5mg/kg),观察Amiloride对大鼠肝纤维化的影响,验证ASIC1a在肝纤维化进程中的作用。结果发现,Amiloride能显著抑制肝纤维化大鼠肝、脾指数增加；降低血清中升高的ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIⅣ;病理组织学显示Amiloride组肝脏组织结构明显改善,肝纤维化增生程度减轻,提示Amiloride对CC14所致大鼠肝纤维化有明显的保护作用。进一步研究发现,Amiloride可以显著抑制肝组织中ASIC1a的表达,降低肝纤维化大鼠血清中IL-1、IL-6的等炎性因子的含量；抑制肝组织中α-SMA、TGF-β1、NFκB和Collagen NSC 683864 价格 I的蛋白表达。研究提示,ASICla参与肝纤维化疾病进程,Amiloride对实验性肝纤维化的保护作用可能与其抑制ASIC1a,进而调节HSCs功能有关。 3.ASICla对酸诱导HSC-T6细胞内Ca2+浓度、细胞增殖和基质代谢的影响 建立酸诱导HSC-T6体外模型,采用Amiloride、ASIC1a特异性阻滞剂PcTX1干预,考察抑制ASICla对HSC-T6细胞胞内Ca2+浓度、细胞增殖及基质代谢的影响。激光共聚焦显微镜、Ca2+成像研究HSC-T6胞内Ca2+的变化发现,pH6.0能明显促进Ca2+流入HSC-T6胞内,Amiloride、PcTX1干预后,Ca2+内流明显减少；MTT法观察ASIC1a阻滞剂对酸诱导HSC-T6的细胞增殖的影响,与pH6.0组相比,Amiloride (200、100、50μM)、PcTX1干预后,HSC-T6细胞生长明显被抑制,且呈剂量效应关系；研究HSC-T6功能的影响,发现与pH7.4组相比,酸处理至pH6.0HSC-T6细胞中α-SMA、TGF-β1、collagen

Ⅰ表达增加,Amiloride、PcTXl干预后α-SMA、TGF-β1collagen I表达降低。进一步观察发现,pH6.0HSC-T6细胞中MMP-13明显降低,TIMP-1明显上调,Amiloride、PcTX1能抑制酸性环境下TIMP-1的增加,升高被降低的MMP-13含量,MMP-9、TIMP-2在酸诱导HSC-T6含量变化不明显。研究提示,ASIC1a参与HSCs功能和代谢过程,当酸刺激下,ASIC1a激活和通道开放,使HSC-T6细胞Ca2+内流增加,进而调节HSC-T6细胞生长和胶原分泌,其调节胶原代谢的过程还与MMP-13、TIMP-1的变化有关。

4. MAPK信号通路在ASIC1a调节HSC功能中的作用 建立酸诱导HSC-T6体外模型,采用ASIC1a非特异性阻滞剂Amiloride、ASIC1a特异性阻滞剂PcTX1、p38MAPK阻断剂SB203580、ERK1/2阻断剂PD98059干预,考察MAPK信号通路在ASIC1a调节HSC功能中的作用。研究结果显示,ASIC1a激活可影响大鼠HSC-T6细胞磷酸化p38MAPK和磷酸化ERK1/2蛋白表达;Amiloride、 PcTX1、p38MAPK阻断剂SB203580、ERK1/2阻断剂PD98059不同程度抑制p38MAPK和磷酸化ERKl/2蛋白表达；进一步研究发现,p38MAPK阻断剂、ERK1/2阻断剂不影响酸诱导HSC-T6细胞中Ca2+的流入,但p38MAPK阻断剂、ERK1/2阻断剂均能降低collagen 什么 I mRNA的表达,其调控机制与p38MAPK调控MMP-13、ERK调控TIMP-1的表达水平有关。结果提示胞外酸化激活ASIC1a通过激活Ca2+依赖的ERK调控TIMP-1的代谢和Ca2+依赖的p38MAPK调控MMP-13的代谢发挥HSC-T6胶原代谢的调节作用。 小结：肝组织、HSC细胞中存在ASICla表达,模型组大鼠肝组织、HSC细胞ASICla表达升高；阻滞ASICla对肝纤维化有保护作用；ASICla参与HSCs功能和胶原代谢过程,当ASICla激活时,可增加HSC的Ca2+内流,进而促进HSC细胞因子TGB-∞1生成和胶原分泌,同时TIMP-1上调,MMP-13下降,抑制胶原降解；MAPK信号通路参与ASICla调节HSC胶原代谢的过程。
目的 研究不同浓度的中药单体淫羊藿苷(Icariin)对人软骨肉瘤细胞SW1353细胞生存率的影响，筛选最佳药物浓度；研究最佳浓度淫羊藿苷对IL-1β诱导后SW1353细胞的基质金属蛋白酶（MatrixMetalloproteinase，MMP）1、3、13表达的影响；研究最佳浓度淫羊藿苷对IL-1β诱导后的MAPKs信号通路（p38信号通路、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路）以及Wnt/β-catenin信号通路的影响；研究淫羊藿苷对实验性大鼠膝骨关节炎（Osteoarthritis,

已经 OA）模型关节软骨组织形态、MMPs、MAPKs信号通路以及Wnt/β-catenin表达的影响；探讨淫羊藿苷对OA软骨降解的保护作用及可能涉及的机制。 方法 1.体外实验 1.1设定7个药物浓度（0、5、10、20、40、80、100μM），四甲基偶氮唑蓝（MTT）测试和Western Blot (WB)检测不同浓度的Icariin对SW1353细胞生存率以及对MMP-1、3、13表达的影响，分析筛选最佳药物浓度。 1.2以IL-1β诱导SW1353细胞，以Icarrin干预，采用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应（q-PCR）法及酶联免疫吸附（ELISA）方法检测细胞及细胞上清液中MMP-1、3、13mRNA和蛋白水平的表达。 1.3以IL-1β诱导SW1353细胞、淫羊藿苷为干预，免疫荧光及WB方法检测磷酸化p38（P-p38）、磷酸化ERK1/2（P-ERK1/2）、磷酸化JNK（P-p54，P-p46）以及β-catenin的表达。 1.4以IL-1β诱导SW1353细胞，以淫羊藿苷为试验药物，以p38特异性抑制剂SB203580，ERK1/2选择性抑制剂PD98059，JNK特异性抑制剂SP600125，以及β-catenin特异性抑制剂XAV-939为对照分别阻断p38，ERK1/2，JNK以及Wnt/β-catenin信号通路，WB方法检测细胞MMP-1、MMP-3、MMP-13、P-p38、P-ERK1/2、P-JNK以及β-catenin的表达。 2.体内实验 2.1成年SD雄性大鼠70只，随机选取10只作为正常对照组，其余采用国际公认的Hulth法建立大鼠膝骨关节炎（KOA）动物模型，并随机分为模型对照组、淫羊藿苷组、SB203580组、PD98059组、SP600125组以及XAV-939组。造模后4周，除正常对照组外，模型对照组予以DMSO（0.3mL，0.05%），其余各组分别予以相应剂量淫羊藿苷（0.3mL，20μM）、SB203580（0.3mL，10μM）、PD98059（0.3mL，10μM）、SP600125（0.

