匀浆上清液,采用定量多聚合酶链反应(Q-PCR)法测定匀浆上清液中MMPs和TGF-β1基因的表达； 3)制作肺组织切片,采用免疫组化染色法检测小气道周围Shp2、MMP-9和S100A4表达； http://www.selleckchem.cn/products/Perifosine.html 4)肺组织切片,采用Masson胶原纤维染色法检测小气道周围胶原纤维沉积。 2、离体实验：观察Shp2特异性抑制剂PHPS1处理肺上皮细胞和Shp2基因沉默肺上皮细胞对CSE诱导的MMP-9和TGF-β1表达的影响,以及对信号分子的影响。 香烟烟雾提取物(CSE)刺激小鼠正常肺上皮细胞MLE-12： 1)采用MTT法测定MLE-12细胞活性； 2) Western blot (WB)法检测CSE诱导p-Shp2和Shp2表达； 3)CSE刺激MLE-12细胞,Q-PCR法检测MMPs基因表达,WB法检测MMP-9蛋白表达； 4)Shp2特异性抑制剂PHPS1干预细胞后进行CSE刺激,采用Q-PCR和WB法检测Shp2对CSE诱导MMP-9基因和蛋白的影响； 5)Shp2siRNA沉默Shp2基因后进行CSE刺激,采用WB法检测Shp2对CSE诱导MMP-9的调节作用。 香烟烟雾提取物(CSE)刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549： 6)CSE刺激A549细胞,半定量多聚合酶链反应(RT-PCR)和Elisa法检测TGF-β1基因和蛋白表达； 7)Shp2特异性抑制剂PHPS1干预A549细胞后进行CSE刺激,采用Q-PCR法检测Shp2对CSE诱导TGF-β1基因表达的影响； 8)作用机制研究：预先给予Erk1/2抑制剂U0126, JNK抑制剂SP600125,p38抑制剂SB203580阻断Erk1/2, JNK和p38的活性,CSE刺激MLE-12细胞后,Q-PCR和WB法检测CSE诱导MMP-9表达,研究分析其可能的作用机制。 结果： 1、整体实验： 1)小鼠经香烟烟雾暴露10天后,肺泡与小气道上皮细胞的Shp2表达显著增高； 2) BALF上清中MMP-9及TGF-β1的蛋白表达显著性增强；肺组织中MMP-9和TGF-β1基因水平表达明显升高；肺组织MMP-9、S100A4的表达量以及胶原纤维沉积明显升高； 3)与对照组小鼠相比,烟雾暴露小鼠经Shp2特异性抑制剂PHPS1干预后,BALF上清中MMP-9、TGF-β1的蛋白表达显著性下降；肺组织匀浆MMP-9和TGF-β1的基因表达水平亦明显降低,肺MMP-9、S100A4表达量以及胶原纤维沉积明显减少； 4)肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠与对照组小鼠相比,BALF上清中MMP-9和TGF-β1蛋白释放显著性下降,肺组织匀浆中MMP-9和TGF-β1的基因水平表达明显降低,肺MMP-9、 S100A4的表达量以及胶原纤维沉积同样明显减少。 2、离体实验： 1)细胞活力检测中,不同浓度的CSE(0.

pallidumsubsp.pallidum,Tp)俗称梅毒螺旋体,是人类性传播疾病(STD)梅毒(syphilis)的病原体。梅毒是一种严重危害人类健康的性传染性疾病,其不仅严重损害人体的多个器官从而引起全身性损害,还可由母体经胎盘垂直传播给胎儿,引起早产、流产、死胎和畸胎或胎传梅毒(又称先天性梅毒),严重影响出生人口质量。此外,梅毒与艾滋病的传播途径相同,可
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目的研究栝蒌薤白半夏汤对心肌缺血再灌损伤大鼠心肌细胞凋亡及P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组(A)、缺血再灌注组(B)、缺血预处理组(C)、栝蒌薤白半夏汤组(D)、阻断剂(203580)+栝蒌薤白半夏汤组(E)5组,每组8只。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支造成心肌缺血再灌注损伤模型,各组动物至实验时限(缺血30min再灌注90min)后,取出心脏。采用末段探针标记(TUNEL)和免疫组化方法进行细胞凋亡率及P38MAPK表达测定。结果

B组心肌细胞凋亡率显著升高,P38MAPK表达水平明显下降,与A组比较,差异有显著统计意义;B、E两组结果比较,组间差异无统计学意义;D组能有效激活P38MAPK表达水平,降低心肌细胞凋亡率,与B组比较差异有显著统计意义。结论栝蒌薤白半夏汤能够有效抑制心肌细胞凋亡,其作用机制之一可能与P38MAPK的激活相关。
目的:观察丹参(Salvia PI3K抑制剂 miltiorrhiza)对大鼠小肠缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusion injury,IRI)中肾脏p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)信号转导通路的影响。方法:雄性SD大鼠36只,随机分为空白组、缺血再灌注组、丹参处理组。采用钳闭大鼠肠系膜上动脉缺血再灌注模型。酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked

