肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing-ligand, TRAIL）通过ERS对活化的HSC凋亡的调控及部分机制的研究 AEB071 花费 前期研究结果发现：在肝纤维化逆转恢复期，枯否细胞可以通过分泌TRAIL诱导活化HSC凋亡。为了进一步探讨TRAIL与ERS诱导的活化HSC凋亡的相互关联。体外给予PDGF刺激活化的HSC，再分别给予TRAIL与ERS诱导剂衣霉素（Tunicamycin, TN）处理，观察各组凋亡基因Bax mRNA、Caspase-3、内质网应激相关蛋白Caspase-12，CHOP，GRP78的表达。结果发现，与PDGF刺激活化的HSC的对照组相比较，TRAIL组与TN组Bax mRNA表达明显上调、Caspase-3的活化增加，内质网应激相关蛋白Caspase-12，CHOP，GRP78的表达均明显上调。提示ERS可能参与TRAIL调控活化的HSC凋亡。 以上结果提示，ERS参与活化HSC凋亡的调控，其机制可能与其释放细胞内钙离子，导致细胞内钙离子升高，从而诱导Calpain/Caspase和JNK/p38MAPK激活有关。TRAIL可能通过诱导PDGF活化的HSC中内质网应激相关蛋白CHOP，GRP78，Caspase-12的表达，从而促进HSC的凋亡。
背景：结直肠癌是人体消化道常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率逐年上升。结直肠癌在临床治疗和基础研究方面已经取得了很大的进展,但其具体发病机制尚未十分清楚,环境、遗传和手术等多方面因素都能够导致结直肠癌的形成。目前结直肠癌的治疗有手术切除后复发率高和早期诊断困难等问题,又介于结直肠癌的发病具有长期性和复杂性,近年来对结直肠癌的化学预防已经成为医学研究的热点。Nrf2/ARE信号通路在机体应对氧化应激和结直肠癌等肿瘤预防中具有重要的功能,该通路能够上调相关代谢酶和抗氧化蛋白等的表达,从而清除致癌物及其产生的ROS,对机体产生保护作用。木犀草素是一种天然黄酮类化合物,广泛存在等多种药用植物和果实蔬菜中,具有抗氧化、抗炎、抗菌、神经保护和抗肿瘤等多种药理作用,这使得木犀草素在结直肠癌的治疗和预防方面具有一定的潜力。

什么 目的：本实验旨在探讨木犀草素是否可以通过激活Nrf2/ARE信号通路对结直肠癌起到化学预防作用；体外实验研究了木犀草素对Caco-2细胞中Nrf2的激活和细胞保护作用,以及木犀草素激活Nrf2信号通路的机制；体内实验研究木犀草素对结直肠癌小鼠的化学预防作用和结肠组织中Nrf2/ARE信号通路的影响。 方法：本实验运用了双荧光素酶报告基因系统、流式细胞术、细胞免疫荧光、Western blot和Q-PCR等实验技术在体外研究了木犀草素对Caco-2细胞中Nrf2转录因子的激活作用、入核情况以及相关下游代谢酶表达的影响,研究了木犀草素对H202造成的Caco-2细胞活力下降、ROS水平升高和凋亡上调的影响,研究了p38MAPK信号通路对木犀草素促进Caco-2细胞Nrf2激活和细胞保护作用的影响。本实验建立了AOM/DSS诱导的结直肠癌模型,研究了木犀草素对结直肠癌的化学预防作用和对结直肠癌中Nrf2表达的影响。

结果：木犀草素能够上调ARE荧光素酶的表达；木犀草素可以上调Caco-2细胞中GR、TR、HO-1、γ-GCS和NQO1的mRNA表达,上调Nrf2、TR、γ-GCSc和γ-GCSm的蛋白表达；木犀草素能够增加转录因子Nrf2的入核,表明木犀草素能够激活Nrf2/ARE信号通路。木犀草素可以提升H202损伤的Caco-2细胞活力；木犀草素能够下调Caco-2细胞中氧化应激所产生的ROS水平；木犀草素能够减少H202诱导的细胞凋亡,表明木犀草素能够对氧化应激诱导的细胞损伤起到保护作用。p38MAPK的抑制剂SB202]90能够减弱Caco-2细胞中木犀草素诱导的Nrf-2、TR和γ-GCSc的上调作用；p38MAPK的抑制剂SB202190的抑制剂SB202190能够减弱木犀草素对细胞活力、ROS水平和细胞凋亡的影响作用,表明p38MAPK在木犀草素对Nrf2的激活过程中起到重要作用。在动物实验中,木犀草素能够减少结直肠癌的发生,促进Nrf2、TR和HO-1蛋白的表达,增加GR、TR、HO-1、NQO1和γ-GCS的mRNA的表达和减少TNF-α和IL-1β的mRNA表达,表明木犀草素在动物体内能够激活Nrf2信号通路和减少炎症因子的分泌。

有 结论：木犀草素能够通过激活Nrf2/ARE信号通路调控相关II相代谢酶的表达和结直肠癌起到化学预防作用。
目的通过正交试验法验证胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血损伤的神经保护作用并优化其治疗的最佳剂量及时间窗。 方法应用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠前脑缺血模型,按照正交试验设计分组,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗。甲苯胺蓝染色法观察神经细胞结构；流式细胞术观察细胞早期凋亡率；免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法(Western blot)定性、定量检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达；反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测NSE mRNA转录水平。 结果胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的最佳时间和剂量：根据甲苯胺蓝染色显示为脑缺血2.0h腹腔注射胡黄连苷Ⅱ10mg/kg；流式细胞术检测显示为脑缺血1.5h腹腔注射胡黄连苷Ⅱ10mg/kg；免疫组织化学法分析为脑缺血2.0h腹腔注射10mg/kg； Western blot分析为脑缺血2.Oh给予10mg/kg；RT-PCR显示为脑缺血1.5h给予10mg/kg. 结论根据用药剂量最小化和治疗时间窗最大化的原则综合评价,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的最佳治疗时间窗为脑缺血1.5-2.