观察芩丹胶囊含药血清对TGF-β1诱导的AF增殖、迁移、平滑肌肌动蛋白-α(alpha

smooth muscle actin,α-SM actin)、Ⅰ和Ⅲ型前胶原mRNA和蛋白表达的改变,探讨芩丹胶囊对TGF-β1诱导的AF的生物活性的影响。 2.观察芩丹胶囊含药血清对TGF-β1诱导的AF Smad2、Smad3、Smad7、磷酸化Smad2 (phosphorylation-Smad2, p-Smad2)和磷酸化Smad3 (phosphorylation-Smad3, p-Smad3) mRNA和蛋白表达的影响,探讨芩丹胶囊对外膜成纤维细胞TGF-β1/Smad信号转导通路的作用。 方法 1.芩丹胶囊的制备及质量标准的研究：采用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography, HPLC)和薄层层析法(Thin-layer chromatography, TLC),明确芩丹胶囊的有效成分。 2.成纤维细胞的复苏与传代：取出冻存管,快速解冻,用正常培养基悬浮细胞,离心后转移至培养瓶。待细胞长至90%融合时进行传代。 3.芩丹胶囊含药血清的制备：60只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组：芩丹胶囊大剂量组(QC大剂量组)给予QC 750mg/(kg·d);芩丹胶囊小剂量组(QC小剂量组)给予QC 150mg/(kg·d);氯沙坦组给予氯沙坦30 Alectinib mg/(kg-d)。各组均大鼠灌胃给药,最后一日禁食24h,末次给药后1h(氯沙坦组)和2h(芩丹胶囊组)后乙醚麻醉,腹主动脉取血,37℃水浴1 h,3000 rpm离心15min,取上清,过滤除菌,然后在-57℃条件下真空干燥,-20℃保存备用。 4.MTT比色法检测细胞增殖能力：制备细胞悬液,接种于96孔板,各组加入相应血清继续孵育48h,换用含20 ng/ml TGF-β1的培养基诱导24h,在刺激结束前4h加入MTT,弃上清,加入DMSO,振荡,比色。

5. Transwell法检测细胞迁移能力：细胞分组和处理同前,经过处理的细胞被消化,然后用DMEM制成细胞悬液,取0.6ml细胞悬液接种于上室,1.5ml含10%FCS的正常培养基加入下室。置入孵箱内培养6h,取出小室用湿棉签擦内侧的细胞,然后固定染色,计数。 6.实时定量PCR技术检测相关因子mRNA的表达：细胞处理同前,提取总RNA,将RNA逆转录为cDNA。观察芩丹胶囊和氯沙坦含药血清对TGF-β1诱导的Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA、Ⅰ型及Ⅲ型前胶原肽mRNA的表达。用2-△△Ct的方法对mRNA的表达进行相对定量分析。 7. Western-blot技术检测相关因子蛋白的表达：细胞分组和处理方法同前,提取蛋白并定量,western-blot检测p-Smad2、p-Smad3、Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA、Ⅰ型前胶原肽蛋白表达。 和 确认细节 8.统计学处理所有实验数据用x±s表示,数据资料均用SPSS 16.0进行统计处理。组间差异采用one-way ANOVA分析和t检验,设P<0.01)；各药物处理组增殖与TGF-β1刺激组相比,有非常显著性差异(P<0.05或P<0.01),其中以氯沙坦组减弱最为显著(P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01),QC大剂量组和氯沙坦组较QC小剂量组有显著差异(P<0.01)；经药物处理以后,与TGF-β1刺激组相比,药物组细胞迁移数目均明显下降(P<0.05或P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01)；QC大剂量组、氯沙坦组与QC小剂量组比较有显著差异(P0.05)；与氯沙坦组相比,QC小剂量组Smad3

mRNA表达差异有显著性(P0.05)；与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组Smad7 mRNA表达均显著提高(P<0.01)；QC大剂量组、氯沙坦组与QC小剂量组比较,差异具有统计学意义(P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01),小剂量组与氯沙坦组比较差异具有统计学意义(P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,QC大剂量组和氯沙坦组Ⅰ型前胶原mRNA表达均显著下降(P0.05)。 (6)Ⅲ型前胶原mRNA表达比较：与正常对照组相比,TGF-β1刺激组细胞Ⅲ型前胶原mRNA表达表达显著升高(P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组Ⅲ型前胶原mRNA表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)；其中氯沙坦组下降最为显著(P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01)；氯沙坦组与QC小剂量组比较有显著差异(P<0.01)。与TGF-β1刺激组相比,各药物组Smad2蛋白表达有所下降(P均<0.01)；氯沙坦组显著下降(P<0.01),且下降幅度大于QC大剂量组与QC小剂量组(P<0.05或P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组p-Smad2蛋白表达均显著下降(P<0.01)；QC大剂量组和氯沙坦组表达低于QC小剂量组(P<0.05或P<0.01)。与TGF-β1刺激组相比,氯沙坦组表达水平下降最明显(P<0.05),其次为QC大剂量组(P<0.

05);(3)EDU摻入法测定显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞DNA复制水平明显下降,与尼古丁单独作用组相比,差异有统计学意义(P
目的探讨糖原合成酶激酶3(GSK3)抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除(KO)小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用及机制。方法给90只30日龄FMR1基因敲除小鼠连续5d腹腔注射不同剂量的氯化锂,用药第6天进行高架十字迷宫行为学实验,通过录像机录像,然后用Smart软件分析录像,观察能否改善KO鼠的高架十字迷宫的表型;同时通过免疫印迹技术检测KO及野生型(WT)鼠的海马和皮层中GSK3β和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)的变化。结果在高架十字迷宫实验中,与WT组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显增强,且KO组小鼠在开放区域的活动时间、次数以及路程均明显高于WT组。KO鼠用氯化锂后,在开放区域的活动时间、次数以及路程均减低,差异具有统计学意义(P0.05。结论

GSK3β的抑制剂氯化锂能改善KO鼠的高架十字迷宫表型,对KO鼠有治疗作用,其机制可能与氯化锂导致的p-GSK3β表达增加有关。
目的:观察开心散含药血清对皮质酮(corticosterone)损伤大鼠大脑皮质星形胶质细胞CTX TNA2的影响。方法:制备开心散含药血清(500 Lonafarnib mg·kg-1)、阳性药氟西汀含药血清(10 mg·kg-1)、普通大鼠血清。细胞实验中采用皮质酮损伤CTX TNA2细胞建立体外抑郁模型,MTT法检测开心散对皮质酮所致细胞损伤的影响以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路抑制剂的干预作用;采用Western Blotting法检验相关信号通路蛋白表达变化情况。结果:皮质酮浓度为200μmol·L-1时,细胞活力抑制率可稳定在60%,浓度依赖性较好;开心散含药血清均能够显著提高皮质酮损伤细胞的存活率,而给予PI3K相关通路的抑制剂后,开心散保护作用被逆转,Western

Blotting结果显示给予开心散含药血清能够逆转皮质酮损伤后PI3K及蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)1/2蛋白表达下降的趋势。结论:开心散含药血清对皮质酮所致的CTX TNA2细胞损伤具有明显保护作用,其保护机制可能与PI3K信号通路有关。
尽管锂制剂在临床上使用了几十年,但其确切机制并不清楚。人们通过研究认识到锂可能是通过抑制糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase 3,GSK3)而发挥抗抑郁作用的。锂可以调控GSK3下游的许多分子,许多抗抑郁类药物可以调控GSK3的信号。使用药理方法或基因沉默方法抑制GSK3均具有稳定情绪、抵抗抑郁的作用,这些研究表明GSK3可能是抗抑郁的潜在靶点。近些年来对GSK3在神经生物学中的作用机制的研究进一步证实了锂可能是通过作用于GSK3来达到治疗目的的。如GSK3可以调节生物体应激反应、炎症反应、神经发生、5-羟色胺(5-hydroxytryptamin,5-HT)传递过程,并参与生物周期节律的调控。因此,特异的GSK3抑制剂能否在临床上发挥抗抑郁作用有待进一步研究。该文对GSK3在应激反应、炎症反应、神经发生、5-HT传递过程以及生物周期节律这五个方面对抑郁发病机制的研究进行了综述。
目的研究细胞信号分子糖原合成酶激酶-3β(glycogen