immuno-sorbent assay,ELISA)测定肾组织中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的含量,蛋白印记(Western 因为 blot)法检测肾组织中磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶(Phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,P-p38MAPKs)的表达;紫外分光光度法检测血浆二胺氧化酶(Diamine oxidase,DAO)的活性;HE染色形态学方法评价肠及肾组织损伤;血清生化分析仪检测尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(Crea,Cr)。结果:缺血再灌注组与空白组比较,小肠及肾组织结构损伤严重,肾脏中p38MAPK、TNF-α和IL-1β表达明显增高,血浆DAO、BUN、Cr含量升高(P<0.01);丹参处理组与缺血再灌注组比较,肾组织中p38MAPK表达显著降低,肾组织中TNF-α和IL-1β含量减少,血浆DAO含量下降,小肠和肾组织结构损伤显著减轻。BUN、Cr明显降低(P<0.05)。结论:丹参可减轻小肠缺血再灌注肾损伤;其机制与其抑制肾组织中p38MAPK信号转导通路的活化进而减少TNF-α、IL-1β的释放有关。
目的探讨无创肢体缺血预处理(LIP)对兔心肌电稳定性的影响及其机制。方法取兔27只,随机分为:单纯缺血对照组(Ctr组),LIP组,LIP+ATP敏感的钾通道(KATP)抑制剂格列苯脲组(LG组),LIP+丝裂素活化的蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580组(LSB组),闭胸状态下同步记录体表ECG及心内、外膜单相动作电位。分析心肌缺血背景下单相动作电位振幅(MAPA)、单相动作电位复极90%时间(APD90)、0期去极化最大速率(Vmax)和心率、心律失常的类型、发生率及持续时间的变化,实验结束后取心肌组织检测其中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量。结果缺血后,四组的平均心率、MAPA、Vmax均不同程度地减小,APD90不同程度地延长;LIP能抑制心律失常的发生,使心律失常持续时间缩短。LG组心律失常发生降低,持续时间缩短,LSB组结果与Ctr组相近。与Ctr组比较,LIP组SOD活力升高;其余三组的MDA含量降低;LIP组NO含量升高,而LG组及LSB组亦低于LIP组(P均<0.05)。结论无创肢体缺血预处理具有增强兔心肌电稳定性、减轻心肌氧化损伤的作用,p38MAPK可能为其发挥保护作用的重要途径,KATP则可能仅在抗氧化和改善供血等方面发挥了作用。
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目的:研究胰腺癌细胞株Panc-1在应用脂多糖(LPS)刺激前后B7-H1表达的变化,并探讨其可能的分子机制。方法:LPS刺激以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的特异性抑制剂处理Panc-1细胞前后,应用Western

AZD2281分子重量 blotting检测MAPKs信号通路中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)和c-Jun氨基端激酶(JNK)磷酸化水平的变化,real-time PCR和Western blotting检测B7-H1 mRNA和蛋白的表达变化。结果:LPS刺激后B7-H1的表达显著上调,p38、ERK和JNK的磷酸化水平也明显上调,加入MAPKs特异性的抑制剂后,LPS诱导的p38、ERK和JNK的磷酸化被抑制,并且在p38和ERK的抑制剂处理后,B7-H1的表达也明显被抑制,而在JNK的抑制剂处理后B7-H1的表达没有显著变化。结论:LPS可以诱导胰腺癌细胞株Panc-1表达B7-H1,并且p38和ERK的活化在LPS诱导的B7-H1的表达过程中起着重要作用。
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目的探讨吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的影响。方法成年雄性SD大鼠随机分为四组:自然停搏组(A组)、St.

整体试验：构建小鼠哮喘模型。Balb/c小鼠在第0天与第14天用10μg/只小鼠的卵白蛋白(OVA)与2mg氢氧化铝混溶后皮下注射于小鼠的脚掌、颈部、背部与腹股沟致敏。在第22-28天,将小鼠放置于有机塑料盒内,用雾化吸入器气道雾化吸入30分钟的OVA抗原(10mg/mL).第29天治疗组气道滴入给药3h后,用整体体积描记系统测定气道反应性,分别用3.125、6.25、12.5、25、50mg/mL的乙酰甲胆碱雾化吸入激发,测定相应浓度下气道呼气间歇(Penh)值。之后取肺泡灌洗液进行细胞计数,取左上肺提取mRNA。 Selleck Capmatinib 2.离体试验：MTT法检测环索奈德代谢物与福莫特罗对RBL-2H3细胞活性的影响。用抗原抗体复合物诱导RBL-2H3细胞构建肥大细胞炎症模型。用实时RT-PCR和ELISA检测IL-4,