0统计软件进行分析，结果表示为：均数士标准差((?)±S)，方差齐时，两组比较采用LSD，如多组与对照组比较使用Dunnett检验，当方差不齐时，采用Welch稳健估计，再采用T_2方法两两比较。P＜0.05表示有统计学意义。 结果 1．经不同浓度含GLP药液血清作用的单独培养的OB各指标变化如下： (1)细胞增殖率：各组细胞增殖率的总体比较具有显著性差异(F=24.211P＜0.001)。HD组、MD组、LD组与空白对照组细胞增殖率分别是(152.06±14.35)、(143.42±8.46)、(118.96±15.68)和(100.32±14.46)：高剂量组、中剂量组与空白对照组比较，具有显著性差异(P＜0.05)；高、中剂量组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。结果提示GLP可促进OB的增殖。 AG14699 (2)矿化结节数：各组矿化结节数的总体比较具有显著性差异(F=315.247P＜0.001)。HD组、MD组、LD组与空白对照组的矿化结节的数量(个)分别是(201.60±11.25)、(181.10±6.76)、(118.02±8.97)和(86.97±6.17)LD组、HD组、MD组与空白对照组比较升高具有统计学意义(P＜0.01)；高、中剂量组之间差异无显著性(P＞0.05)。

(3)real time PCR测定OPG和RANKL的基因表达：各组OPG mRNA表达的总体比较具有显著性差异(F=100.971 P＜0.001)，L组、M组、H组的OPG mRNA呈现高表达水平，分别为(1.8±0.19)、(3.61±0.5)、(4.14±0.51)，与空白对照组(1.01±0.14)比较，M组和H组结果有显著性差异(P＜0.01)；各组RANKLmRNA表达的总体比较具有显著性差异(F=161.360 P＜0.001)，L组、M组、H组RANKL mRNA呈现低表达水平，分别是(0.89±0.05)、(0.48±0.06)、(0.23±0.03)，其中M组、H组与空白对照组(1±0.09)比较，结果有显著差异(P＜0.01)。各组OPG／RANKL比例的总体比较具有显著性差异(F=26.282P＜0.001)，与空白对照组比较，L组、M组、H组的OPG／RANKL比值差异均有统计学意义(P＜0.001)。

KRX-0401订单 (4)对p38和磷酸化p38的检测：Western-blot检测发现，各组p38总蛋白表达的比较无显著性差异(F=0.117 P＞0.05)，而各组磷酸化p38蛋白表达的比较有显著性差异(F=63.715 P＜0.001)，且L组、M组、H组磷酸化p38与空白组比较明显增加。 2．经SB203580干预作用后OB各指标变化如下： (1)细胞增殖率：各组细胞增殖率的总体比较具有显著性差异(F=7.971P＜0.010)。SB组、SB+GLP组与空白组对照比较，增值率分别是(99.12±15.16)、(100.8±16.6)、(100±14)，三者结果无显著性差异(P＞0.05)。而SB+GLP组与HD组比较，HD组细胞增殖率为(136.78±16.49)，两者有显著性差异(P＜0.05)。 点击此处 (2)矿化结节数目：各组矿化结节数的总体比较具有显著性差异(F=79.638 P＜0.001)。SB组、SB+GLP组与空白组对照比较，矿化结节数为(70.67±6.1)、(78±14.5)、(78.33±9.5)，结果无显著性差异(P＞0.05)。而SB+GLP组与HD组比较，HD组矿化结节数为(168±17.1)，两者有显著性差异(P＜0.01)。 (3)real time PCR测定OB的OPG mRNA表达：各组OPG mRNA的总体比较具有显著性差异(F=112.374 P＜0.001)。SB组、SB+GLP组与空白组对照比较，OPGmRNA为(0.96±0.11)、(1.07±0.08)、(1±0.11)，结果无显著性差异(P＞0.05)。而SB+GLP组与HD组比较，HD组OPGmRNA为(2.93±0.42)，两者有显著性差异(P＜0.01)。

(4)real time PCR测定OB的RANKLmRNA表达：各组RANKL mRNA的总体比较具有显著性差异(F=38.333 P＜0.001)。SB组、SB+GLP组与空白组对照比较，RANKLmRNA为(0.93±0.11)、(1.03±0.09)、(1±0.11)，结果无显著性差异(P＞0.05)。而SB+GLP组与HD组比较，HD组RANKLmRNA为(0.51±0.09)，两者有显著性差异(P＜0.01)。OPG／RANKL比例各组总体比较有显著性差异(F=56.028 P＜0.001)，B组、SB+GLP组与空白组RANKLmRNA对照比较，结果无显著性差异(P=0.999＞0.05、P=1.000＞0.05)，而SB+GLP组与HD组比较，HD组OPG／RANKL比例较高，两组结果有显著性差异(P=0.004＜0.01)。 (5)对p38和磷酸化p38的影响：各组p38总蛋白的总体比较无显著性差异(F=0.360 P＞0.050)。而各组磷酸化p38的总体比较具有显著性差异(F=2405.374 P＜0.001)。SB组、SB+GLP组磷酸化p38含量明显减少，与HD组比较两者有显著性差异(P＜0.

SW620细胞转染caspase-8后,在100mg/ml TRAIL作用下,细胞活力降低了33%。结论:1.TRAIL能抑制三种大肠癌细胞的增殖,其抑制效应呈浓度依赖关系。2.三种细胞对TRAIL有不同程度的敏感性。SW620对TRAIL最不敏感;HCT116对TRAIL最敏感;SW480为中度敏感。3.SW620对TRAIL的耐受性可能与caspase-8的表达水平低有关。
乳腺癌是女性最常见的癌症之一。目前,在乳腺癌的治疗方案中,药物疗法(化疗)仍是最主要的治疗手段。而由于常规化疗方法的局限性,往往无法达不到理想的治疗目的。通过抑制肿瘤血管新生来治疗肿瘤的方案,由于具有可特异性作用于肿瘤组织,对正常组织损伤较小的特点,已成为当今抗肿瘤药物研究领域的热点之一。目的:研究四氢吲哚酮类Hsp90抑制剂在体内对乳腺癌的抑制作用,并探讨其在体内发挥作用的机制,初步评价其治疗效果。方法:1、通过Western