哪里 synthase kinase-3β,GSK-3β)对D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)联合诱导的小鼠急性肝衰竭肝细胞凋亡的影响。方法腹腔注射D-GalN/LPS建立小鼠急性肝衰竭模型。实验动物分为对照组、模型组、SB216763干预组(建模前2 h腹腔注射)。检测血清ALT、AST,TUNEL法测定肝细胞凋亡,免疫荧光染色法及比色法检测Caspase-3活性,Western印迹检测Cleaved Caspase-3蛋白表达。多组样本均数的两两比较采用一步法ANOVA分析。结果 GSK-3β活性升高促进了在小鼠急性肝衰竭的发生和发展:抑制GSK-3β活性可以显著改善肝脏功能,血清ALT、AST水平明显下降。SB216763干预组ALT与AST水平分别为(961.1±356.0)IU/L和(2 那个 709.9±423.9)IU/L,SB216763干预组与模型组相比,Caspase-3活性降低,TUNEL方法检测肝细胞凋亡减少,并且Cleaved Caspase-3的蛋白表达降低。结论在D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝衰竭中,抑制GSK-3β活性可能通过抑制肝细胞凋亡而改善肝损伤。因此,对信号分子GSK-3β活性进行干预有可能为急性肝衰竭的治疗提供一个新的靶点。
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路在GSK-3β对于巨噬细胞活化过程中可能的作用。方法生长状态良好的RAW264.7细胞分为3组:对照组、脂多糖(LPS)组及GSK-3抑制剂SB216763干预组。在两个时间点(12 h、24 h),采用Western blotting法检测GSK-3β、p-GSK-3βser9、MAPK(c-jun氨基端激酶、细胞外信号调节激酶、p-38)表达情况,Elisa法检测细胞上清中TNF-α的变化,RT-PCR检测细胞中5-LO mRNA变化,电镜下观察RAW264.

22),高剂量的联合Ⅱ组表现为两药相加作用(q值=0.92)；集落形成能力下降[77.2±1.54个/孔VS61.5±2.12个／孔,P<0.01]；凋亡率增加[18.3±0.82%VS21.32±0.56%,P<0.01]和[27.14±1.58%VS42.45±4.42%,P<0.01]；凋亡率显著增加[37.85±3.18%VS52.27±4.36%,P
研究背景及意义 银配合物已经被研究证明具有抗菌、抗肿瘤特性。单质子化的脱氢脱甲基斑螯酸银配聚物(Ag-SP-DNC)是我们合作课题组在前期的实验研究中新合成的银配聚物。在这项研究中,我们得到的实验结果表明Ag-SP-DNC是通过活性氧(ROS)介导的线粒体依赖性细胞凋亡通路导致肺癌细胞发生凋亡。Ag-SP-DNC对人非小细胞肺癌细胞A549有生长抑制作用,将细胞周期抑制于G2/M期,导致细胞发生凋亡。Ag-SP-DNC引起细胞发生凋亡是与细胞内活性氧(ROS)的水平密切相关。进一步研究证明Ag-SP-DNC可破坏细胞线粒体膜电位,诱导caspase-3活化促使凋亡诱导因子AIF、EndoG从线粒体转移到细胞核诱导细胞发生凋亡。这个研究的意义在于为开发银化合物为新的抗肿瘤药物提供实验依据。

方法 1.常规复苏、培养人非小细胞肺癌细胞株A549细胞至对数生长期备用。 2.MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测细胞生存率。 3.SRB(磺酰罗丹明B)法检测细胞存活率。 4.PI单染流式细胞术检测细胞周期情况。 5. DTNB[二硫代二硝基苯甲酸]法检测细胞内GSH水平。 6.倒置显微镜下观察A549细胞形态学变化。 7. TRITC—鬼笔环肽标记扫描共聚焦显微镜观察细胞微丝骨架。 8. Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪分析细胞凋亡率。 9.JC-1标记流式细胞仪分析细胞线粒体膜电位。 10.荧光探针DCFH-DA进行细胞内活性氧水平检测 11.caspase-3(Asp175) 3-MA浓度 antibody (Alexa fluor488conjugate)标记流式细胞术检测细胞内caspase-3活化水平。 12.Fluo-3/AM标记流式细胞术检测细胞内游离Ca2+水平。

而且 13. Western blot检测细胞内AIF, EndoG, Bcl-2, P53等凋亡相关蛋白表达。 14.实验结果采用SPSS16.0软件进行Student’s T test, P<0.05表示有显著差异,P
恶性肿瘤正成为威胁人类生命健康的头号疾病。目前临床上应用的直接作用于细胞有丝分裂、DNA合成和修复等过程的传统细胞毒类药物存在选择性低、毒性大等缺点。因此,以与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号通路的关键酶作为药物筛选靶点,寻找选择性作用于特定靶点的新型抗癌药物已成为当今抗肿瘤药物研发的重要方向。这些小分子抑制剂与传统的肿瘤治疗药物相比往往具有更好的疗效和较小的毒副作用。磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide3-kinase, PI3K)是细胞生命活动中的关键信号分子。PI3K介导的信号通路是细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,控制着细胞生长、增殖、存活、分化、调亡、转移、代谢、转录和翻译等多种细胞生物学过程。大量研究表明PI3K/Akt信号通路与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。以该信号通路中关键酶为靶点的抗肿瘤药物研究成为肿瘤预防和肿瘤靶向治疗的热点之一。 BENC-511是本研究室发现的3-硝基-2H-苯并吡喃类抗肿瘤衍生物,在体内外均表现出良好的抗肿瘤活性。BENC-511的药理学特点主要表现为：1)通过作用于PI3K/Akt信号通路,抑制肿瘤细胞中Akt的磷酸化及下游蛋白mTOR/p70S6K、4E-BP-1的表达；2)通过诱导肿瘤细胞凋亡相关蛋白PARP的裂解,活化caspase-3,诱导肿瘤细胞的凋亡；3)在体外,BENC-511对包含血液瘤、固体瘤等10余种肿瘤细胞的生长均有较强的抑制作用；4)在多发性骨髓瘤(OPM2, RPMI-8226)异种移植模型中,小鼠口服给药50mg/kg/d,连续给药20天,与对照组相比,BENC-511对肿瘤生长的抑制率高达75%以上,而对小鼠肝脏酶、血液生化指标等没有影响,未观察到任何毒副作用。因此,BENC-511是一个靶向作用于PI3K/Akt通路、具有良好抗肿瘤活性和较低毒性的好的苗头化合物。