IL-13mRNA和蛋白的表达。用Western Blot检测JNK信号通路。 结果： 1.整体实验结果： 1)在OVA诱导的小鼠哮喘模型中,环索奈德和福莫特罗可分别呈剂量依赖性的抑制乙酰甲胆碱(3.125-50mg/mL)诱导的Penh值的增加。2)环索奈德(0.3mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28μg/kg)联用对乙酰甲胆碱(6.25-50mg/mL)引起的Penh值升高,与单剂量相比具有协同抑制作用；环索奈德(1mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28ug/kg)联用对乙酰胆碱(3.125-50mg/mL)引起的Penh值升高,与单剂量相比无明显的协同抑制作用。3)环索奈德和福莫特罗可分别呈剂量依赖性的抑制哮喘小鼠肺部炎症细胞的增多。4)环索奈德(0.3,1mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28μg/kg)联用,与单剂量相比对哮喘小鼠肺部炎症的增多有明显的协同抑制作用。5)福莫特罗对哮喘小鼠肺组织中IL-4mRNA表达的升高呈计量依赖性抑制；环索奈德在浓度0.3mg/kg时对IL-4mRNA表达的升高有显著抑制作用；环索奈德(1mg/kg)分别与福莫特罗(14,28ug/kg)联用对IL-4mRNA表达的升高有协同抑制作用。

selleckchem 2.离体实验结果：1)高浓度环索奈德代谢物(10-8-10-4M)可引起细胞毒性反应降低RBL-2H3细胞活性,而福莫特罗(10-12-10-4M)对细胞活性无明显影响。2)DNP-BSA (100ng/mL)刺激表面结合IgE (200ng/mL)的RBL-2H3细胞可显著诱导炎症因子IL-4和IL-13表达的增多。3)环索奈德代谢物(0.1-10nM)与福莫特罗(0.1-10μM)均可呈剂量依赖性的抑制DNP-BSA诱导的IL-4和IL-13表达的增多。4)环索奈德代谢物(0.2nM)与福莫特罗(1州)联用与单剂量相比,对DNP-BSA诱导的IL-4的产生有显著协同抑制作用；对IL-13和组胺的产生无显著协同抑制作用。5) 什么 MAPK通路中JNK通路抑制剂SP600125(10μm)可显著抑制DNP-BSA诱导的IL-4表达和分泌,而P38和ERK通路抑制剂对IL-4产生无明显抑制作用。6) IgE-BSA复合物可诱导JNK磷酸化,在刺激20min时磷酸化最多。7)环索奈德代谢物(0.1-10nM)与福莫特罗(0.1-10μM)均可呈剂量依赖性的抑制DNP-BSA诱导的JNK磷酸化。8)环索奈德代谢物(0.2nM)与福莫特罗(1μM)联用与单剂量相比,对DNP-BSA诱导的JNK磷酸化有显著协同抑制作用。

结论： 1)在小鼠的哮喘模型中,环索奈德与福莫特罗的联用对于乙酰甲胆碱诱导的气道高反应性和炎症的产生,具有协同抑制作用。 2)在抗原抗体复合物介导的RBL-2H3炎症细胞模型中,环索奈德代谢物与福莫特罗联用对炎症因子IL-4的产生有协同抑制作用；抑制MAPK的JNK通路可能是其机制之一。
目的： 支气管哮喘(bronchial asthma,简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的以可逆性气流受限为特征的气道慢性炎症性疾病。主要表现为气道炎症、气道重塑以及气道高反应性(AHR)。AHR是哮喘的重要特征之一,主要是由气道平滑肌(ASM)的异常过度收缩引起,是引发咳嗽、胸闷、呼吸困难和喘息等症状的主要原因。一般认为,存在于哮喘患者气道的炎症介质可使气道高反应性增高,导致气道平滑肌(ASM)的异常收缩,诱发哮喘急性发作或者重度哮喘发作。p2受体激动剂作为控制哮喘发作症状的首选药物,主要通过与ASM上肾上腺素能受体结合而活化一系列信号通路,引起ASM的舒张。然而,部分患者在使用β2受体激动剂后并不能取得理想的疗效,其中机制众说纷纭,有研究者认为是炎症因子促进了ASM的收缩而影响了p2受体激动剂的疗效,也有研究者认为炎症因子直接作用于ASM引起p2受体激动剂对ASM舒张作用减弱或通过下调ASM表面p2受体的表达量而削弱了其舒张作用。近年来发现,许多炎症细胞因子与AHR有关,其中包括IL-17。IL-17是Th17细胞分泌的细胞因子,与许多炎症反应和自身免疫性疾病的发生和发展有关。早期研究发现,哮喘患者血清、痰液以及支气管肺泡灌洗液(BALF) IL-17中的浓度较正常人明显升高,而且其表达水平与病情以及气道反应性相平行。最近,M.

36pg／mL；9h组sTNFR1的量为189.36pg／mL。表明MMP-9促进SW1116细胞表面TNFR1脱落形成sTNFR1且与时间有一定的关系。 六、MMP-9作用前后SW1116细胞TNFR1的表达与细胞培养上清中sTNFR1的关系：经线性相关分析显示两者呈明显负相关 结论 一、大肠癌细胞株表达TNFR1 二、MMP-9促进SW1116细胞表面TNFR1脱落形成sTNFR1，但有剂量和时间依赖性。MMP-9下调大肠癌细胞表面TNFR1的表达，可能与大肠癌侵袭转移密切相关。
目的：探讨补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷对血小板衍生生长因子BB