Blot的方法检测缺氧时在AT533体外对MDA-MB-231和MCF-7细胞株作用;2、通过构建BABL/c裸鼠的MDA-MB-231细胞的乳腺癌移植瘤模型,分别研究AT533和BJ-B11对乳腺癌的抑制作用;3、通过HE染色对AT533和BJ-B11治疗后的裸鼠肿瘤进行组织学观察,研究Hsp90抑制剂对乳腺癌组织学的改变;4、通过免疫组化和Western Blot的方法检测AT533和BJ-B11治疗后的裸鼠肿瘤组织中HIF-1α/VEGF信号通路的改变;5、通过免疫组化方法检测AT533对肿瘤细胞凋亡的作用。结果:1、AT533在体外可使MDA-MB-231的Hsp90发生断裂,使MCF-7的Hsp90发生下调。MDA-MB-231和MCF-7的HIF-1α/VEGF信号通路都受到抑制,细胞内蛋白泛素化降解增加。2、AT533和BJ-B11在体内对乳腺癌都有抑制作用。3、AT533和BJ-B11能明显抑制乳腺癌的血管新生,造成组织缺血。4、AT533和BJ-B11在体内也能使HIF-1α/VEGF信号通路受到抑制。5、AT533可以在体内诱导肿瘤细胞发生凋亡。结论:AT533可以在体外抑制MDA-MB-231和MCF-7细胞因缺氧引起的HIF-1α/VEGF信号通路的激活,同时促进细胞蛋白内泛素化降解。它在体内具有良好的抗乳腺癌活性,其作用机制可能是通过抑制Hsp90活性使HIF-1α/VEGF信号通路受到抑制,从而抑制肿瘤内的血管新生,同时诱导肿瘤细胞发生凋亡。BJ-B11作为AT533的前药,在体内具有和AT533类似的作用。
Hsp90是一类分子伴侣,可以协助其客户蛋白在应激状态下保持正常折叠,许多癌基因蛋白是其客户蛋白。通过抑制Hsp90的分子伴侣功能,可以促使癌基因蛋白泛素化并降解,因此,Hsp90是癌症治疗的良好靶点。本文立足于课题组的原有研究基础,并借鉴相关文献报导,设计了一类以三氮唑为关键母核部分的Hsp90抑制剂分子,并建立了一条快速、高效、可靠的合成路线。在成功完成该系列分子的合成后,对其进行药理活性的研究并发现了部分活性较好的分子,本文对其结构特点进行了初步分析总结,并对此类化合物的构效关系进行了探索。具体内容如下：1.借鉴本课题组的LD-053分子结构,本文设计了一系列类似物分子。2.对本组早先的路线进行全面的改造与优化,设计了一条快速可靠并具有汇聚性的合成路线：以2,4-二羟基苯乙酮为起始原料经6步反应完成A片段前体,再经Sonogashira偶联引入B片段的前体,之后通过分子内3+2环加成反应完成三氮唑母核,并由亲和取代反应完成母核部分与C片段的连接。在工作中,本文对路线进行了进一步的优化。3.对该系列化合物进行了相关药理活性的测定,并筛选出7个活性较好的分子,其在本文选用的肿瘤细胞模型中,抑制活性的IC50值均在2-10μM之间。且所有化合物在荧光偏振法检测Hsp90结合力的实验中,IC5均处于10-8M水平。4.以药理活性数据为依据,对本系列化合物的构效关系进行了初步探讨。本文发现苯氧基上的取代基电性对系列化合物的活性没有明显影响,但活性较好的分子均含有一个杂原子取代的苯氧基。
目的:研究体外不同浓度莪术醇(curcumol)抑制结直肠癌LOVO细胞增殖及其对VEGF(vascular

Navitoclax数据表 Pfizer Licensed合成 Library supplier endothelial 或者 growth factor,VEGF)与IGF-1R(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)表达的影响。探讨莪术醇抑制结直肠癌细胞LOVO细胞的增殖和促进凋亡作用及其可能机制,为今后确切揭示莪术醇的作用靶点,提高莪术醇在临床应用中的科学性和有效性提供依据。方法:莪术醇先溶解于无水乙醇,配成母浓度4μmol/mL。分别配制0.05、0.1、0.2、0.4μmol/mL不同浓度莪术醇且含1%无水乙醇的培养基,配制含1%无水乙醇培养基为阴性对照组,以5-FU(0.08μmol/mL)为阳性药物对照组。MTT法检测莪术醇作用24、48、72、96、120

h后LOVO细胞生长增殖情况;Hochest 33258染色荧光显微镜观察莪术醇作用48 h后LOVO细胞凋亡的变化;流式细胞术检测莪术醇作用LOVO细胞48 h后细胞周期阻滞情况和凋亡率变化;RT-PCR检测经莪术醇处理48h后LOVO细胞VEGF mRNA与IGF-1R mRNA的表达;Western Blot检测经莪术醇处理48h后LOVO细胞VEGF与IGF-1R蛋白表达。结果:①莪术醇有抑制结直肠癌lovo细胞增殖作用,且随浓度逐渐增加、作用时间逐渐延长,其抑制细胞增殖的作用也逐渐增强,药物作用24、48h后,0.2μmol/ml以上药物处理组与阴性对照组相比差异性显著(p<0.05,p<0.01);药物作用120h后,与阴性对照组相比,均有差异(p
目的： 1.研究17-demethoxy-reblastatin(17-DR)对人三阴性乳腺癌(Triple-negative breastcancer, TNBC)细胞株MDA-MB-231增殖的影响； 2.研究17-DR对MDA-MB-231细胞凋亡的影响； 3.探讨17-DR对MDA-MB-231细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的相关分子机制； 4.研究17-DR对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的影响，并探讨其作用机制； 5.研究17-DR联合顺铂(cisplatin, DDP)对人TNBC细胞株MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。 方法： 1. MTT法检测不同浓度（0、12.5、25、50、100、200μmol·L-1）17-DR对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用；克隆形成实验检测不同浓度17-DR对乳腺癌细胞集落克隆形成的影响。 2.溴化丙啶（Propidium Iodide, PI）单染结合流式细胞术检测不同浓度17-DR（0、10、50、100μmol·L-1）对乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响。 3.

MTT法结果显示，天麻素给药72h后，与谷氨酸模型组比较，各天麻素组对损伤的PC12细胞均呈现一定的保护作用；细胞形态学观察结果显示，天麻素组的细胞损伤程度减轻。