为了寻找抗肿瘤活性和选择性更好的3-硝基-2H-苯并吡喃类化合物,我们以BENC-511为先导化合物,以计算机辅助药物设计方法为指导,结合PI3K激酶以及下游信号通路关键酶的三维结构对其进行结构修饰,确定6位为主要的结构修饰位点。我们以氨基取代6位的溴,然后在伯氨基上引入不同的酰基侧链,设计了一系列酰胺衍生物。以3-乙氧基水杨醛为起始原料,经硝化,醛基、酚羟基保护,钯-碳催化氢化还原,氨基Boc保护,醛基脱保护以及环合反应得到6-叔丁氧甲酰氨基-3-硝基-8-乙氧基-2H-苯并吡喃关键中间体。在酸性条件下脱掉氨基的Boc保护基,与不同取代的羧酸,在EDCI/HOBt的经典条件下,缩合得到目标化合物。 selleck 本研究共合成BENC-511类似物24个,并对其抗肿瘤活性做了初步研究。体外细胞(K562, DU145和Hela)活性筛选试验结果显示,这一系列化合物对白血病K562细胞和前列腺癌DU145细胞均表现出较好的抑制活性,对子宫颈癌Hela细胞抑制活性较弱。其中,化合物KGS-19、KGS-22和KGS-24具有良好的抗肿瘤活性,对K562细胞的IC50值分别为0.53、0.43和0.44μM,对DU145细胞的IC50值分别为1.20、1.99和2.84μM,对Hela细胞的IC50值分别为4.66、2.36和1.70μM；进一步的抗肿瘤作用机制研究正在进行。
目的：分析Her-2表达与中早期胃癌临床病理特征及预后的相关性，为曲妥珠单抗在中早期胃癌术后患者的临床应用提供依据。 方法：收集2008年1月至2013年1月我院I~III期胃癌术后患者临床资料，Her-2的检测采用免疫组织化学法。采用门诊复查或电话随访的方式进行生存期随访，随访工作结束于2013年10月。总生存时间为手术日至患者死亡或随访截止日期。将数据分成两组，Her-2表达阳性组和Her-2表达阴性组。应用SPSS17.

雌激素影响LPS诱导的大鼠BMSCs表达OPG/RANKL的炎性因子调控途径

加入LPS、E2，并分别加入TNF中和性抗体anti-TNF-α，antiIL-1β，以及IL-6可溶性受体sIL-6R。分别培养6h、12h、24h、48h和72h后，收集细胞培养上清液进行OPG和RANKL的ELISA检测。 结果显示，加入antiTNF-α、antiIL-1β和sIL-6R后，OPG表达与单纯加入E2无明显差别，与加入LPS和E2比较略有下降，至24h达高峰，随后逐渐下降；RANKL的表达与单纯加入LPS相比，以及与加入LPS和E2相比，均有不同程度的下降，其中以加入sIL-6R后最为明显，至24h表达水平达到最高峰。 结论： 1.通过大鼠全骨髓贴壁筛选法可以对BMSCs进行分离、纯化、培养和扩增，将其生物学特性和流式细胞术检测表型特征相结合，可以鉴定为大鼠BMSCs。 2.LPS可以诱导BMSCs分泌表达炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6，雌激素可以显著抑制炎性因子的高表达，并且呈浓度依赖性，表明雌激素具有明显的抗炎作用。 3.LPS和雌激素共同刺激下的BMSCs炎性因子表达量6h时处于上升期，12h和24h处于高峰，48h和72h时表达下降，表现为明显的时间依赖性。 4.MAPK信号通路可能是雌激素调控BMSCs炎性因子表达的途径之一。 5.雌激素可以明显促进BMSCs中OPG的表达，LPS可以明显促进BMSCs中RANKL的表达，雌激素可以通过调控OPG/RANKL的比值提高LPS作用后BMSCs的骨向分化能力，促进炎症微环境下BMSCs的骨向分化。 通常 6.经LPS与E2作用后，大鼠BMSCs的OPG表达在6h开始上升，12h到24小时到达高峰，随后下降，而RANKL的表达在6h上升，12h以后一直保持较高水平。 7.雌激素可以通过调控炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达的途径对LPS诱导的BMSCs表达OPG/RANKL进行调控，雌激素调控炎性因子的表达是其发挥生物学功能的途径之一。
肺纤维化是严重危害健康的呼吸系统常见并发症,是各种不同病因的肺间质疾病的最后共同结局。由于大部分肺部疾病的最终转归都伴有不同程度的肺纤维化,因此肺纤维化不仅是肺部疾病转归的结果,还是导致原有疾病进一步恶化的主要原因。目前肺纤维化的临床治疗以给予皮质类固醇类和其他免疫抑制剂药物为主,但是研究发现其只对部分肺纤维化患者有效,对特发性肺纤维化患者疗效较差。肺纤维化的发病率和死亡率近年呈逐渐上升态势,对人类健康危害极大。因此,寻找新的治疗策略迫在眉睫。 Antiflammin-1(AF-1)是与子宫珠蛋白(uteroglobin, UG)第三个alpha螺旋中的保守序列高度同源的一段寡肽,由于最初发现在体内具有较强的抗炎作用而得名。AF-1由九肽组成,对应于UG分子中的第39～47位氨基酸(MQMKKVLDS)。研究证实,AF-1具有抗炎、抑制细胞趋化及粘附等多种与UG相似的生物活性。与大分子天然蛋白UG相比较,

Selleckchem ISRIB AF-1的分子量更小,免疫原性更低,因此具有潜在的应用前景。以往的研究集中在对AF-1的抗炎作用和机制的探索上,鉴于UG在肺纤维化发生发展中的重要作用和本课题组前期关于AF-1抑制转化生长因子betal (transforming growth factor-betal,TGF-β1)诱导的NIH3T3增殖的作用,本课题首先在整体实验部分探索AF-1是否具有抑制博来霉素(bleomycin, BLM)诱导的小鼠急性肺炎症反应和抗肺纤维化的作用。 我们在前期实验中发现,UG的活性片段AF-1也能够特异性地结合UG受体,并且通过UG受体的介导,AF-1能够特异性的调节小鼠成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

protein kinase, MAPK)信号途径。由于UG受体同样表达于肺泡上皮细胞上,那么,既然AF-1能够通过结合成纤维细胞膜上的UG受体而抑制TGF-β1促增殖的作用。那么是否AF-1同样能通过上皮细胞膜上的UG受体而发挥某种生物学功能?本课题进一步在细胞实验部分尝试观察：①AF-11是否能够抑制TGF-β1诱导的上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal 那个 transition, EMT)的作用?②如果能,是否同样依赖于UG受体的介导? 第一章AF-1抑制博来霉素诱导的急性肺损伤 方法： 将60只实验小鼠随机分为3组,A组为生理盐水组,B组为BLM组,C组为BLM+AF-1组。单次给予小鼠气管内注射BLM(5mg/kg)以造成小鼠急性肺损伤,每日腹腔注射AF-1(2mg/kg),于BLM给药7天后收集样本,检测肺湿干重比值,HE染色法观察小鼠肺组织病理形态学变化,ELISA法检测肺组织匀浆TGF-β1、白介素-1beta(interleukin-1β, IL-1β)及肿瘤坏死因子-alpha (tumor necrosis factor-alpha, TNF-a)的浓度,肺组织匀浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性的检测,肺泡灌洗液中细胞分类计数、蛋白含量及乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)活性的检测。 结果：(1)气管内注射BLM(5mg/kg)后第7天,BLM组肺湿干重比值、肺系数及MPO活性较正常对照组显著增加(P<0.05),经AF-1处理后,肺泡灌洗液中LDH活性和蛋白含量较BLM组明显下降(P<0.05)。经AF-1处理后,肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞的数量和百分比、淋巴细胞的数量较单独给予BLM组明显下降(P<0.05),经AF-1处理后,小鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β、TNF-α的水平的显著下降,与单独给予BLM组相比,差异具有统计学意义(P<0.