获悉更多 (PDGF-BB)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其细胞周期和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导的机制。 方法：以含药血浆(终浓度10%)作用于VSMC,3小时后加入PDGF(终浓度10ng／ml),24小时后以MTT比色法测定生长曲线,以免疫荧光流式细胞分选术(FACS)测定细胞周期,以流式细胞术(FCM)测定细胞周期相关蛋白c-fos、P21、cyclinD1、PCNA和CDK4的表达,以免疫蛋白印迹法(western blot)测定P-ERK1/2、P-JNK1/2和MKP-1的表达。 结果：①PDGF-BB作用于VSMC后,可诱导VSMC增殖(P<0.05)。补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷含药血浆可抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖(P<0.05)和上调MKP-1的表达(P
目的:观察吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对野百合碱(monocrotaline,MCT)所致大鼠右心室肥厚的影响并探讨其可能的机制。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机均分6组,正常对照组、模型组、EVO低(20

mg·kg~(-1))、中(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1))和阳性药硝苯地平(nifedipine,Nif)(20 mg·kg~(-1))除正常对照组外各组大鼠于实验开始时单次i.p.2%MCT 60 mg·kg~(-1)制模,对照组则i.p.等容积生理盐水。24 h后各组分别灌胃给药,正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续18 d。测定各组大鼠的右心室收缩压(RVSP)、右室肥厚指数(右心室/(左室+室间隔)RVHI)、右心重/体重(RVW/BW)、肺湿重/体重(LW/BW);肺组织H.E.染色观察肺小动脉形态学的改变,透射电镜观察右心室心肌细胞超微结构的变化,Real time PCR检测心肌组织心房利钠因子(ANF)、钙调神经磷酸酶(CaN)、细胞外信号调节激酶1(ERKl)mRNA的表达,免疫组化法检测心肌组织CnA和MKP-1表达的情况。结果:与模型组比较,EVO低、中、高剂量预防给药均使RVHI、RV/BW明显降低(P＜0.05),并降低MCT所致大鼠RVSP的增高,使MCT所致大鼠肺动脉重构减轻,能缓解心肌细胞超微结构的损伤,ANF mRNA表达明显下调。另外,EVO能降低能降低心肌组织CaNmRNA和CnA蛋白以及ERK1 mRNA的表达,而提高MKP-1蛋白的表达。结论:EVO能明显防治MCT诱导的大鼠右心室肥厚,其机制至少通过以下途径:①抑制肺动脉重构,降低肺动脉压力,是其抗心肌肥厚机制之一,但对心脏的直接作用因素不能排除;②EVO的抗心肌肥厚作用与其抑制CaN和MAPK信号转导通路有关。
中波紫外线(UVB)诱导的皮肤炎症主要表现为活性氧(ROS)水平上调、炎症细胞迁移和趋化以及炎症因子表达和释放。本文着重从昆明种小鼠背部皮肤表皮和真皮两个方面,考察了有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)／核转录因子(NF-κB)信号途径和自噬(Autophagy)在UVB诱导炎症发生中的作用；并对天然单体水飞蓟宾发挥保护作用的机制进行了初步研究。MAPK蛋白激酶家族包括ERK激酶、JNK激酶和p38激酶,三者位于胞内信号通路下游,激活后通过活化转录因子,启动功能蛋白质相应的靶基因表达,引起细胞功能发生改变。MAPK蛋白激酶家族通常参与有关细胞的生长、增殖、分化以及应激等胞内多种信号的传递,与之相关的信号通路在真核生物进化中均较保守。NF-κB可参与白细胞介素、肿瘤坏死因子、干扰素、生长因子、趋化因子、一氧化氮合酶、环氧合酶等炎症介质的表达,在激活与早期细胞内或细胞间防御反应如获得性免疫和炎症反应有关的细胞因子中发挥重要作用。自噬是受细胞精密调节的清除异物和降解自身产物的过程,负责修复受损细胞和维持细胞正常生长、发育和分化；作为细胞内细胞器和其它结构自然修复和更新的正常途径,广泛存在于正常的细胞内。本研究发现,UVB通过激活MAPK家族,分别抑制和促进表皮层和真皮层细胞的自噬,上调表皮层和真皮层细胞内的NF-κB活化水平,启动炎症因子的转录和翻译,最终引发皮肤炎症。此外,我们还发现水飞蓟宾在整体、组织和细胞形态、氧化损伤和ROS水平、MAPK/NF-κB信号通路的激活以及自噬的调节等方面对UVB引起的损伤均发挥了明显的对抗作用。综上所述,我们认为UVB照射引起的皮肤炎症与MAPK/NF-κB途径和自噬有关,天然药物水飞蓟宾能够明显抑制上述UVB的致炎作用。
IL-24(白细胞介素24)具有抑制肿瘤血管生成活性、刺激免疫系统应答和诱导肿瘤细胞凋亡的方式联合发挥抗肿瘤效应。大多数肿瘤细胞尤其是实体瘤细胞表面有大量EGFR

寻找更多 17-AAG (Epithelial Growth Factor Receptor,表皮生长因子受体)的表达。表皮生长因子肽段中的C环是EGFR特异性结合位点,称为EGF受体干扰序列(EGFRi,Epithelial Growth Factor Receptor interference)。EGFRi能与表皮生长因子特异性结合,但不具有刺激肿瘤细胞生长的作用,特异的肿瘤靶向性和IL-24独特免疫学作用的有机结合为肿瘤的细胞因子治疗提供了新的思路。本论文应用重叠延伸PCR(Overlapping PCR)技术将IL-24与EGFRi连接,并研究了该融合基因在大肠杆菌中的表达和对重组菌的发酵条件进行了优化,同时对纯化的融合蛋白进行抑瘤活性研究。主要研究内容和结果如下： 1.IL-24的克隆及在大肠杆菌中表达 以含有切除了N端信号肽的IL-24成熟肽基因的质粒PMAL-c2x-IL-24为模板,通过PCR技术获得IL-24,构建表达载体PET-22b-IL-24,将其电转化到E. coli BL21(DE3)中,IPTG诱导后表达产物的相对分子质量与预期值(19 kD)一致。利用Ni2+亲合层析柱纯化诱导表达的的IL-24蛋白,MTT检测结果证实其具有体外抑瘤活性,利用Ni2+亲合层析柱纯化诱导表达的的IL-24蛋白,MTT检测结果证实其具有体外抑瘤活性。 2.