3. AO/EB染色结果显示正常组细胞形态规则，大部分细胞经AO染色成均匀一致的绿色，模型组细胞呈现橘红色荧光，天麻素给药组的细胞与模型组相比被EB染成橘红色的细胞数量较少。 4. Hoechst33258荧光染色结果显示谷氨酸模型组细胞，多数细胞核呈现蓝白色、碎块状致密浓染，呈现典型的凋亡细胞核特征；而天麻素处理后呈现凋亡特征的细胞数量减少。 5.流式细胞仪检测结果表明，天麻素给药组可明显抑制谷氨酸引起的ROS的累积；Annexin V/PI双染结果表明天麻素在一定程度上能够降低谷氨酸诱导的PC12细胞的凋亡率；罗丹明123染色结果显示天麻素给药组线粒体膜电位升高，线粒体损伤程度减轻。 6. Western blotting法检测结果表明，天麻素给药组与模型组相比能够显著下调p38的磷酸化水平，降低ERK1/2的磷酸化表达，抑制谷氨酸诱导的活性caspase-3的表达。 结论： 在一定的浓度范围内，天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有明显的保护作用，其保护作用可能与减少细胞内活性氧的生成，阻止氧化应激的发生，保护细胞膜的正常结构及稳定线粒体膜电位有关。其保护机制可能是通过下调p38磷酸化水平，降低ERK1/2的磷酸化状态及抑制活性caspase-3蛋白表达，从而阻止谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡。
目的： selleck化学药品液面控制 观察氯化镧（lanthanum chloride）对RANKL（Receptor activator of NF-κBligand）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的作用。观察破骨细胞基因（c-fos、trap、cathepsin K、MMP-9）及NF-κB通路基因（traf6、c-src、RANK、Fra1）mRNA的表达，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞生成数量，噻唑蓝（MTT）观察破骨细胞活性，流式细胞术检测破骨细胞凋亡情况。初步分析稀土镧元素与RANKL诱导的破骨细胞之间相互关系。 方法： 实验细胞株采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7，购自中国科学院细胞库(ATCC:TIB-71)。氯化镧(LaCl3·7H20，纯度99.9%)购于美国Simga公司。重组鼠核因子KB受体活化素的配体(Receptor

Activator of Nuclear Factor-κB ligand，RANKL)购自美国R&D公司。按照实验设计以添加氯化镧浓度不同分为五组：①空白组（RAW264.7）②对照组（RAW264.7+50ng/ml RANKL）③实验组低浓度镧（RAW264.7+50ng/ml RANKL+2.5μmol/L LaCl3）④实验组中浓度镧（RAW264.7+50ng/ml RANKL+20μmol/L LaCl3）⑤实验组高浓度镧（RAW264.7+50ng/ml 所以 RANKL+100μmol/L LaCl3）。采用MTT、流式细胞术观察镧对RANKL诱导的RAW264.7活性，RT-PCR检测破骨细胞基因表达，TRAP染色分析破骨细胞生成数量。 结果： MTT检测24、48及72小时，不同浓度镧对RANKL诱导的RAW264.7无明显毒性作用，OD值差异无统计学意义（P>0.05）。 TRAP染色检测不同浓度镧对RANKL诱导RAW264.7生成破骨细胞数量。空白组无成熟破骨细胞；实验组(137.60±4.54)/cm2、(102.70±3.23)/cm2、(72.20±5.28)/cm2相较于对照组（163.00±5.82）/cm2，破骨细胞数量减少（P0.05）。 流式细胞术检测镧对破骨细胞凋亡作用，各组别之间差异无统计学意义（P>0.05）。

RT-PCR检测破骨细胞基因及通路基因c-fos、trap、RANK、traf6、c-src、Fra1、cathepsin Purmorphamine浓度 K及MMP-9的表达。对照组较实验组表达增多，差异明显（P0.05）。 结论： 不同浓度（2.5、20、100μmol/L）氯化镧对RANKL诱导的RAW264.7分化、增殖、凋亡无明显毒性作用。 不同浓度（2.5、20、100μmol/L）氯化镧减少RANKL诱导的RAW264.7向成熟破骨细胞分化。但各浓度组之间抑制作用无明显差异。 RANKL可单独诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化成熟。
猪链球菌2型(Strreptococcus suis serotype2, SS2)是一种人畜共患传染病病原,对于养殖业的健康发展以及人类的生命健康具有严重威胁。近年来,猪链球菌2型的危害引起国内外的广泛关注,其分子致病机理和免疫方面的研究是目前研究的热点。尽管很多学者从单个或多个毒力因子的角度去阐述猪链球菌2型的分子致病机理,取得了一些进展,但仍无法很好的解释其如何突破机体的天然免疫系统以及血脑屏障,从而引起脑膜炎等病症。 病原菌致病通常不是由单一毒力因子引起,而是由多种毒力因子的共同作用而造成的,毒力因子在调控系统的控制下,形成一个精致的调控网络。双组份调控系统(Two-Component Regulatory System, TCS)是细菌中广泛存在的一种重要的信号转导机制,能将外界环境中感应到的信息传给内部系统。研究证实,TCS参与调控细菌毒力因子表达、细菌致病性和生长代谢等,目前在SS2中发现有至少15对双组分调控系统。中性粒细胞(Polymorphonuclear leukocytes, PMNs or Neutrophils)存在血液中,是体内数量最多的白细胞,类似巨噬细胞,具有吞菌活性,在急性炎症中起着十分重要的作用,是机体抵抗病原菌的第一道防线。 病原与宿主的相互作用在其致病过程中扮演重要作用。尽管多种SS2毒力因子已被证实在致病中具有重要作用,但细菌与天然免疫系统作用后基因表达变化的全面分析报道却很少。而且,对猪链球菌2型引起急性炎症或逃避宿主天然免疫的分子机制了解非常有限。本文选取SS2野生株SC19和猪中性粒细胞(PMNs)为研究对象,将SS2与PMNs相互作用后,通过基因表达谱芯片、生物信息学分析、荧光定量PCR等方法获得差异表达基因并分类；以CD1小鼠为模型评价双组份调控系统基因1660HK/RR,1910HK/RR和1094HK/RR基因缺失突变株△1660HK/RR,△1910HK/RR、△1094HK/RR的毒力以及引起的炎症反应,为阐明双组份调控系统引起急性炎症反应或免疫逃避的分子机制,深入研究S. suis2分子致病机理奠定理论基础,也为S. suis2新型疫苗和药物靶标分子设计提供新的思路。具体研究内容如下： 1.猪中性粒细胞的分离和培养 本研究采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PMNs,经Giemsa染色后检测PMNs的纯度为98%,采用苔盼蓝(0.01%浓度)排除法检测PMNs活力为96%,符合实验要求。 2.猪链球菌2型感染猪中性粒细胞后转录表达谱结果与分析 将SS2与PMNs互作,并在0.