5％去氧胆酸钠制成大鼠SAP时ALI模型。选用纯雄性健康Wistar大鼠共138只，随机分成5组：假手术对照组(SHAM，n=18)；SAP模型组(SAP，n=30)；SAP+乌司他丁治疗组(ULI，n=30)；SAP+地塞米松治疗组(DEX，n=30)；SAP+清胰汤治疗组(QYT，n=30)；每组分造模后6h、12h、24h三个时间点，分离肺泡灌洗液中PMN，利用流式细胞仪、RT-PCR、免疫组化等方法检测各组肺泡灌洗液PMN功能的变化，探讨1)SAP时ALI大鼠肺泡灌洗液PMN表面的整合素CD11b／CD18与血管内皮、上皮细胞表面ICAM-1配体的表达以及血清中s ICAM-1的表达；2)SAP时 ALI大鼠肺组织PMN凋亡的变化规律以及凋亡的信号转导机制;3)5妙时ALI 大鼠肺组织pMN呼吸爆发的变化;4)比较中药清胰汤、地塞米松和乌司他丁对 SAP时ALI大鼠肺组织PMN功能的影响，试图阐明PMN功能改变在S妙时

ALI中的发病学意义，论证清胰汤的治疗作用及可能机理，为临床SAP时ALI的 治疗提供新的方法和理论依据。实验结果如下: 一重症急性胰腺炎肺损伤模型的复制 CB-839浓度 本研究采用经胰管逆行注射1 .5%去氧胆酸钠复制大鼠S妙时ALI模型，造 模后在各时相点大鼠均出现呼吸困难、口唇发组;动脉血气分析结果显示PaOZ 明显降低、PaCO:明显升高及A一aDO:逐渐增加，提示大鼠均有明显的低氧血症 和氧利用障碍;肺组织病理显示微血管通透性升高，肺组织中有大量PMN浸 润，肺组织渗出、出血明显。以上实验结果表明用1.5%去氧胆酸钠制备的大鼠 SAP模型均并发急性肺损伤。 二.粘附分子表达在重症急性胰腺炎肺损伤大鼠PMN肺内聚集的作用 应用流式细胞仪和免疫组化法检测大鼠肺泡灌洗液中PMN表面 CDllb/CD18和肺组织ICAM一1蛋白的表达。结果显示:S妙组肺泡灌洗液中 PMN表面整合素CDI lb/CD18表达在各时间点均较SHAM组明显增强，6h表达 明显已明显增强，并持续到24h:SAP组大鼠肺组织ICAM一1蛋白表达强度在各 时间点均较SHAM组明显增强，组内动态观察发现随造模时间延长ICAM一1蛋白 表达增强，24h时表达最强:SAP组大鼠血清中slcAM一1浓度各时间点均较 SHAM组明显升高，24h时血清中sICAM一1浓度达到高峰，并且其变化规律与大

鼠肺损伤程度明显相关，提示血清中sICAM一1水平可以做为判断S妙病情严重 程度的一个指标及PMN活化粘附的标志。 三.重症急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织PMN凋亡及凋亡的信号转导机制 应用流式细胞仪检测肺泡灌洗液中PMN凋亡，结果显示造模后各时间点 SAP组肺灌洗液中PMN凋亡比例均比SHAM组降低:SAP组肺灌洗液中PMN 存活比例均明显高于SHAM组，表明PMN游出血管到达肺组织后PMN凋亡延 迟，存活时间延长。PMN的这种变化与SAP时ALI的发生可能有密切关系，因 为游出的PMN处于激活状态，持续释放炎性介质和毒性内容物，造成周围组织 损伤。由此我们推测，通过诱导凋亡来清除这些PMN也许可以避免继发性肺组 织损伤，从而保护器官功能。 应用免疫组化法检测肺泡灌洗液PMN中NF一KB，结果显示:SAP组术后6h 胞浆NF一xB表达开始增加，术后12h表达最明显;造模后6h，12hs”组肺泡灌 洗液中PMN胞浆[C扩+1i的浓度比sHAM组明显增加，术后24h基本恢复到正 常。RT一PCR检测肺泡灌洗液中PMN Fas邝asl mRNA表达，结果SAP组肺泡灌洗 液中PMN表面Fas用asl mRNA几乎检测不到。以上结果提示:细胞增殖和分化 已经 过程中的一些基因、信使分子是细胞凋亡过程中的调节因子，细胞凋亡与增殖、 、分化的信号途径有着某些共同的信号分子，细胞接受相同或不同的刺激后，不同 的调节途径就会导致细胞的不同走向(增殖或凋亡)，PMN内[C扩+]i升高、NF- KB表达增加和Fas下asl mRNA表达减少均可抑制肺组织中PMN凋亡，造成 PMN凋亡的延迟。 四.重症急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织PMN呼吸爆发的变化 SAP组与SHAM组比较，SAP组大鼠肺泡灌洗液中PMN呼吸爆发在6h、 12h增强?
目的 缺氧是实质性肿瘤物理微环境的基本特征之一。缺氧不但可以诱导肿瘤细胞对放疗及化疗的耐受性，同时可促进肿瘤进展。越来越多的证据表明缺氧是决定恶性肿瘤预后的重要因素。在本研究中，我们拟观察胃癌细胞系MGC803缺氧不同时间后细胞周期、抑癌基因PTEN、线粒体ATP6(mtATP6)和线粒体Cyt-b(mtCyt-b)mRNA及VEGF、EGFR蛋白表达变化与放射敏感性的关系；分析MAPK、PI3K信号传导通路抑制剂PD98059、LY294002、外源性PTEN对缺氧后胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期、VEGF及EGFR蛋白表达的影响及其与放射敏感性的关系及机制。

获悉更多 方法 将MGC803细胞施加缺氧(1％ O_2)处理，分别作用0hr、2hr、8hr、16hr、24hr，每一时间点又分为缺氧组及缺氧照射组；ASPC-1细胞分成常氧组、缺氧组、LY294002缺氧组、PD98059缺氧组、LY294002和PD98059缺氧组；将质粒pEAK8和pEAK8-PTEN分别转染ASPC-1细胞，获得ASPC-1-pEAK8细胞及稳定高表达PTEN的ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞，将ASPC-1-pEAK8-PTEN、ASPC-1-pEAK8和ASPC-1细胞各分成常氧组、缺氧组、照射组、缺氧照射组。缺氧组缺氧时间为24hr，照射组接受4Gy单次照射，缺氧照射组在缺氧情况下进行照射。用RT-PCR、Western blot、流式细胞术、成克隆分析法对MGC803和ASPC-1细胞进行检测。 结果 MGC803细胞PIEN mRNA的表达水平随缺氧时间延长而增加，至缺氧 24hr达最高点;缺氧开始后AIT巧mRNA表达水平下降，shr后又升高，以后 随着时间的延长，A叨币mRNA再次下降;Cyt一b mRNA缺氧shr出现一过性 下降，24hr又恢复到缺氧前水平;几GF、EGFR蛋白的水平随缺氧时间延长 也逐渐增加，缺氧24hr蛋白表达量最高;缺氧使MGC803细胞发生G，期阻 滞，S期细胞减少，但24坛后细胞周期分布基本恢复至缺氧前水平;随着缺 氧时间的延长缺氧组细胞存活分数逐渐下降，与缺氧时间呈负相关(r二 一0 .900，P二0.037)，而缺氧照射组MGC803细胞存活分数与缺氧时间呈正 相关(r二0 .900，P二0.037)，在缺氧24hr内，缺氧组及缺氧照射组细胞存活 分数与细胞周期各期细胞变化无相关性(p>0.