Recent advances in molecular research on GC have resulted in the introduction of new diagnostic and therapeutic strategies into clinical settings.The antihuman epidermal growth receptor 2(HER2)antibody trastuzumab has led to an era of personalized therapy in GC.In addition,ramucirumab,a monoclonal antibody targeting

vascular endothelial growth factor receptor(VEGFR)-2,is the first biological treatment that showed survival benefits as a single-agent therapy in patients with advanced GC who progressed after firstline chemotherapy.Using NGS to systematically 哪里 identify gene alterations in GC is a promising approach with remarkable potential for investigating the pathogenesis of GC and identifying novel therapeutic targets,as well as useful biomarkers.In this review,we will summarize the recent advances in the understanding of the molecular pathogenesis of GC,focusing on the potential use of these genetic and epigenetic alterations as diagnostic biomarkers and novel therapeutic targets.
Raf-MEK-ERK信号转导通路是调控细胞生长、分化和增殖最重要的通路之一。在该通路中,Raf的突变会导致肿瘤的发生,尤其是B-Raf,其在肿瘤中的突变率较高,是目前抗肿瘤药物研究的重要靶标之一。综述多种常见的B-Raf激酶抑制剂及其相关耐药机制的研究进展。
Insulin resistance is a hallmark of type 2 diabetes. In an effort to understand and treat this condition,

re searchers have used genetic manipulation of mice to uncover insulin signaling pathways and determine the effects of their perturbation. After decades of research much has been learned, but the pathophysiology 确认细节 o insulin resistance in human diabetes remains contro versial, and treating insulin resistance remains a chal lenge. This review will discuss limitations of mouse models lacking select insulin signaling molecule genes 有 In the most influential mouse models, glucose metabo lism differs from that of humans at the

cellular, organ and whole-organism levels, and these differences limi the relevance and benefit of the mouse models both in terms of mechanistic investigations and therapeutic development. These differences are due partly to im mutable differences in mouse and human biology, and partly to the failure of genetic modifications to produce an accurate model of human diabetes. Several fac tors often limit the mechanistic insights gained from experimental mice to the particular species and strain including: developmental effects, unexpected meta bolic adjustments, genetic background effects, and technical issues. We conclude that the limitations and weaknesses of genetically modified mouse models of insulin resistance underscore the need for redirection of research efforts toward methods that are more directly relevant to human physiology.

p38MAPK通路在力学拉伸15min被激活,NF-κB通路在力学拉伸30min被激活,它们均在力学拉伸90min后失活;PDTC阻断NF-κB通路抑制了力学拉伸过程中BMP-2和BMP-4的表达;Noggin阻断BMPs信号并未抑制力学拉伸过程中p38 MAPK通路的激活,表明力学拉伸过程中p38 MAPK的激活不依赖于BMPs信号;SB203580阻断p38 MAPK通路抑制了力学拉伸过程中NF-κB通路的活化、BMPs和成骨细胞分化相关基因的表达,表明力学拉伸过程中NF-κB通路的活化以及BMPs的表达依赖于p38MAPK通路。 6.力学拉伸应变对Smurf2和CKIP-1的表达没有明显作用,但下调了Smurf1的表达。 7.转染Smurf1 siRNA和MG132预处理MC3T3-E1细胞进一步上调了力学拉伸过程中BMPRⅠ和Smad蛋白的含量、Smad蛋白的激活以及成骨细胞分化相关基因的表达。 Pazopanib临床试验 结论: 1.力学拉伸应变促进了成骨细胞的分化。 2. BMPs/Smad信号通路在力学拉伸过程中被激活,力学信号通过BMPs/Smad通路促进成骨细胞分化标志基因的表达。 3. p38 MAPK通路和NF-κB通路在成骨细胞力学拉伸过程中存在偶联,力学信号通过p38 MAPK/NF-κB通路上调BMPs的表达,并进一步激活BMPs/Smad通路诱导成骨细胞分化标志基因的表达。 4.力学拉伸下调了Smurf1的表达并进一步抑制了Smurf1介导的BMPRⅠ和Smad蛋白的降解,Smurf1表达的下调促进了力学拉伸过程中BMPs/Smad通路的活化。