05)。同时,在DN-Smad2质粒转染后,无外源性TGF-β1刺激的MC中基础状态和加TGF-β1诱导的P-ERK、P-JNK表达均下调(P0.05)。 小结Smad信号通路本身参与了TGF-β1诱导的Ⅳ型胶原表达过程的调控。同时,Smad2表达下调也能影响P-ERK、P-JNK的表达,推测Smad2还可能通过影响MAPK通路间接影响Ⅳ型胶原的表达。 第三部分饰胶蛋白聚糖对TGF-β1诱导的Ⅳ型胶原表达及MAPK和Smad2通路的影响 目的初步探讨饰胶蛋白聚糖(DCN)在Ⅳ型胶原表达过程中的作用及其对TGF-β1活化的MAPKs和Smad2信号通路的影响。 方法培养MC,瞬时转染pcDNA3.1-DCN至MC内或用RNA干扰技术干扰MC内DCN基因表达,再用或不用外源性TGF-β1刺激,观察MC内Ⅳ型胶原表达以及MAPKs和Smad2通路的变化情况。 结果DCN转染后,与正常对照相比,MC内DCN蛋白和mRNA水平升高(P<0.05)；同时,MC内Ⅳ型胶原蛋白和mRNA水平降低(P<0.05)。相反,DCN干扰后,与正常对照组相比,MC中DCN蛋白和mRNA水平下降(P<0.05)；而Ⅳ型胶原表达高于对照组(P
在前人有关锰促进肉鸡心肌细胞MnSOD表达研究的基础上,本研究采用体外原代培养肉仔鸡心肌细胞为研究手段,进一步研究不同锰源对心肌细胞中MnSOD基因表达的调节及其可能机制。为此开展了如下3个实验。

实验一不同锰源对体外原代培养肉仔鸡心肌细胞中MnSOD基因表达影响的差异。在本课题前期研究的基础上试验采用5×2的二因子完全随机设计。即5种锰源和2个时间,5种锰源分别为MnCl2和3种络合强度分别为弱(Availa-Mn)、中(MnAAB)、强(Bioplex PLX-4720 价格 Mn)的有机锰以及不加锰的0对照,采用0.5

mM的锰添加水平,2个时间为加锰处理12h和48h,共组成10个处理组,每组6个重复。实验结果显示,锰和处理时间对细胞MnSOD mRNA有极显著地互作效益(p
研究背景 骨质疏松症是中老年人群的常见病,以全身骨量减少,骨组织的微细结构破坏,骨强度降低和骨折危险性增高为特征。骨质疏松症最大的危害是骨质疏松性骨折,其中以髋部骨折危害最大,不仅髋部活动功能损伤明显,而且死亡率高。随着老龄化社会的到来,骨质疏松症防治的临床与基础研究已成为医学界研究的热点。运动是预防和治疗骨质疏松的重要因素。近年来,具有无创、副反应小、依从性好等特点的物理因子疗法防治骨质疏松症逐渐受到重视。全身振动运动是振动疗法中的一种,是指借助于振动仪器,使振动刺激通过下肢或躯干作用于全身,使机体整体振动,以达到防治疾病目的的方法。对去卵巢模型动物、低骨量人群及绝经后女性的研究显示,低于引起组织损伤的机械振动信号—低强度高频率振动(Low-magnitude, 或者 high-frequency vibration, LMHFV),且有较好的增加骨形成和抑制骨吸收作用。作为一种治疗骨质疏松症的新方法,LMHFV具有无创、副反应小、高依从性的特点,能降低骨质疏松性骨折的发生率,在骨质疏松症的预防和治疗领域越来越受到重视。但是,LMHFV增加骨形成、抑制骨吸收的具体机制仍不清楚。 研究证明,振动应力可以影响成骨细胞的生物学特性,但振动应力影响成骨细胞生物学特性的具体机制尚不清楚。因此,研究振动应力影响成骨细胞生物学特性的分子机制,以其作为切入点进一步阐明LMHFV预防和治疗骨质疏松的机制,将为全身振动运动预防和治疗骨质疏松提供科学依据。 本研究通过自行研制的细胞振动仪,对体外培养的成骨前体MC3T3-E1细胞施加低强度(0.3g)、不同高频率(0、30、45、60、90Hz)振动(LMHFV),结合分子生物学检测技术,观察LMHFV对成骨前体MC3T3-E1细胞生物学特性的影响及其机制的初步研究。研究内容如下：

目的 1.研究低强度高频率振动(LMHFV)对成骨细胞生物学特性的影响。 2.研究环氧合酶-2(COX-2)在LMHFV影响成骨细胞生物学特性中的作甩。 3。研究LMHFV诱导成骨细胞COX-2蛋白表达的信号转导机制。 方法 I。低强度、高频率振动(LMHFV)影响成骨细胞生物学特性的作用 并且 1. LMHFV影响成骨细胞OPG/RANKL比率的作用 (1)LMHFV对成骨细胞OPG/RANKL比率的影响 对MC3T3-E1细胞施加频率0、30、45、60、90Hz,强度0.3g,时间30min的振动,分别于振动后0、0.5、1.5、3、6h收集细胞培养上清液。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LMHFV加载后不同时间MC3T3-E1细胞分泌可溶性OPG、RANKL的情况。通过计算OPG/RANKL比率,将增加OPG/RANKL比率最高的振动频率做为本实验继续研究的频率。 (2)LMHFV加载成骨细胞条件培养基(Conditioned medium, CM)对破骨细胞分化成熟的影响 LMHFV (30Hz)加载MC3T3-E1细胞后含OPG/RANKL比率最高的条件培养基(Conditioned medium, CM30HZ)及LMHFV (OHz)加载后的条件培养基(Conditioned medium, CM0Hz),分别与含40ng/ml sRANKL、20ng/ml M-CSF的1640培养基按体积比1：1混合形成混合培养基。将破骨细胞前体RAW264.7细胞随机分为Control组(CM0Hz)、实验组(CM30Hz),混合培养基分别诱导破骨细胞前体RAW264.7细胞分化5、7天。①实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR, qPCR)分别检测第5、7天各组抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP) mRNA的表达水平；②TRAP检测试剂盒检测第5、7天各组TRAP活性；③TRAP染色计算第7天各组多核破骨细胞形成数目。 2. LMHFV影响成骨细胞分化的作用 (1) LMHFV对成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN) mRNA表达的影响： MC3T3-E1细胞随机分为Control组(0Hz)、LMHFV组(30Hz), Control组不予振动刺激,LMHFV组给予振动刺激(0.3g,30Hz,30min/day),分别加载4、8天后,收集细胞,提取细胞总RNA。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR, qPCR)检测ALP mRNA、OCN mRNA表达,以GAPDH(?)内对照,分析ALP mRNA、OCN mRNA相对表达的变化。 (2) LMHFV对成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OCN)表达的影响： MC3T3-E1细胞随机分为Control组(0Hz)、LMHFV组(30Hz), Control组不予振动刺激,LMHFV组给予振动刺激(0.