01)。PDGF诱导的ERK、JNK和p38活性均在2min时迅速增高,分别在2～5min达高峰,分别为基础水平的5.7倍、2.6倍和1.6倍(P<0.05),ERK和JNK活性增高可持续至120min,而p38活性则于60min以后恢复至基础水平。在PDGF刺激24h的情况下,PD98059和SP600125不影响基础状态及PDGF对α-SMA表达的作用,但SP600125可抑制PDGF上调的细胞移行能力(P<0.01);而SB203580既可抑制α-SMA的基础表达(P<0.01)及PDGF下调的α-SMA表达(P<0.001),同时还可显著抑制PDGF诱导的细胞移行能力(P<0.05)。结论PDGF可刺?
AIM: 也许 To

investigate the roles of p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK) in the cardiovascular and behavioral responses induced by intracerebral ventricular injection (icv) of interleukin-1β (IL-1β) or footshock. METHODS: We examined the effects of p38 MAPK on mean artery blood pressure (mABP), heart rate (HR), and motor activity (MA) during central administration of IL-1β, or footshock after icv SB203580 (a specific inhibitor of the p38 MAPK) with Cardiovascular and Behavior Telemetry

System in conscious SD rats. RESULTS: (1) IL-1β (icv) or footshock remarkably rise the mABP, AC220研究购买 and the maximal changes are (7.8±1.8) and (12.3±3.5) mmHg, respectively, which was abrogated by the pretreatment with p38 inhibitor SB203580 intracerebroventricularly. (2) Compared with icv saline group, the motor activity was significantly decreased in SB203580 group with maximal changes (-7.6±1.1) counts/min after footshock. CONCLUSION: p38 MAPK plays an important role in the pres- sor response induced by central administration of IL-1β or footshock and change of motor activity after footshock in conscious 已经 rats.
A Review The diseases caused by endotoxin

have seriously affected human health. Previous studies have shown that p38 MAPK pathway is involved in the intracellular signal transduction induced by lipopolysaccharide (LPS), which plays an important role in the activation of inflammation-related cells to release inflammation mediator. Recently there have been some progresses in the isoforms distribution, substrate, molecular mechanism of regulating the release of inflammatory mediators, cellular specific activation and levels of p38 MAPK. [
Shock waves were elicited by transient pressure disturbances, which could be used to treat musculoskeletal disorders.

01）；与窒息组比较，APN组AMPK蛋白显著升高（P＜0.01），而Compound C组AMPK蛋白表达下降明显（P＜0.01）；与CompoundC组相比，APN+Compound C组AMPK蛋白表达升高，且差异明显（P＜0.01）。 4、心肌细胞凋亡荧光显色：在荧光显微镜下观察可见假手术组仅有少量的凋亡细胞荧光显色，窒息组、Compound C组及APN+Compound C组凋亡细胞明显增多，APN组凋亡细胞较前三组均减少，但多于假手术组。 5、心肌细胞凋亡指数（Apoptotic selleck抑制剂 Index，AI）结果比较：与假手术组相比，窒息组AI水平显著升高（P＜0.01）；与窒息组相比，APN组AI水平明显下降（P＜0.01），而Compound

C组AI水平明显升高（P＜0.01）；与Compound C组相比，APN+Compound C组AI水平明显降低（P＜0.01）。 结论： 1、脂联素对窒息新生鼠缺氧缺血性心肌损伤有保护作用，能够减少心肌细胞凋亡。 2、新生鼠窒息所致的缺氧缺血性心肌损伤过程存在AMPK信号分子的激活。 3、脂联素通过激活AMPK信号转导途径发挥对新生鼠缺氧缺血性心肌损伤的保护作用。 4、AMPK抑制剂Compound C阻断了脂联素的心肌保护作用。
目的： 1、观察细胞外液酸化对大鼠离体冠状动脉环静息张力的影响。 2、观察电压依赖性钾通道(Kv)、ATP敏感性钾通道(KATP)和大电导钙激活钾通道(BKca)在细胞外液酸化所致大鼠离体冠状动脉环静息张力改变中的作用。 3、观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在细胞外液酸化所致大鼠离体冠状动脉环静息张力改变中的作用。 方法： 1、将雄性大鼠(200～250g)断头处死,立即取出心脏置于4℃的生理盐水溶液(physiological salt solution, PSS)中,在显微镜下迅速分离冠状动脉,剪成2mm长的动脉环,将其固定在离体微动脉张力测定仪的传感器上。采用PowerLab和DMT微血管环张力记录系统,观察细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)对大鼠离体冠状动脉环静息张力的影响。 2、观察Kv阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)(0.3mmol/L、1mmol/L)、KATP阻断剂格列苯脲(Gli)(0.003mmol/L、0.01mmol/L、0.03mmol/L)和BKca阻断剂四乙胺(TEA)(1mmol/L、3mmol/L)对细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)所致大鼠离体冠状动脉环静息张力改变的影响。 3、观察p38MAPK抑制剂SB239063(1μmol/L)对细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)所致大鼠离体冠状动脉环静息张力改变的影响。 结果： 1、在静息状态下,随细胞外液pH值降低(pH7.2、7.0、6.8、6.6),大鼠离体冠状动脉环张力逐渐增高。以KC1(60mmol/L)所致的最大收缩幅度为100%,pH7.2、7.0、6.8、6.6的收缩百分比分别为(4.51±1.48)%、(38.84±7.24)%、(78.61±4.10)%、(101.79±3.64)%。

Selleck PD-1/PD-L1抑制剂 2 2、细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)所致大鼠冠状动脉环的收缩百分比分别为(6.57±2.35)%、(34.42±9.48)%、(76.41±8.58)%、(101.91±3.02)%；预孵4-AP

selleck化学 (0.3mmol/L)时,可显著抑制细胞外液pH6.6所致大鼠冠状动脉环的收缩(P0.05)。 5、细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)所致大鼠冠状动脉环的收缩百分比分别为(7.85±3.27)%、(39.04±5.19)%、(78.28±5.39)%、(103.89±3.42)%；预孵SB239063(1μmol/L)时,可显著抑制细胞外液pH7.0、6.8、6.6所致大鼠冠状动脉环的收缩(P
建立了关于换热网络综合问题的双层规划模型,其上层规划是关于换热器在冷热流股之间的布局与排序问题,下层则是对换热量的优化。对换热器的布局优化,本文引入布局图来刻划换热网络布局结构,用布局图等价类的概念对所有的布局结构进行剖分,并论述相关性质,为构造全局优化算法奠定理论基础。
针对文本数字水印算法抗攻击性不强,鲁棒性不高的现状,提出了一种新的基于汉字频率的中文文本数字水印算法。通过对高频字进行分组,将水印序列嵌入文本中,并利用正弦函数和CRC纠错码提高了算法的鲁棒性。实验结果表明,该算法实现的水印具有较好的视觉透明性和一定的应用价值。
“同位词”体系在“中华假名”双键组合及其对应切分的精妙配合下,可以简捷明快地书面插入和口语念读,容易记忆背诵而流传扩展,并在促进儿童智力的高速成长的同时,让家长老师高兴配合(在WiLi网际交流讨论自学)引发更多正反馈,未来将逐步形成更多的国际标准公用词汇,达到理想语的语义消歧而精密传递的境界
研究乙醇、水共沸精馏的热量集成流程。指定塔压使提浓塔冷凝器负荷提供脱水塔再沸釜所需的热量，产物流的热量用以预热提浓塔进料液得以回收。通过模拟计算找出能耗最少的二塔构型流程，表明集热流程是一种有效的节能途径。并对戊烷和苯分别作为夹带剂的结果加以比较。
ｐ３８ＭＡＰＫ参与ＬＰＳ诱导ＲＡＷ细胞ＴＮＦ－α基因表达的调控第一军医大学全军休克微循环重点实验室，（广州５１０５１５）姜勇赵克森Ｄｅｐｔ．ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＳｃｒｉｐｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，１０５５０Ｎ．ＴｏｒｒｅｙＰ…
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丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者。多种细胞生理过程，如生长、发育、分裂、死亡、以及细胞间的功能同步化等都涉及到ＭＡＰＫ信号传导通路的调节。已证实，在哺乳动物细胞存在多条ＭＡＰＫ传导通路。９０年代初在哺乳动物细胞发现ＥＲＫ介导生长因子有关的刺激引起的细胞反应。近年来又发现和克隆了ＪＮＫ、ｐ３８、ＥＲＫ５（ＢＭＫ１）三个新的ＭＡＰＫ亚族。这些新的ＭＡＰＫ介导了物理、化学应激、细菌产物、炎性细胞因子等多种刺激引起的细胞反应。ＭＡＰＫ通路并非单一的传导通路，而是代表了对不同刺激引起特定细胞生理反应的一种普遍机制。
Ａｌｏｔｏｆｂｉｏａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓａｒｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｍｏｎｏｃｙｔｅｓ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｏｎｔｈｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｏｘｉｎ，ａｌｓｏｃａｌｅｄａｓｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ），ｗｈ…