综上所述,力学信号通过激活p38MAPK/NF-κB通路和下调Smurf1的表达促进BMPs/Smad通路在力学拉伸过程中的活化,并进一步诱导成骨细胞的分化。
[研究目的]细胞自噬是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性的降解途径,近年来研究发现,细胞自噬与凋亡通过内在的分子调控机制相互协调转化,与肿瘤发生密切相关。硒是具有抗癌作用的人体必需微量元素之一,大量证据表明,超营养剂量的硒能够诱导前列腺癌、肝癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、白血病等多种肿瘤细胞的凋亡。前期研究表明,20gM亚硒酸钠诱导人急性早幼粒白血病NB4细胞凋亡过程中,细胞自噬水平逐渐降低。并且,抑制自噬能够增加靶细胞的凋亡易感性。然而,硒在平衡调控细胞凋亡与自噬过程中所发挥的详细抗癌机制尚未完全阐明。本论文重点研究亚硒酸钠调控白血病细胞凋亡与自噬之间的转换机制,为硒应用于肿瘤的治疗和预防提供新思路。

[研究方法]采用人白血病细胞株Jurkat和HL60作为实验材料。通过透射电镜、间接免疫荧光、流式细胞术等方法,从细胞形态学鉴定自噬的发生；应用Western blot和GFP-LC3融合蛋白质粒转染技术,从分子生物学水平检测细胞自噬水平的改变。通过AnnexinV/PI双染流式细胞术与CCK8细胞活力测定方法检测硒对细胞的凋亡诱导和生长抑制作用。通过实时定量自噬芯片技术筛查自噬发生过程中的差异表达基因,并进一步采用Western 没有 blot和RT-PCR方法加以验证。采用瞬时转染方法调整细胞内目的蛋白表达水平,或通过化学药物、功能特异质粒的转染改变目的蛋白活性,研究其在凋亡与自噬过程中发挥的作用；采用免疫共沉淀、GSTpull-down及免疫荧光共定位技术研究蛋白质之间的相互作用。采用染色质免疫沉淀技术分析相关转录因子对特定基因的转录调控。建立肿瘤细胞移植裸鼠模型,通过病理切片的免疫组化、流式细胞分选术和TUNEL等方法检测亚硒酸钠对异种移植瘤的凋亡诱导作用以及对肿瘤细胞侵润的抑制作用。 [研究结果]用硒同时处理三株白血病细胞,NB4、Jurkat和HL60,发现亚硒酸钠激活了Jurkat和HL60细胞自噬的发生,即“自噬性死亡”,与NB4中被下调的细胞自噬截然相反。对不同株系细胞系进行比较及测序,我们推测p53是造成细胞间自噬表现差异的重要因素。

1.实时定量自噬芯片技术鉴定出分子伴侣介导自噬过程中的重要调节因子热休克蛋白90(Hsp90)参与硒诱导的自噬与凋亡的差异调控,RNAi与过表达技术证明Hsp90在硒诱导的NB4细胞凋亡过程中发挥抗凋亡作用。通过免疫共沉淀,GST pull-down以及免疫荧光共定位技术,我们分别在体内外验证了Hsp90与IKK、p38MAPK和死亡相关蛋白激酶(Death associated protein kinase, DAPK)之间存在着直接的相互作用。 2.检测硒处理后的三株细胞中IKK/NFκB通路,p38MAPK通路,DAPK通路等的激活情况发现：NB4细胞中Hsp90蛋白的表达下调特异地引起了IKK激酶的蛋白酶体途径降解与p38MAPK激酶的自磷酸化活化,引起细胞自噬下调；Jurkat细胞中IKK/NFκB通路与MKK3/6/p38MAPK通路同时被激活,细胞自噬上升；HL60细胞中硒主要通过Hsp90与PP2A分别稳定并参与DAPK的去磷酸化活化,介导亚硒酸钠引起细胞凋亡和自噬性死亡。我们分别对不同株系细胞中Hsp90介导的自噬凋亡调控的通路进行详细研究。 Alisertib 3.对自噬相关基因的启动子及相关区域序列进行比对,并通过染色质免疫沉淀实验证明becnl基因第一个内含子中存在转录因子NFκB的潜在结合位点。亚硒酸钠通过Hsp90对下游IKK/NFκB通路的负调控,引起NB4细胞中自噬相关becnl基因转录水平的降低。Western blot方法检测Beclinl核心复合物成员Ambra-1、 Vps34、UVRAG的表达同样在硒处理后降低,表明Hsp90/NFkB/Beclin1在硒诱导的NB4细胞中,积极调控细胞自噬与细胞凋亡之间的平衡。 4. p38MAPK信号通路促进亚硒酸钠诱导的凋亡,并对不同株系细胞自噬的发生起着不同的调控作用。NB4细胞中,UPR通路PERK/eIF2a/ATF4的激活,通过抑制Hsp90的表达释放p38MAPK激酶活性,将外界应激信号传递至下游转录因子ATF4; Jurkat细胞中,被MKK3/6激酶级联活化的p38MAPK,通过eIF4E引起ATF4的表达上调。ATF4平衡自噬相关mapllc3b基因与凋亡相关基因chop的转录,最终调控平衡细胞凋亡与自噬进程。 5.