AGE-LDL对人肾小管上皮细胞Myd88和TRIF表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL于0、5min、15min、30min、1h、3h及6小时收集细胞。Western-blot检测Myd88和TRIF蛋白表达情况。 2. Myd88/TRIF siRNA干扰后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用Myd88/TRIF siRNA 100pmol有效干扰后,分别加入100μg/ml AGE-LDL或10μtg/ml

LPS,6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。 3.阻断TLR4后,AGE-LDL对人肾小管上皮细胞Myd88和TRIF表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后或者是20μmol/L鼠抗人TLR4抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激6h后收集细胞,Western-blot检测Myd88和TRIF蛋白表达情况。 八.AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK的影响 1. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL和10μg/ml 因为 LPS于0、5min、15min、30min及1小时收集细胞。Western-blot检测MAPK激酶(p38、JNK、ERK)和磷酸化MAPK激酶(p-p38、p-JNK、p-ERK)的蛋白表达情况。 2.抑制MAPK后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA的变化 人小管细胞上皮(HK-2细胞)DMSO、PD98059、SB203580 (p38)、SP420119 (JNK). UO126(ERK)各10μmol/ml预孵2小时后,用AGE-LDL(100μg/ml)刺激6小时,收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测IL-6 mRNA。 3.阻断TLR4后,AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后或者是20μmol/L鼠抗人TLR4抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激15min后收集细胞。Western-blot检测MAPK激酶(p38、JNK、ERK)和磷酸化MAPK激酶(p-p38、p-JNK、p-ERK)的蛋白表达情况。

九.AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB的影响 1. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB/p65表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL和10μtg/ml LPS于0、5min、15min、30min、1h、3h及6小时收集细胞。Western-blot检测NF-κB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 2. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB/p65的核转移 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)培养于置有盖玻片的6孔细胞培养板上分别加入100μg/ml AGE-LDL或10μg/ml LPS刺激0、15min和30min。固定,封闭后,加入抗人NF-κB/p65抗体一抗过夜,用非免疫兔IgG作阴性对照,Alex488荧光标记的羊抗兔二抗避光孵育45分钟,Hochest 33258染核,树脂封片。在共聚焦显微镜下观察、拍片。 3.阻断TLR4后,AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-κB表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后或者是20μtmol/L鼠抗人TLR4抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml 什么 AGE-LDL刺激15min后收集细胞。Western-blot检测NF-κB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 4. Myd88/TRIF siRNA干扰后,AGE-LDL对小管上皮细胞NF-KB表达的影响 Antiinfection Compound Library 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用Myd88/TRIF siRNA 100pmol有效干扰后,分别加入100μg/ml AGE-LDL或10μg/ml LPS刺激15min后收集细胞。Western-blot检测NF-KB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 5.阻断NF-κB干扰后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA的变化肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用NF-KB/p65 siRNA 100pmol有效干扰后或者是10(imol/L NF-κB/p65抑制剂Bay11-7082预孵2小时后,分别加入100μtg/mlAGE-LDL刺激6h后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测IL-6

mRNA。 十.CD36参与AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用CD36 siRNA 100pmol有效干扰后,或者是20μmol/L鼠抗人CD36抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。 十一.统计学方法 所有数据均代表3次重复实验的结果,以X±S表示。多个样本均数的比较采用One-Way ANOVA,两两比较采用LSD和SNK。实验中不同时间点之间的同一变量比较采用独立样本t检验。所有统计由统计软件SPSS13.0完成,P0.05)。 3.3 TLR4中和抗体抑制(?)AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6 mRNA 使用鼠抗人TLR4中和抗体,可以抑制(?)AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6mRNA (F= 142.096, P=0.000)。结果示10μg/ml和20μg/ml抗体预孵细胞后,可以有效的降低AGE-LDL诱导HK-2产生IL-6 mRNA水平。 3.4阻断或中和TLR4受体,可以减少AGE-LDL促进的HK-2细胞分泌IL-6 使用鼠抗人TLR4中和抗体或siRNA干扰TLR4表达,可以抑制AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6蛋白分泌(F=165.849,P=0.000) 3.5 AGE-LDL对人肾小管上皮细胞TLR4表达的影响 本实验结果显示,AGE-LDL 100μg/ml对人肾小管上皮细胞的TLR4蛋白表达上没有影响(F=0.543,P=0.740) 四.Myd88/TRIF在AGE-LDL刺激HK-2细胞产生IL-6中的作用 4.1 AGE-LDL对HK-2细胞Myd88和TRIF表达的影响 本实验结果显示,AGE-LDL 100μg/ml对人肾小管上皮细胞的Myd88和TRIF蛋白表达没有影响(F=0.122,P=0.992) 4.2 Myd88和TRIF SiRNA分别抑制HK-2细胞表达Myd88和TRIF 使用上海吉泰生物科技公司的合成的人Myd88和TRIF siRNA,可以有效抑制HK-2细胞表达Myd88和TRIF SiRNA蛋白。 4.

5MHz、强度100MW/cm2的超声照射2w。每组随机取8只，应用扫描电镜观察牙根表面的微观改变，并测量牙根吸收指数；每组其余8只取实验牙和其临近牙周组织，制作以实验牙为中心，矢状向的组织切片，HE染色光镜下观察牙根吸收与修复的情况；抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色，行阳性细胞计数；免疫组化检测TNF-α、OPG、RANKL的表达，用Imagepro-Plus6.0图像分析系统进行光密度测量。对实验结果应用spss软件进行单因素方差分析。