抗LDL及抗oxLDL IgM亚类单抗的制备为研究天然抗体在体内脂质代谢和相关心脑血管疾病如动脉粥样硬化等发生发展中的作用提供了重要的研究工具。 2.天然属性抗oxLDL IgM亚类抗体3A6降低了泡沫细胞的形成,可能对动脉粥样硬化形成有预防作用。 Galunisertib半抑制浓度 3.天然属性抗oxLDL IgM亚类抗体3A6对apoE基因敲除小鼠血脂及血浆oxLDL含量无明显影响;但对apoE基因敲除小鼠胸主动脉粥样硬化斑块形成有抑制作用。 4. 3A6不能抑制脂多糖活化的巨噬细胞对oxLDL的摄取,并且通过其Fc段与巨噬细胞的结合而促进了oxLDL介导的泡沫细胞的生成。脂多糖通过TLR-4受体活化了p38MAPK和NF-κB通路,并且上调了Fcα/μ受体在巨噬细胞表面的表达。 5.我们的研究结果证实了LPS浓度升高加重动脉粥样硬化形成的内在机制。
第一部分大鼠同种异体原位肺移植模型的建立 目的:通过大鼠套管法吻合技术建立大鼠左侧原位肺移植模型。方法:将60只SPF级SD大鼠随机分为供、受体两组,采用三套管吻合技术完成大鼠肺移植模型。结果:30例手术中,供肺灌注到摘取时间(10±1)分钟,供肺完成套管时间(10±4)分钟,供体动静脉、支气管吻合时间(15±2)分钟,移植肺热缺血时间(16±2)分钟,冷缺血时间(30±5)分钟,手术平均时间(80±10)分钟,术后15天生存率达86%,其中两例死于急性肺水肿,一例死于肺静脉栓塞,一例死于对侧气胸。结论:三套管大鼠同种异体肺移植模有效、可靠,为临床肺移植提供了较好的实验基础,但是模型操作复杂,需要长时间的学习和反复操作来提高肺移植模型的稳定性。

第二部分落新妇甙对大鼠肺移植排斥反应的抑制作用 目的:运用排斥反应分级及观察落新妇甙对大鼠移植肺中支气管肺泡灌洗液诱导肺成纤维细胞胶原增生的抑制作用实验,探讨落新妇甙对大鼠肺移植排斥反应的抑制作用。方法:采用大鼠左侧原位肺移植模型。随机将肺移植后的60只大鼠分为4组:A组肺移植后用生理盐水(1ml/天)灌胃,B组肺移植后用环孢素A (5mg/kg/天)灌胃,C组肺移植后用落新妇甙(1mg/kg/天)灌胃,D组肺移植后用环孢素A (2.5mg/kg/天)及落新妇甙(1mg/kg/天)灌胃。术后第30天(每组抽取5只大鼠)切取移植肺观察肺急性排斥反应分级情况;另外每组10只大鼠,取受体支气管肺泡灌洗液。用收集的支气管肺泡灌洗液在体外刺激人胚胎成纤维细胞,通过MTT比色法和酶联免疫(ELISA)法分别检测人胚肺成纤维细胞的增殖及Ⅰ型胶原的合成,并对检测结果进行分析。结果:(1)B组、C组及D组移植肺排斥反应分级均低于A组(P<0.01);D组移植肺急性排斥反应最轻,优于C组(P<0.05)和B组(P<0.01)。(2)受者移植肺中支气管肺泡灌洗液显著促进了人胚肺成纤维细胞的增殖和胶原合成;(3)B、C、D组的支气管肺泡灌洗液诱导的人胚肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成有显著的抑制作用(P0.05)。D组(落新妇甙加PI3K/Akt抑制剂LY294002组)T细胞凋亡和PIK3/Akt表达明显高于对照组,p38MAPK明显低于对照组。结论:落新妇甙诱导大鼠肺移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其激活p38MAPK信号传导通路、及抑制PI3K/Akt信号传导通路有关。
前言:胃癌是一种常见的恶性肿瘤,据有关文献报道,在我国其死亡率居各种恶性肿瘤之首。胃癌患者的主要死因为肿瘤病灶的侵袭及转移。因此探讨其侵袭转移机制显得尤为重要。

Lonafarnib数据表 在众多的促转移分子中,转化生长因子β(transforming

哪里 growthfactor beta,TGFβ)是一重要分子,它参与了多种肿瘤的侵袭和转移过程。用基因转染的方法诱导肿瘤细胞中TGF-β1表达可增加肿瘤细胞的转移能力。同时有研究表明,阻止TGF-β信号通路可以抑制胃癌的转移。我们的早期研究发现TGF-β1可以促进胃癌细胞SGC7901和BGC823的浸润和转移。一些临床研究也显示:TGF-β1的表达与淋巴结的转移和预后不良呈正相关。目前虽然已有许多研究证实了TGF-β1在肿瘤侵袭和转移中的作用,但其具体机制尚不明确。 研究表明TGF-β促浸润转移作用可由smad依赖通路及smad非依赖通路介导。TGF-β与细胞膜Ⅱ型受体(TβRⅡ)结合后,激活Ⅰ型受体,活化的Ⅰ型受体激活下游分子smad2和smad3,随后smad2/smad3与smad4结合形成smad复合物并转移到核内,调节TGF-β介导的靶基因转录。而在smad非依赖通路中,JNK,Erk和P38通路则被认为是关键性的通路。基于TGF-β在肿瘤发生与转移中的重要性,所以深入探讨TGF-β促转移机制具有非常重要的理论及临床意义。 人类fascin 1基因属于fascin家族,其蛋白质编码产物是一种分子量为55 kDa的细胞骨架蛋白,可与F肌动蛋白结合,定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶(ruffles)边缘与细胞的运动、癌细胞的转移有密切关系的公状伪足、微棘(microspikes)的核心肌动蛋白束中。细胞内fascin 1基因表达上调引起细胞间连接发生解离,同时细胞的运动也相应增加。而将fascin 1基因转染至fascin 1基因低表达的结直肠癌细胞系SW 1222中,结果细胞膜表面突起增多,细胞分化程度降低,细胞运动性增强。Fascin蛋白在胃癌中表达明显增高,它的高表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和复发密切相关。有研究表明在肺癌中TGF-β1可诱导fascin1基因表达上调,且TGF-β1和fascin1蛋白都与肺癌的侵袭与转移有关,但是目前TGF-β与fascin1在胃癌侵袭与转移中是否存在调控关系尚未见文献报道。 RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来发展起来的一种新技术,由于它能特异而有效地阻断靶基因的表达,目前被广泛应用于各种肿瘤的研究。我们构建了针对Fascin1的短发夹RNA(shortharpin RNA,shRNA)真核表达载体并首次转染人胃癌细胞MKN45,观察抑制fascin1表达前后,TGF-β1作用对胃癌侵袭和转移的影响,并对其机制作初步探讨。 目的:研究TGF-β1对fascin1基因表达的影响,以及fascin1在TGF-β促胃癌侵袭与转移中的作用。探讨以fascin1为靶的胃癌基因治疗以及进一步揭示TGF-β1促胃癌侵袭和转移机制提供理论和实验依据。 方法: 1.