4%,NP方案有效率为54.2%,(P<0.05)。结论:赫赛汀联合长春瑞滨治疗晚期乳腺癌是有效且安全的治疗方案,不良反应可耐受,可作为晚期乳腺癌一线方案应用。
表皮生长因子受体(EGFR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)已被列为一个与临床相关的、独特的肺癌亚群。虽然EGFR突变的肿瘤患者增加了对酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的敏感性,但其耐药仍然是一个主要的临床问题。针对原发和获得性耐药不同的分子机制,包括应用第2代或第3代TKI,以及与EGFR下游信号通路抑制剂的组合用药等多项临床试验已经在启动和计划中。本文综述了近年来EGFR突变的NSCLC耐药机制的新进展和克服耐药的新策略。
目的探讨磷脂酰肌醇3磷酸激酶(PI3K)雷/帕霉素靶蛋白(mTOR)激酶双抑制剂GDC-0941抗肝癌活性及其作用机制。方法分别采用MTT法和流式细胞术测定GDC-0941对HepG2肝癌细胞生长和细胞周期的影响;通过免疫印迹法检测信号通路蛋白、细胞周期抑制因子和凋亡相关蛋白的表达。结果

查找更多 GDC-0941对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且随浓度增加作用效果增强;其生长抑制主要是阻滞HepG2细胞于G0/G1期。GDC-0941下调蛋白激酶B(Akt)和核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)的磷酸化水平,上调细胞周期抑制因子p21、p27和促凋亡蛋白p53、bax、bad的表达,同时也下调了抗凋亡蛋白bc l-2的表达。结论 PI3K/mTOR双抑制剂GDC-0941通过上调周期蛋白抑制因子和促凋亡蛋白,同时下调抗凋亡蛋白,从而抑制HepG2细胞生长和诱导其凋亡。
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磷酸肌醇3激酶(PI3K)通路是一个关键的信号转导系统,它可将癌基因和多种受体与许多细胞功能联系在一起,还是肿瘤中最常被激活的通路。靶向PI3K同工酶和通路中包括AKT和mTOR在内的其他主要节点的抑制剂已进入临床试验阶段,但存在一定问题。本文重点阐述人们在理解PI3K通路方面取得的进展,并讨论研发靶向这条通路的抗肿瘤药物的机遇与面临的挑战。
人类表皮生长因子受体2(human mTOR inhibitor epidermal growth factor receptor 2,Her-2)在20%～25%的侵袭性乳腺癌中有过度表达,且其过度表达与乳腺癌的侵袭性和生存率相关。曲妥珠单抗(商品名:赫赛汀,herceptin)是一种已广泛应用于临床治疗的抗Her-2的单克隆抗体,其与化疗药物联用可以明显延长患者的无病生存期,但Her-2表达阳性的乳腺癌细胞易对曲妥珠单抗产生耐药性。本文系统总结了曲妥珠单抗的耐药机制及相关最新研究进展,包括PI3K/AKT信号通路过度激活、表皮生长因子受体家族(epidermal growth factor

receptor family,EGFR family)及其配体的异常表达、Her-2或曲妥珠单抗封闭、胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)旁路活化PI3K/AKT通路、Darpp-32和t-Darpp过度表达、肿瘤细胞自体吞噬、热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)过度表达等。
以PI3K/Akt信号通路为靶标的小分子抑制剂的研究已成为抗肿瘤新药研究的热点。以GDC-0941为先导物,合成一系列含三氮唑基团的新型PI3K抗肿瘤抑制剂,并进行了体外抗肿瘤活性评价,期望从中筛选出活性优于GDC-0941的新型抗肿瘤候选药物。
综述细胞自噬及其与肿瘤的关系以及相关抗肿瘤治疗靶点和药物研究方面的最新进展。细胞自噬是一种广泛存在于真核生物中的细胞程序性死亡机制,其可通过降解受损细胞器和大分子来维持细胞内稳态,并实现细胞内成分的循环利用。近年来发现细胞自噬在肿瘤发生发展过程中起着重要作用,从而成为肿瘤治疗的研究热点。
噻吩并嘧啶类化合物在医药方面受到广泛关注。按照噻吩并[3,2-d]嘧啶、噻吩并[2,3-d]嘧啶、噻吩并[3,4-d]嘧啶化合物等进行分类,简要介绍了在抗肿瘤活性方面和合成方法上的研究进展。
曲妥珠单抗(trastuzumab)在治疗ErbB2高表达的乳腺癌病人中存在耐药现象,对其机制进行研究发现,主要有曲妥珠单抗同ErbB2受体的有效结合受阻、EGFR家族受体和IGF-IR等共表达以及PI3K-AKT信号通路的异常活化等方面。针对这些机制研制了一些可能提高曲妥珠单抗疗效的新型药物。
Translational

research,in general,means to take knowledge from one area into a second.Traditional thought to represent transfer of knowledge from basic research into the clinic,translational research today covers Ibrutinib分子量 a much broader term.Thus,most investigators will agree translational research covers a two-way process that also includes taking lessons from the clinic back to the laboratory,by which biological observations in vivo would create novel hypotheses to be further explored in laboratory experiments.
Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) is over-expressed in 20%-25% of invasive breast cancer and is associated with an aggressive tumor phenotype and reduced survival rate. As a clinically widely applied HER2-targeted monoclonal antibody, trastuzumab (Herceptin), combined with chemotherapy significantly increases the no tumor survival time of the patient.