结果： 1.与自然修复组相比，超声治疗组牙根吸收指数和破牙骨质细胞的数目减少了，差异有统计学意义；超声治疗组可见有大量的新生牙骨质形成。 2.超声治疗组TNF-α的表达下调，OPG/RANKL的比值升高，与自然修复组相比差异有统计学意义。 结论：超声能够下调TNF-α的表达，上调OPG/RANKL的比值，减少了破牙骨质细胞的生成，有利于牙骨质向再生的方向发展。
本文由两章组成,第一章为桑属异戊烯基黄酮类化合物干预脂肪细胞分化作用的研究,第二章主要对天然产物脂肪细胞分化干预作用的研究进展进行了综述。 脂肪组织作为能量储存和内分泌器官,在人体能量平衡、胰岛素作用、脂质代谢中发挥重要作用,是代谢调节的中枢。促进脂肪细胞分化能够增加脂肪组织胰岛素敏感性,促进脂肪细胞葡萄糖转运。天然产物资源丰富,从中挖掘和寻找新的干预脂肪细胞分化,改善胰岛素抵抗和2型糖尿病的先导化合物,是近年来降糖药物开发的研究方向之一。 AG-014699研究购买 桑属植物富含异戊烯基黄酮类化合物,我们课题组在对黑桑和滇桑生物活性成分的研究中,首次发现部分化合物具有促进脂肪细胞分化的活性。因此,我们对其中活性显著的异戊烯基黄酮化合物进行了深入的促进脂肪细胞分化作用和机制的研究,并检测其对脂肪细胞葡萄糖转运的影响。 MnPE-11是从桑属(Morns)黑桑(M.nigra)中分离得到的桑根酮型二氢黄酮化合物。我们发现MnPE-11能够促进前脂肪细胞3T3L1分化和葡萄糖转运。MnPE-11剂量依赖地增加了脂滴的聚集以及脂源性基因的表达,包括CEBPβ、 CEBPα、PPARγ及其靶基因：aP2、GLUT4、adiponectin。而且,MnPE-11还能够提高PPARγ活性和分化早期P-Akt的表达。因此,MnPE-11可能通过激活Akt,增加CEBPβ, CEBPα, PPARγ表达,同时提高PPARγ活性,促进脂肪细胞分化。 My-34和my-12是从桑属滇桑(M. yunanensis)中分离得到的两个异戊烯基黄烷化合物。My-34在分化早期使p38蛋白磷酸化,而p38抑制剂能够明显降低my-34促进的脂肪细胞分化和基础糖转运。My-34依次增加脂源性基因CEBPβ、 http://www.selleckchem.cn/products/Perifosine.html CEBPα和PPARγ的表达,这些基因表达的上调同样能够被p38抑制剂抑制。在促进脂肪细胞分化的同时,my-34还能剂量依赖地抑制炎症因子TNF-α的表达。因此,my-34可能通过激活p38,增加CEBPβ、CEBPα和PPARγ表达,从而促进脂肪细胞分化。My-12能够促进前脂肪细胞3T3L1分化和葡萄糖转运。My-12剂量依赖地增加了脂滴的聚集以及脂源性基因的表达,包括CEBPβ、CEBPα、

PPARγ及其靶基因：aP2、GLUT4、adiponectin。My-12与my-34结构相似,但是与my-34不同的是没有增加分化早期p38蛋白的磷酸化。 总之,来源于桑属的三种异戊烯基黄酮类化合物可以有效促进脂肪细胞分化,增加胰岛素敏感性,促进脂肪细胞葡萄糖转运,这对改善胰岛素抵抗和治疗2型糖尿病的药物发现具有重要意义。
麝香保心丸作为一种治疗心血管疾病的代表中成药已临床应用三十余年，具有芳香温通、益气强心的功效，用于治疗由心肌缺血引起的心绞痛、心肌梗塞等。现代药理学研究证明麝香保心丸不仅能够扩张冠状动脉、保护血管内皮、抑制动脉粥样硬化，还有促进治疗性血管新生的作用，是第一个具有治疗性血管新生作用的中成药，但其促进血管新生作用的主要活性成分和作用机制尚不明确。 本论文在细胞水平上，对麝香保心丸中促进血管新生的活性成分进行了筛选。实验结果表明，在麝香保心丸的入血单体成分中，肉桂醛（Cinnamicaldehyde,CA）、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2具有较明显的促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的作用。其中，肉桂醛促进细胞增殖活性最为显著，并且在10μM浓度下无细胞毒性。因此，本论文重点对不同浓度的肉桂醛促血管新生活性进行体内外药效研究，并对其作用机制进行了探讨。 首先，本研究分别采用CCK-8增殖实验、细胞划痕与爬片实验、Transwell迁移实验及体外成管实验检测肉桂醛体外诱导血管新生的活性。结果显示，肉桂醛于0.1、0.5、1、10μM浓度时均可显著诱导HUVECs增殖、损伤愈合、迁移以及管腔形成，并呈现量效关系；同时观察到肉桂醛于10μM浓度时呈时间依赖性的诱导HUVECs增殖。

其次，利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定HUVECs培养上清中分泌的血管内皮生长因子（VEGF）的含量，结果发现，肉桂醛能够分别于24、36、48小时诱导VEGF的分泌量显著增加。 其三，蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测结果显示，肉桂醛能够激活磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3-kinase, 点击此处 PI3K)/AKT和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases, MAPK)两条信号通路，可呈时间和浓度依赖性地上调其中的主要靶蛋白：AKT、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）、胞外信号调节激酶(extracellularregulatedproteinkinases1/2,Erk1/2)、c-Raf、p38激酶(p38kinase, p38)；此外，PI3K和MEK特异性抑制剂LY294002和U0126能够阻断肉桂醛诱导AKT和Erk1/2的磷酸化，并且抑制内皮细胞增殖、管腔形成及VEGF的分泌。 最后，采用斑马鱼血管损伤模型和小鼠皮肤损伤模型，对肉桂醛促血管新生作用的药效进行了体内验证。在斑马鱼血管损伤模型中，肉桂醛在0.01-0.1μg/mL剂量范围内，对PTK787损伤的斑马鱼节间血管具有显著地促进作用，并在实验的剂量范围呈现一定的量效依赖性。另外，在小鼠皮肤损伤模型中，与对照组相比，每天分别腹腔注射肉桂醛25、50、100mg/kg后，小鼠皮肤伤口明显缩小（P0.

研究BKM120联合靶向治疗药物曲妥珠单抗对HER2阳性的SK-BR-3乳腺癌细胞系及相应干细胞的作用,观察BKM120联合曲妥珠单抗对乳腺癌干细胞的影响。 4.研究BKM120联合多西紫杉醇在体内实验中对乳腺癌干细胞的作用。方法： 1.体外细胞学实验：采用无血清培养液悬浮培养球囊细胞的方法富集相应乳腺癌细胞系干细胞,并经过流式验证其中ESA+CD44+CD24-/low细胞亚群比例。采用MTT法分别检测BKM120、多西紫杉醇、曲妥珠单抗等单药对不同乳腺癌细胞及其干细胞的生长抑制作用；检测BKM120联合多西紫杉醇、BKM120联合曲妥珠单抗对不同乳腺癌细胞和相应干细胞的生长抑制作用,计算药物联合指数。通过划痕实验观察单药和联合用药对不同乳腺癌细胞迁移能力的影响。进一步通过球囊形成实验分析单药和联合用药对不同分子分型乳腺癌细胞系球囊形成能力的影响。利用平板克隆实验检测单药和联合用药对不同分子分型乳腺癌细胞系克隆形成能力的影响,并分析其中的差异。采用免疫蛋白印记方法检测单药和联合用药对不同分子分型乳腺癌细胞及相应乳腺癌干细胞中AKT,pAKT,S6,pS6蛋白水平的影响。