1)、DAVID(Database for Annotation. Visualization, and Integrated Discovery, v6.7、GSEA(Gene Set Enrichment Analysis,v3.7),分别对ALK融合型NSCLC和非ALK融合型NSCLC表达谱芯片数据集进行数据挖掘,参考数据库为GO、KEGG等,并应用文献自主挖掘系统对pubmed上可检索到的文献(仅针对摘要内容)进行了初步的挖掘与筛选,以寻找组间差异表达基因,并对其生物学行为过程、分子生物功能、信号转导通路等领域进行了基因集富集和聚类分析。

结果 EML4-ALK融合型与野生型NSCLC相比存在83个差异表达基因,其中30个基因出现表达水平的显著上调；53个基因出现显著下调。这些差异表达基因经注释和富集分析,涉及5个生物学过程和4条信号转导通路。 结论 差异表达基因间具有一定的“相关性”,很少出现单个或是几个基因参与某个生物过程。EML4-ALK融合型肺癌形成并非某个分子的生物学行为,上述这些基因功能和信号转导通路的变化相互交错、互相影响,最终构成了EML4-ALK融合型NSCLC区别其他肺癌的分子基础。 第二部分EML4-ALK信号通路关键基因STAT3的初步功能验证 第一章STAT3表达产物的蛋白质相互作用网络构建 目的 将与STAT3基因产物相互作用的蛋白质构建相互作用网络,以此为依托探索其中的核心蛋白STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中的作用。以期从蛋白质相互作用水平阐述STAT3勺异常与该型肺癌的联系。 材料与方法 以EML4-ALK融合型肺癌和野生型肺癌差异表达基因为基础,应用cytoscape(v2.8)软件系统构建蛋白质相互作用网络,在蛋白质数据库SWISS-PORT、HPRD中检索相关蛋白质相互作用并结合文献数据挖掘构建与STAT3基因产物相互作用的网络,对STAT3在肺癌参与的信号通路进行富集分析,并与EML4-ALK出现异常的生物学行为和信号转导网络进行比对。 Selleckchem GDC-941 结果 以肺癌中与STAT3存在相互作用的蛋白质为基础,构建蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction, PPI)。之现113个蛋白与STAT3相互作用,涉及至少23条与肺癌显著相关的生物学过程、分子功能及信号转导通路；将其进行功能聚类后与EML4-ALK融合型肺癌中出现异常表达的基因集求交集(与非ALK融合型非小细胞肺癌比较,ALK融合型肺癌存在83个异常表达基因。见第一部分第二章结果部分),发现STAT3调节的ALK、GHR两个分子在EML4-ALK型肺癌中异常表达；STAT3参与调节的Wnt通路在EML4-ALK融合型肺癌中也表达失调。

因为 结论 STAT3通过与ALK的直接相互作用,可能参与EML4-ALK融合型肺癌的发生与增殖；该基因调节的Wnt等信号通路在EML4-ALK融合型肺癌中亦存在异常。这些发现揭示了STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中的重要作用,有必要对STAT3基因的功能在EML4-ALK融合型肺癌中的作用进行进一步验证。 第二章模式细胞中STAT3的表达对其生物学特性的影响 目的 根据生物信息学分析,STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中发挥了重要的信号转导功能。本研究应用表达载体介导的RNAi技术及分子克隆技术,构建STAT3干扰或过表达载体并通过在模式细胞中控制该基因表达,探索EML4-ALK融合型肺癌中沉默或上调STAT3信号通路后肿瘤细胞生物学行为的改变。

方法 细胞培养：复苏表达EML4-ALK融合基因的人肺腺癌H2228及EGFR/K-RAS野生型肺腺癌细胞株H1299,并用含10%胎牛血清的RPMI1640传代培养。 确定shRNA-STAT3序列：根据Genebank中检索到人STAT3全长开发读码框(open reading frame, ORF),调取3条不同的RNAi Consortium数据库中经商业验证的shRNA-STAT3序列,并进行BLAST验证比对。 重组载体pSilencer4.1_CMV_STAT3的构建与鉴定：以这三条验证有效的siRNA干扰序列为基础,遵从Ambion公司提供的pSilencer4.1_CMV载体构建说明,将其设计为特异性的shRNA-STAT3单链模板。将合成的3对单链寡核苷酸经HPLC纯化、等比例混合退火后,与经BamHI和Hind Ⅲ双酶切线性化的pSilencer4.1_CMV按说明书建议比例以T4DNA连接酶16℃过夜连接；环化成功的质粒转化DH5a;以Amp筛选阳性克隆并挑取之,然后过夜摇菌扩增；小提质粒双向测序鉴定；中提并纯化成功构建的干扰质粒pSilencer4.1_CMV_STAT3,分装备用。 克隆STAT3基因：根据Genebank检索到人STAT3基因最长转录本的开发读码框(open reading frame, 和 ORF),设计带有酶切位点的引物,以H2228细胞总cDNA为模板进行扩增 重组质粒pcDNA3.1+STAT3的构建及鉴定：将模板扩增PCR产物纯化后与克隆载体pMD-18T连接,转化感受态、筛选阳性克隆并扩增；抽提质粒行双向测序等鉴定。中提并纯化重组质粒,分装保存等步骤获取重组载体pcDNA3.1+STAT3。 瞬时转染：应用Roche Fugene6转染系统,将重组质粒和对照质粒转染人肺腺癌细胞株H2228和H1299。 基因沉默效果检测：Real Time qPCR及Western Blotting检测各组细胞中STATS及其他肺癌中的关键通路蛋白表达状态。 基因沉默后生物学特性改变：流式细胞仪Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡指数。 结果 STAT3基因特异性沉默效果检测：用Western Blotting检测siRNA-STAT3-1和shRNA-STAT3-2干扰效果,具体分为5组：shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2、 shRNA-scrambled、vector和空白。在模式细胞株H2228中,STAT3蛋白表达下调分别为64±2.3%和52±3.7%,ERK1/2和AKT及相应的磷酸化程度无明显变化,：nTOR出现了表达下调,其磷酸化水平呈显著降低；在模式细胞H1299中,shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2分别使其STAT3表达下调65±3.1%和55±4.2%, ERK1/2, AKT,mTOR及对应的磷酸化蛋白无显著变化。scrambled、 vector和Fugene6三个对照组未造成STAT3表达水平在各细胞系的显著变化。 生物学特性的变化：干扰48小时后,Annexin V/PI双标记法检测发现H2228组右下象限凋亡早期细胞比例增高；H1299无显著变化。 STAT3基因过表达效果检测：用Real Time qPCR检测pcDNA3.1+STAT3转染H2228后的表达水平,具体分为3组：pcDNA3.