79×102Da,旋光度为[α]D20-48.62°(c0.1, H2O),总糖含量为57.18%,酸性多糖含量为12.39%,SO42-含量为29.75%。HS-4的理化性质为：分子量为4.23×105Da,总糖含量为38.12%,酸性多糖含量为16.52%,硫酸根含量为32.64%,单糖组分主要以岩藻糖为主,还含有小部分半乳糖,不含蛋白质和核酸。 2、HS-3促进神经干细胞球迁移作用研究。 从胎龄为E14.5d胚胎大脑皮层中提取的神经干细胞,在含有外源性生长因子bFGF和EGF存在的条件下细胞会分裂增殖,聚集成团,即神经细胞球。经鉴定提取的神经干细胞BrdU染色呈阳性,Nestin荧光染色呈阳性,经含.2%胎牛血清诱导后可以分化为星形胶质细胞(GFAP阳性)和神经元细胞(TUJ1阳性)。HS-3能诱导神经球在末铺P-L-L的培养板中粘附和迁移,迁移距离呈现浓度依赖性,在80μg/mL

HS-3作用72h后,神经球的迁移距离为438μm。HS-3还能有效维持神经球在撤离生长因子后细胞的存活。在HS-3的刺激下，神经干细胞能分化为神经元和星形胶质细胞,浓度增加,分化为神经元的比例增大；且更有意义的是分化的神经元细胞能沿着神经球轴线向外迁移,而分化的星形胶质细胞滞留在神经球中,。PD98059和Noggin对HS-3介导的细胞迁移没有影响,而LY294002能有效抑制神经球的迁移(P
糖皮质激素是治疗炎症及自身免疫性疾病的常见药物。内源性及外源性合成的糖皮质激素均能有效抑制炎症反应,纠正炎症反应的失衡,避免过度或持续炎症所引起的组织损伤。正由于疗效显著,糖皮质激素数十年来一直应用于临床一线,广泛用于败血症性休克、哮喘、炎性肠病、类风湿性关节炎和多发性硬化症等炎症相关性疾病的治疗。然而,由于长期使用所带来的副作用及日益增加的耐药性,糖皮质激素的临床效能正面临前所未有的挑战。因而,深入研究和进一步阐明糖皮质激素的作用机理是一项重要的科学问题。 许多 http://www.selleckchem.cn/products/kpt-330.html 长期以来广为人们认可的糖皮质激素作用机制是基因组学说,即：通过与糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)结合形成复合物,转位进入细胞核后,与靶基因启动子区域糖皮质激素反应元件(Glucocorticoid responsive element,GRE)结合或者与转录因子相互作用,从而直接或间接调控靶基因的转录。以往的研究主要聚焦在信号分子及炎症介质等蛋白编码基因上,而对于与基因表达异常关系密切的非编码序列如microRNAs

(miRNAs)的作用则知之甚少。 近年来,miRNA已成为基因表达调控的“明星”分子。它们由细胞内核基因组转录为RNA,经过Drosha和Dicer酶剪切加工后,成为成熟的miRNA。成熟miRNA的种子序列可与靶基因mRNA的3’端非编码区互补结合,导致mRNA降解或者蛋白翻译抑制。越来越多的证据表明：miRNA是机体内各种生理及病理活动的关键调节因子,并参与固有免疫应答及适应性免疫应答。Toll样受体(Toll

mTOR抑制剂 like receptor, TLR)是固有免疫细胞重要的识别受体,可结合病原体的特定结构成分,从而激活免疫细胞。其中,TLR4信号通路的活化,诱导大量不同的miRNA,例如miR-146a,miR-147,let-7e,let-7i和miR-155表达上调等；而这些miRNA又可靶向抑制某些信号传导蛋白的表达,反馈调控TLR4信号通路的强度,从而促进或者抑制炎症应答。这些研究结果提示：miRNA在炎症应答中扮演着重要角色。那么,糖皮质激素是否调控miRNA的表达?miRNA是否参与糖皮质激素的抑炎作用?作用机制又如何?目前,均未见系统的研究报道。 有鉴于此,我们以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的巨噬细胞炎症反应模型为研究对象,利用基因芯片等技术系统分析了糖皮质激素地塞米松对miRNA表达谱的改变情况,并对糖皮质激素调控miRNA表达的机制、miRNA参与糖皮质激素抑炎的作用及分子机制展开研究,以期阐明糖皮质激素抗炎的非编码RNA机制,为后续的药物开发提供理论和实验基础。 第一部分糖皮质激素影响microRNAs在炎症反应中的表达 巨噬细胞是天然免疫系统的重要组成部分,在炎症反应中起十分关键的作用。巨噬细胞等炎症细胞渗出是炎症反应最主要的特征。渗出的巨噬细胞是一柄双刃剑,一方面,巨噬细胞被激活后,释放炎性介质,激活免疫系统,有效地杀伤病原体,构成炎症反应的防御环节；另一方面,巨噬细胞过度激活则释放过量炎性介质、蛋白水解酶及氧自由基等加重组织损伤并延长炎症过程。Raw264.7细胞是小鼠来源的单核巨噬细胞系,在受到LPS刺激时,可模拟机体炎症细胞的反应状态,已成为一种常见的炎症反应细胞模型被广泛应用于炎症领域的相关研究。 据此,我们首先以LPS刺激Raw264.