selleck合成 2.体内裸鼠移植瘤实验：成功建立裸鼠乳腺癌干细胞移植瘤动物模型。随机分组条件下,予以单药及联合用药,记录实验期间裸鼠移植瘤体积大小变化和裸鼠体重变化,观察药物在体内对乳腺癌干细胞的影响。 结果： 1.BKM120对乳腺癌细胞及干细胞的作用：在体外与对照组相比,BKM120对乳腺癌细胞及干细胞生长均具有一定的抑制作用,干细胞对BKM120具有一定的耐药性。抑制作用呈一定的浓度剂量依赖性。BKM120可以一定程度的降低乳腺癌细胞的迁移能力,减低乳腺癌细胞克隆形成能力,并可以显著的减少乳腺癌细胞的球囊形成,并呈一定的浓度剂量相关。一定作用浓度下,BKM120可以显著的降低乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞中pAKT、pS6蛋白水平,并呈一定的浓度剂量依赖性。在体内实验中,一定剂量的BKM120可以抑制裸鼠乳腺癌干细胞移植瘤的增长,而不造成小鼠的体重明显下降。 2.BKM120联合多西紫杉醇对乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞的作用：经过药物联合指数计算,两药联合后呈激动作用。体外实验中与对照组、任一单药组相比,联合用药可进一步的抑制乳腺癌细胞的生长、降低乳腺癌细胞的迁移能力、减少乳腺癌细胞球囊的形成,降低乳腺癌细胞的克隆形成能力。与对照组及单药作用组相比,双药联合组更加明显的降低了乳腺癌细胞中pAKT,pS6等蛋白水平。体内实验中,与对照组及任一单药组相比,联合用药可更有效的遏制乳腺癌干细胞移植瘤的生长,同时未明显降低小鼠的体重。

3.BKM120联合曲妥珠单抗对HER2阳性乳腺癌细胞及相应干细胞的作用：经过药物联合指数计算,两药联合后呈激动作用。体外实验中与对照组、任一单药组相比,联合用药可进一步的抑制乳腺癌细胞的生长、降低乳腺癌细胞的迁移能力、减少乳腺癌细胞球囊的形成,降低乳腺癌细胞的克隆形成能力。与对照组及单药作用组相比,双药联合组更加明显的降低了乳腺癌细胞中pAKT,pS6等蛋白水平。 没有 结论： 1.P13K抑制剂BKM120对乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞生长增殖均产生一定的抑制作用。 2.BKM120联合多西紫杉醇在体内体外对乳腺癌干细胞生长增殖产生一定抑制作用。与单药组相比,联合用药可增强药物抗肿瘤作用,一定程度上克服乳腺癌干细胞对多西紫杉醇的耐药性。 3.BKM120联合靶向药物曲妥珠单抗在体外对HER2阳性的乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞均产生一定抑制作用。与单药组相比,联合用药可一定程度上增强药物抗肿瘤作用,克服Her2阳性乳腺癌干细胞对曲妥珠单抗的耐药性。
目的通过对胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GISTs)患者临床病理特征及术后随访资料的分析,探讨PTEN蛋白表达特点以及Ki-67标记指数与GISTs患者临床病理特点及预后的关系。 点击此处 方法回顾分析2005年1月至2011年1月在扬州大学临床医学院胃肠外科接受手术治疗的84例原发性GISTs患者的临床病理资料及随访资料。收集GISTs肿瘤组织标本为实验组,收集同期手术的50例GISTs瘤旁正常胃肠道间质组织标本为对照组,制备组织芯片。应用免疫组织化学方法检测PTEN蛋白及Ki-67蛋白的表达水平,并将PTEN蛋白表达特点及Ki-67标记指数与GISTs患者的临床病理特征和无复发生存率(relapse-free survival, RFS)进行分析。 结果GISTs组中PTEN蛋白阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达率分别为13.1%、39.3%、44.0%和3.6%,对照组中PTEN蛋白阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达率分别为8.0%、20.0%、40.0%和32.0%,

GISTs组中PTEN蛋白表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P1%(P=0.043)均与患者5年RFS相关。多因素生存分析结果显示,消化道出血[风险比(hazard ratio,HR)=3.85,95％可信区间(confidence interval,CI):1.63-9.10,P=0.002]、肿瘤大小(HR5.1-10cm.≤5cm=1.86,95％CI:0.67-5.15；HR>10.m.10/50HPFs vs.≤5/50HPFs=3.44,95％CI:1.13-10.45；总体P=0.002)是影响GIST患者术后RFS的独立危险因素。 结论PTEN蛋白表达水平的表达缺失可能与GISTs的发生、发展及不良预后有关。Ki-67标记指数可用于GISTs术后恶性程度及预后的评估。消化道出血、肿瘤大小及核分裂象计数是原发性GISTs患者预后的独立危险因素；综合分析消化道出血、肿瘤大小、肿瘤部位、核分裂象计数及肿瘤破裂5个因素能更有效地进行GISTs患者术后危险度评估。
肿瘤的发生和发展与许多信号通路息息相关,因此靶向作用于特定的信号转导分子,从而预防和治疗肿瘤的研究策略日益受到越来越多的关注。在下游生存信号中,PI3K/Akt通路具有十分重要的作用,因此更深入的研究这一通路将会促进开发新颖的肿瘤治疗药物。 绵马素PB(aspidin PB)是从香鳞毛蕨Dryopteris fragrans (L.)Schott中分离的一种间苯三酚类化合物,文献报道具有一定的抗肿瘤活性,然而其诱导肿瘤细胞凋亡的机制至今未有深入报道。本文以绵马素PB为研究对象,对其体外抗肿瘤活性和诱导凋亡的机制进行研究,发现绵马素PB通过调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路从而引起HepG2肝癌细胞凋亡。研究结果如下： 1.绵马素PB对多种肿瘤细胞株具有良好的增殖抑制作用。其中对HepG2细胞的抑制作用最强,IC50值是10.59±0.67μM,进一步检测结果表明,绵马素PB对HepG2细胞的增殖抑制作用是呈时间和浓度依赖的。然而,正常的小鼠单核巨噬细胞Raw264.7和小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的IC50值分别是42.50±0.54μM和38.19±0.